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ω-3多不饱和脂肪酸改善2型糖尿病研究进展
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作者 周梦柔 兰咏梅 阿赛古丽 《生物过程》 2024年第1期34-42,共9页
2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus, T2DM)是遗传与环境共同作用的结果,目前公认的2型糖尿病的病理生理变化主要涉及到胰岛素抵抗和胰岛β细胞功能受损。许多研究显示,在T2DM发生发展过程中,炎症与氧化应激是调控胰岛素分泌的重要发... 2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus, T2DM)是遗传与环境共同作用的结果,目前公认的2型糖尿病的病理生理变化主要涉及到胰岛素抵抗和胰岛β细胞功能受损。许多研究显示,在T2DM发生发展过程中,炎症与氧化应激是调控胰岛素分泌的重要发病因素。ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3 polyunsaturated fatty acid, ω-3PUFAs)在调节炎症反应、糖脂代谢、氧化与抗氧化反应等方面具有重要作用。但能否有效改善T2DM的发病风险,目前尚存争议。本文结合近年来国内外的相关研究进展,综述了ω-3PUFAs在T2DM发病风险的具体作用机制。探讨饮食营养对改善T2DM的意义,为ω-3PUFAs改善T2DM以及相关营养干预提供依据。 展开更多
关键词 2糖尿病 ω-3多不饱和脂肪酸 炎症 氧化应激 胰岛素抵抗 胰岛Β细胞
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番茄内质网ω-3脂肪酸去饱和酶基因表达载体的构建与转化 被引量:2
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作者 于超 王华森 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期90-94,共5页
内质网型ω-3脂肪酸去饱和酶(FAD3)是不饱和脂肪酸合成途径中催化十八碳二烯酸[18∶2(9,12)]转化为十八碳三烯酸[18∶3(9,12,15)]的关键酶。通过RT-PCR的方法从番茄叶片克隆到LeFAD3的全长cDNA,基因全长为1 184bp,开放阅读框(ORF)为1 13... 内质网型ω-3脂肪酸去饱和酶(FAD3)是不饱和脂肪酸合成途径中催化十八碳二烯酸[18∶2(9,12)]转化为十八碳三烯酸[18∶3(9,12,15)]的关键酶。通过RT-PCR的方法从番茄叶片克隆到LeFAD3的全长cDNA,基因全长为1 184bp,开放阅读框(ORF)为1 134bp,注册号为EU251190。将该基因正反向序列分别插入带有35S-CaMV启动子pBI121表达载体下游,获得正、反义表达载体,转化农杆菌LBA4404,利用农杆菌介导法转化番茄,获得转基因番茄植株。 展开更多
关键词 番茄 内质网型ω-3脂肪酸去饱和酶 三烯脂肪酸 表达载体
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T2DM患者血游离脂肪酸、ω-3多不饱和脂肪酸、饱和脂肪酸变化及与糖尿病肾病发生的相关性
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作者 陈青云 廖继成 李晨 《联勤军事医学》 CAS 2024年第9期753-757,共5页
目的探究2型糖尿病(diabetes mellitus type 2,T2DM)患者血游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)、ω-3多不饱和脂肪酸(omega-3 polyunsaturated fatty acid,ω-3PUFA)、饱和脂肪酸水平变化及与糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)发... 目的探究2型糖尿病(diabetes mellitus type 2,T2DM)患者血游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)、ω-3多不饱和脂肪酸(omega-3 polyunsaturated fatty acid,ω-3PUFA)、饱和脂肪酸水平变化及与糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)发生的相关性。