内质网分子伴侣GRP78在大鼠脊髓缺血再灌注损伤中的表达变化

目的观察在大鼠脊髓缺血再灌注损伤(SCII)过程中内质网分子伴侣GRP78的表达变化,并探讨其意义。方法健康成年Wistar大鼠55只,随机分为两组:(1)脊髓压迫缺血再灌注组50只,每个时间点10只,采用自制压迫装置制备脊髓压迫缺血再灌注模型;(2)假手术对照组5只,只做全椎板切除不做脊髓压迫。用免疫组化、West-ernblot和TUNEL等方法,分别于缺血再灌注后30min、3、7、11和23h,检测压迫段脊髓组织中GRP78的表达变化及细胞凋亡情况。结果再灌注30min后,GRP78在压迫段脊髓开始表达上调,7h达峰值,11h表达回落,23h显著减少。TUNEL染色显示,神经细胞的凋亡指数随着再灌注时间的延长而升高。结论GRP78在脊髓缺血再灌注损伤中呈现时序性的表达变化,这可能是脊髓内源性保护机制之一。

内质网分子伴侣GRP78在小鼠脑发育过程中的时空表达

多细胞生物体发育的实质是基因的选择性表达,表达蛋白的成熟有赖于分子伴侣的协助,但迄今分子伴侣特别是内质网分子伴侣在脑发育过程中的作用尚不清楚。本文应用RT-PCR、蛋白质免疫印迹和免疫组织化学的方法研究了小鼠发育不同阶段的脑组织中GRP78的表达和定位分布随时间变化的情况。结果发现GRP78在小鼠脑发育过程中呈时空性表达:胚胎早期表达较高,胚胎发育末期逐渐下降,出生后逐渐升高,至生后一周时达到成年鼠的水平;在胚胎期GRP78蛋白在脑组织的表达呈现从端脑到后脑逐渐降低的趋势。研究结果还表明GRP78蛋白的免疫染色阳性产物在神经细胞中出现的时间早于神经胶质细胞。这些首次观察到的结果提示GRP78与脑的早期发生和形态建成有一定的关系。

人癌细胞内质网分子伴侣Grp94基因近3′端的初步分析

采用PCR及RT－PCR方法结合核酸分子杂交技术，首次确定了与Grp94cDNA2231～2500碱基片段对应的Grp94基因序列上有内含子．含有内含子的扩增片段长约708bP．对三种癌细胞系进行了PCR和RT－PCR反应，电泳结果显示存在差异．研究结果为进一步探讨Grp94基因3'端精细结构及其在正常细胞和肿瘤细胞中表达的改变打下了基础．

葡萄糖调节蛋白GRP78和GRP94在小鼠脑发育过程中的差异表达

为探讨葡萄糖调节蛋白GRP78和GRP94在小鼠脑发育过程中的生物学意义,利用蛋白质免疫印迹、免疫荧光及RNA印迹技术,检测了发育不同时期小鼠脑组织中GRP78、GRP94的表达及分布情况.结果显示:小鼠脑发育过程中GRP78、GRP94的表达在时间和空间上呈现出显著差异,在脑发育的早中期GRP78表达水平高于GRP94,随发育的进程GRP78不断下降而GRP94逐渐升高,至胚胎发育晚期GRP94表达水平高于GRP78.在E16.5的不同脑区,GRP78的表达呈现出从端脑到后脑逐渐递减的“浓度梯度”分布,而GRP94在不同脑区中表达相同.小鼠出生后,二者作为应激蛋白在脑组织中的表达没有明显的差异性.免疫荧光结果显示,GRP78和GRP94在大脑组织中的分布基本相同,神经细胞和神经胶质细胞的细胞质均有分布.这些观察得到的结果提示,GRP78和GRP94与神经细胞分化和脑的形态建成有关,它们分别在脑发育的不同时期起作用.

GRP78在肿瘤治疗及预后中的作用

肿瘤细胞为了适应低糖、低氧和低钙等慢性应激反应,可诱导葡萄糖调节蛋白78（glucose regulated protein,GRP78）的表达。GRP78作为内质网主要分子伴侣之一,在蛋白质的折叠和转运过程及内质网应激反应中发挥重要作用。目前研究表明,GRP78还可增强肿瘤细胞的增殖、侵袭能力以及对抗癌药物的耐受性,

GRP78的表达与癌症治疗和预后的关系

GRP78作为一种分子伴侣在蛋白质的折叠和转运过程及内质网应激反应中发挥重要作用。它在多种肿瘤组织中呈高表达，反义抑制其表达水平或将GRP78启动子连接自杀基因可用于肿瘤行为和治疗反应的生物标记。抑制GRP78表达可能代表根除残留肿瘤的新方法。而且，对于GRP78在癌细胞表面而不是正常组织的近期研究表明，针对GRP78的定向治疗是可行的。