方法随机选取2023-01/2023-12月作者医院收治的84例DKD患者纳入DKD组,选取同期60例单纯T2DM患者纳入T2DM组,另选取60例健康体检者纳入对照组。比较3组受试者FFA、ω-3PUFA及饱和脂肪酸水平,检测并比较3组受试者肾功能血尿酸(uric acid,UA)、血肌酐(creatinine,Cr)、肾小球滤过率(glomerular filtration rate,eGFR)和尿蛋白水平。采用Pearson法分析DKD患者血FFA、ω-3PUFA及饱和脂肪酸水平与肾功能UA、Cr、eGFR和尿蛋白水平的相关性。根据eGFR水平将DKD患者分为预后良好组(n=49)和预后不良组(n=35),比较两组患者血FFA、ω-3PUFA、饱和脂肪酸水平。结果与对照组比较,DKD组、T2DM组患者FFA、饱和脂肪酸、UA、Cr、尿蛋白水平明显升高,ω-3PUFA、eGFR水平明显降低(P均<0.05);与T2DM组比较,DKD组患者FFA、饱和脂肪酸、UA、Cr、尿蛋白水平明显升高,ω-3PUFA、eGFR水平明显降低(P均<0.05)。Pearson相关性分析显示,FFA、饱和脂肪酸水平与UA、Cr、尿蛋白水平呈正相关关系,与eGFR水平呈负相关关系(P<0.05);而ω-3PUFA水平与UA、Cr、尿蛋白水平呈负相关关系,与eGFR水平呈正相关关系(P<0.05)。预后不良组DKD患者FFA、饱和脂肪酸水平高于预后良好组,而ω-3PUFA水平低于预后良好组(P均<0.05)。结论T2DM患者血FFA、饱和脂肪酸水平升高,且二者水平与DKD发生正相关,ω-3PUFA水平降低,且其水平与DKD发生负相关,并且在一定程度上可反映DKD预后情况。 展开更多
关键词 2糖尿病 糖尿病肾病 血游离脂肪酸 ω-3多不饱和脂肪酸 饱和脂肪酸水平 肾功能 相关性
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番茄内质网ω-3脂肪酸去饱和酶基因原核表达载体的构建与鉴定 被引量:1
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作者 丁一 王华森 于超 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期79-82,共4页
通过RT-PCR的方法从番茄叶片克隆到内质网ω-3脂肪酸去饱和酶(LeFAD3)基因的部分编码区,该片段cDNA为309 bp,将其克隆到pET-30a(+)载体中,酶切位点分别是BamHⅠ和SacⅠ,构建了原核表达载体pET-LeFAD3,并在大肠杆菌BL21中表达融合蛋白,经... 通过RT-PCR的方法从番茄叶片克隆到内质网ω-3脂肪酸去饱和酶(LeFAD3)基因的部分编码区,该片段cDNA为309 bp,将其克隆到pET-30a(+)载体中,酶切位点分别是BamHⅠ和SacⅠ,构建了原核表达载体pET-LeFAD3,并在大肠杆菌BL21中表达融合蛋白,经IPTG诱导蛋白表达,提取蛋白并采用SDS-PAGE和蛋白质免疫印迹法检测目的蛋白的表达情况。酶切鉴定结果表明,LeFAD3基因原核表达载体构建成功,目的蛋白成功表达。 展开更多
关键词 番茄 内质网型ω-3脂肪酸去饱和酶 原核表达载体
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ω-3多不饱和脂肪酸促进1型糖尿病模型小鼠胰岛β细胞再生的作用研究 被引量:2
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作者 邢朝凤 唐敏怡 +5 位作者 徐绮华 张宗猛 封文斌 穆云萍 李芳红 赵子建 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期2141-2148,共8页
目的探讨ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3 PUFAs)促进胰岛α细胞向β细胞转分化的作用。方法在小鼠胰岛α细胞系αTC1培养基中添加不同配比的ω-3 PUFAs,4周后,利用荧光染色观察胰岛素和胰高血糖素的表达,并通过荧光定量PCR(qRT-PCR)检测胰岛... 目的探讨ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3 PUFAs)促进胰岛α细胞向β细胞转分化的作用。方法在小鼠胰岛α细胞系αTC1培养基中添加不同配比的ω-3 PUFAs,4周后,利用荧光染色观察胰岛素和胰高血糖素的表达,并通过荧光定量PCR(qRT-PCR)检测胰岛α细胞和胰岛β细胞特异性基因表达情况。野生型(WT)组和mfat-1转基因组小鼠连续5天腹腔注射60 mg·kg^(-1)链脲佐霉素(streptozocin,STZ)。选取注射STZ 7周后的WT小鼠,给予97%EPA和75%鱼油(50%EPA和25%DHA)饮食干预,每周检测随机血糖。8周后,通过免疫荧光染色观察小鼠胰腺中胰岛β细胞再生情况。结果在DHA与EPA混合液培养以及与单独EPA培养后,胰岛α细胞可分泌胰岛素,而对照组细胞没有胰岛素染色阳性;qRT-PCR结果显示,经过ω-3 PUFAs处理的细胞中,胰岛β细胞特异性基因明显上调。注射STZ后,mfat-1组和饮食干预组小鼠不仅随机血糖水平明显低于WT组,而且免疫荧光结果显示mfat-1组和饮食干预组小鼠胰岛中出现胰岛素和胰高血糖素共定位的细胞。结论初步证明ω-3 PUFAs能够促进胰岛α细胞分泌胰岛素,缓解1型糖尿病小鼠的高血糖症状。 展开更多
关键词 ω-3多不饱和脂肪酸 1糖尿病 胰岛Α细胞 胰岛Β细胞 转分化 mfat-1转基因小鼠
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来源于线虫Caenorhabditis briggssae的ω-3脂肪酸去饱和酶基因的合成及其功能分析 被引量:9
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作者 朱贵明 陈宏 +4 位作者 周艳荣 卢建申 吴晓洁 陈红星 邓继先 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期763-771,共9页
ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3PUFAs)是一类被广泛研究和关注的脂肪酸,对人类及其他哺乳动物的正常发育和保持良好的健康状况极其重要,并且对于人类的多种疾病的预防和治疗亦有着明显的作用。在人和哺乳动物体内,ω-3PUFAs的含量与ω-6PUFAs... ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3PUFAs)是一类被广泛研究和关注的脂肪酸,对人类及其他哺乳动物的正常发育和保持良好的健康状况极其重要,并且对于人类的多种疾病的预防和治疗亦有着明显的作用。在人和哺乳动物体内,ω-3PUFAs的含量与ω-6PUFAs(其代谢方式和功能与前者不同,通常其作用也相反)相比很低。而对于人体,无论ω-3PUFAs的过低还是ω-6PUFAs的过高都会带来极为不利的影响。所以人们一直在努力寻求提高人体中ω-3PUFAs含量的途径或者大量生产ω-3PUFAs的方法。本研究经过密码子优化后,用化学合成的方法获得了C.briggsae的ω-3脂肪酸去饱和酶基因sFat-1,并构建了哺乳动物细胞表达载体pcDNA3.1-sFat1-EGFP,通过脂质体转染了CHO细胞系并对其进行抗性筛选获得稳定转染细胞株。对稳定转染sFat-1细胞株的RT-PCR分析及脂肪酸组成的GC-MS分析表明,sFat1基因完全能够在CHO细胞中表达和发挥其ω-3去饱和酶的作用,即促使ω-6系列不饱和脂肪酸转变为相应的ω-3系列不饱和脂肪酸(从十八碳到二十二碳)。ω-6不饱和脂肪酸总量从48.97%下降到35.29%,而ω-3不饱和脂肪酸总量则相应地从7.86%上升到24.02%。ω-6多不饱和脂肪酸和ω-3多不饱和脂肪酸的比值从正常细胞中的6.23下降到转染细胞中的1.47。这说明C.briggsae的ω-3脂肪酸去饱和酶基因sFat-1的合成是成功的,试验所获得的结果为今后的进一步的研究或应用其大量生产ω-3PUFAs奠定了基础。 展开更多
关键词 ω-3脂肪酸去饱和基因 多不饱和脂肪酸 基因合成 脂肪酸分析
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ω-3多不饱和脂肪酸对绝经后女性2型糖尿病患者内皮功能影响的研究 被引量:8
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作者 陶凯 陈景海 +3 位作者 余玉慧 杨丽翠 胡型忠 孙慧艳 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2015年第10期1061-1065,共5页