内质网分子伴侣Grp94在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨胃癌组织中Grp94的表达及其与胃癌病理类型、临床分期及分化程度等的关系。方法 胃癌切除手术标本 3 0例 ,用半定量逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR )检测Grp94mRNA相对表达量 ;免疫组织化学方法检测Grp94蛋白表达情况。结果 半定量RT PCR显示癌组织与癌旁组织中都有Grp94mRNA表达 ,癌组织为 0 .5 2± 0 .12 ,癌旁组织为 0 .14± 0 .0 4。前者的表达水平显著高于后者 ,其表达程度与肿瘤大小成正比 ,并随着细胞分化的降低而增高 ,Ⅲ、Ⅳ期病人显著高于Ⅰ、Ⅱ期 ;与患者性别、年龄、转移无关。免疫组织化学结果为 :癌组织大多数表达在 ～ ,癌旁组织大多表达在 -～ ,癌组织表达程度显著高于癌旁正常组织。Grp94蛋白表达程度与肿瘤大小、细胞分化、临床分期有关。结论 胃癌组织的Grp94表达呈增高趋势 ;应用Grp抑制剂或应用反义抑制战略可能抑制中晚期胃癌的生长 。

缺血预处理通过减轻内质网应激保护全脑缺血大鼠

目的探讨抑制内质网应激（endoplasmic reticulum stress，ERS）在缺血预处理诱导脑缺血耐受中的作用。方法120只成年雄性Sprague—Dawley大鼠，随机分为假手术组、全脑缺血组和缺血预处理组（缺血预处理3min，2d后全脑缺血15min），设1、3和7d共3个时间点。应用Sugawara法观察大鼠行为学变化，TUNEL染色观察皮质神经元凋亡情况，免疫荧光染色和蛋白质印迹分析检测ERS相关蛋白CHOP、GRP78和胱天蛋白酶-12表达情况。结果神经行为学评分显示，假手术组无神经功能缺损，全脑缺血组和缺血预处理组均出现明显的神经功能缺损，而且随着时间推移出现逐步改善，但全脑缺血组在模型制作后各时间点的神经功能评分均显著性低于缺血预处理组：1d时：（11．00±0．63）分对（14．33±0．33）分（t=21．74，P=0．001）；3d时：（12．17±0．31）分对（15．17±0．48）分（t=27．93，P=0．000）；7d时：（14．67±0．49）分对（16．33±0．33）分（t=7．81，P=0．020）。TUNEL染色显示，缺血后7d时，假手术组、全脑缺血组和缺血预处理组每娜奇TUNEL染色阳性细胞计数分别为（4．83±1．85）个、（395．67±43．43）个和（146．17±27．38）个（F=23．62，P=0．001），缺血预处理组显著性低于全脑缺血组（P=0．001）。免疫荧光染色显示，缺血后7d时，缺血预处理组CHOP[（26．50±3．89）个对（82．33±4．25）个；P=0．000]、GRP78[（15．00±2．02）对（35．67±2．99）个；P=0．000]和胱天蛋白酶一12[（22．33±2．76）个对（66．50±7．25）个；P=0．000]阳性细胞数量均显著性少于全脑缺血组。蛋白质印迹法显示，缺血后7d时，缺血预处理组CHOP[（1．22±0．38）对（3．22±0．51）；t=24．50，P=0．001]、GRP78[（1．78±0．45）对（3．16±0．76）；t=14．29，P=0．005]和胱天蛋白酶-12[（2．89±0．53）对（5．96±0．67）；t=77．73；P=0．000]表达显著性低于全脑缺血组。结论缺血预处理对第2次致死性缺血表现出神经保护作用，其机制可能与ERS减轻，ERS相关蛋白表达下调有关。

内质网应激在心脏的作用

内质网是真核细胞中最重要的膜性细胞器之一，其功能主要有蛋白质合成、折叠与修饰及将蛋白质运送到细胞中合适的位置。内质网分子伴侣如GRP78、GRP94、钙联蛋白和钙网蛋白等组成疏水性结构域，促进未折叠蛋白正确折叠和蛋白质之间的集聚。内质网通过对蛋白质折叠水平细微变化的检测，并将这些信息传递给细胞的其他部分，通过系统调节产生应答。由于各种应激如心肌梗死、缺血再灌注损伤等伤害性刺激导致细胞内质网内蛋白质折叠功能发生紊乱而致其稳态失衡。