目的绝经后女性2型糖尿病患者的心脑血管疾病发病形式严峻。文中旨在探讨ω-3多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acid,PUFA)对绝经后女性2型糖尿病患者内皮功能的影响。方法选择温州医科大学定理临床学院2014年3月至2014年10月连续... 目的绝经后女性2型糖尿病患者的心脑血管疾病发病形式严峻。文中旨在探讨ω-3多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acid,PUFA)对绝经后女性2型糖尿病患者内皮功能的影响。方法选择温州医科大学定理临床学院2014年3月至2014年10月连续收治的50例绝经后女性2型糖尿病患者为研究对象,随机数字法随机分为A组、B组,每组25人。采用二阶段交叉设计:第一阶段(试验前3个月)A组口服ω-3 PUFA,B组口服安慰剂;第二阶段(试验后3个月)A组口服安慰剂,B组口服ω-3 PUFA。T1、T3时间分别为第一、二阶段试验开始时;T2、T4时间分别为第一、二阶段试验刚结束时,于每个阶段开始、结束时检测患者LDL-C、TG、IL-6、纤溶指标血浆纤溶酶原激活物抑制剂-1(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)和内皮依赖性血流介导的舒张功能(flow-mediated vasodilation,FMD)。结果第一阶段A组干预后,T1时间FMD、LDL-C、TG、IL-6、PAI-1含量分别为(3.62±2.13)%、(3.36±0.57)mmol/L、(2.96±1.12)mmol/L、(3.42±0.32)ng/L、(58.8±26.2)ng/m L,T2时间分别为(7.23±3.28)%、(2.85±0.47)mmol/L、(2.41±1.06)mmol/L、(2.83±0.30)ng/L、(42.6±18.7)ng/m L,T2时间FMD较T1显著升高,其他指标均显著降低(P<0.05);第二阶段B组干预后,T3时间FMD、LDL-C、TG、IL-6、PAI-1含量分别为(3.60±2.18)%、(3.63±0.73)mmol/L、(2.77±1.25)mmol/L、(3.30±0.52)ng/L、(56.3±24.4)ng/m L,T4时间分别为(6.88±2.06)%、(3.26±0.77)mmol/L、(2.28±0.94)mmol/L、(2.91±0.48)ng/L、(45.7±24.4)ng/m L,T4时间FMD较T3显著升高,其他指标均显著降低(P<0.05)。结论ω-3 PUFA能够改善绝经后女性2型糖尿病患者的内皮功能,对心血管疾病的一级预防具有重要意义。 展开更多
关键词 ω-3多不饱和脂肪酸 2糖尿病 绝经女性 内皮功能
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植物ω-3脂肪酸去饱和酶的研究进展 被引量:10
8
作者 刘训言 孟庆伟 李滨 《细胞生物学杂志》 CSCD 北大核心 2004年第1期34-38,共5页
众多的ω-3脂肪酸去饱和酶是由来源于同一祖先基因的多基因家族的成员编码的,定位于质体或内质网膜上。它们催化十八碳三烯酸(18:3)和十六碳三烯酸(16:3)的生物合成,使脂肪酸形成第三个双键。它们在改变植物膜脂脂肪酸的组成、提高其不... 众多的ω-3脂肪酸去饱和酶是由来源于同一祖先基因的多基因家族的成员编码的,定位于质体或内质网膜上。它们催化十八碳三烯酸(18:3)和十六碳三烯酸(16:3)的生物合成,使脂肪酸形成第三个双键。它们在改变植物膜脂脂肪酸的组成、提高其不饱和度、叶绿体的发育及叶片成熟过程中三烯脂肪酸含量的增加、抗冷性的增强、低温光抑制后光合能力的恢复等方面具有重要作用。近年来,许多植物的ω-3脂肪酸去饱和酶基因已被克隆,并在这些基因的表达调控、遗传转化及转基因植株生理功能研究等方面取得了较大进展。 展开更多
关键词 植物 ω-3脂肪酸去饱和 研究进展 膜脂脂肪酸组成 生理功能 低温胁迫
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ω-3多不饱和脂肪酸对2型糖尿病患者糖脂代谢的影响 被引量:3
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作者 王锋 杨立刚 孙桂菊 《食品安全质量检测学报》 CAS 2015年第10期3907-3910,共4页
2型糖尿病已成为当前威胁全球人类健康最重要的慢性非传染性疾病之一。2型糖尿病患者常伴有不同程度的脂代谢紊乱,血脂异常可导致糖尿病多种并发症的发生,最终威胁糖尿病患者的生命。近年来,ω-3多不饱和脂肪酸对心血管疾病的保护效应... 2型糖尿病已成为当前威胁全球人类健康最重要的慢性非传染性疾病之一。2型糖尿病患者常伴有不同程度的脂代谢紊乱,血脂异常可导致糖尿病多种并发症的发生,最终威胁糖尿病患者的生命。近年来,ω-3多不饱和脂肪酸对心血管疾病的保护效应成为医学及营养学界关注的热点,然而在研究不同来源ω-3多不饱和脂肪酸,特别是植物性来源ω-3多不饱和脂肪酸对2型糖尿病患者糖脂代谢的影响方面则要落后和迟缓一些。为此,本文综述了不同来源ω-3多不饱和脂肪酸与2型糖尿病发病风险及其对2型糖尿病患者糖脂代谢的影响,以期为推动2型糖尿病营养治疗提供参考。 展开更多
关键词 ω-3多不饱和脂肪酸 2糖尿病 糖脂代谢
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过表达ω-3多不饱和脂肪酸脱氢酶基因fat-1保护小鼠胚胎成纤维细胞避免凋亡 被引量:1
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作者 李芳芳 葛银林 +3 位作者 薛美兰 张金玉 李泉 单虎 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期755-760,共6页
由于膳食原因,人体摄入ω-6PUFAs/ω-3PUFAs比例过高,脂类代谢严重失衡.鉴于ω-3PUFAs获取困难而且人体无催化ω-6PUFAs向ω-3PUFAs转化的ω-3多不饱和脂肪酸脱氢酶,本研究体外扩增来源于秀丽线虫(Caenorhabditis elegans)的ω-3多不饱... 由于膳食原因,人体摄入ω-6PUFAs/ω-3PUFAs比例过高,脂类代谢严重失衡.鉴于ω-3PUFAs获取困难而且人体无催化ω-6PUFAs向ω-3PUFAs转化的ω-3多不饱和脂肪酸脱氢酶,本研究体外扩增来源于秀丽线虫(Caenorhabditis elegans)的ω-3多不饱和脂肪酸脱氢酶基因(fat-l)cDNA,构建了真核表达载体pEGFPC1-fat-1,将该基因转染入小鼠胚胎成纤维细胞;激发荧光与RT-PCR方法检测转染pEGFPC1-fat-1细胞表达该基因,气相色谱分析显示该转染细胞中ω-6PUFAs/ω-3PUFAs的比例降低;细胞抑制率实验显示转染细胞的MTT吸光值升高(P<0.05);双染法流式细胞仪分析转染细胞凋亡降低,结果表明fat-1基因即使在高浓度ω-6PUFAs的细胞毒作用下,依然能够发挥将ω-6PUFAs脱氢转化为与ω-3PUFAs的生理功能,抑制3T3细胞凋亡,促进细胞生长增殖,实现了较强的细胞保护功能. 展开更多
关键词 ω-3多聚不饱和脂肪酸脱氢 基因表达 胚胎成纤维细胞 细胞凋亡
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牛胎儿成纤维细胞的分离培养及转染线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因 被引量:1
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作者 于永生 罗晓彤 +1 位作者 张立春 朴庆林 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2011年第23期12-16,共5页
为利用核移植法获取转基因克隆牛提供供体细胞,体外分离培养牛胎儿成纤维细胞并进行了携带线虫ω-3脂肪酸去饱和酶cDNA的表达载体转染。首先采用组织块贴壁法分离培养牛胎儿成纤维细胞,线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因表达载体以脂质法介导... 为利用核移植法获取转基因克隆牛提供供体细胞,体外分离培养牛胎儿成纤维细胞并进行了携带线虫ω-3脂肪酸去饱和酶cDNA的表达载体转染。首先采用组织块贴壁法分离培养牛胎儿成纤维细胞,线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因表达载体以脂质法介导转染牛胎儿成纤维细胞,通过G418筛选获得稳定转染的细胞克隆,PCR鉴定外源基因在细胞基因组中的整合,对阳性克隆进行传代2~3次后利用RT-PCR检测外源基因的转录。结果表明,组织块贴壁后7天可获取原代成纤维细胞,基因转染后利用G418筛选9天即可获得转基因细胞,对转基因细胞进行传代,PCR检测显示CMV启动子和ω-3脂肪酸去饱和酶cDNA整合到细胞基因组中,RT-PCR检测显示ω-3脂肪酸去饱和酶mRNA在转基因传代细胞中得到有效转录,为下一步通过核移植方法获得转基因肉牛提供了基础。 展开更多
关键词 牛胎儿成纤维细胞 线虫ω-3脂肪酸去饱和 基因转染 脂质体
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ω-3多不饱和脂肪酸对2型糖尿病患者血脂及炎症因子的影响 被引量:6
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作者 高啸波 金永新 +5 位作者 李铎 李静 高瑞华 李丹丹 陈维煜 方玲 《中国食物与营养》 2017年第1期69-72,共4页
目的:观察不同成分的ω-3PUFA对2型糖尿病患者血脂水平及C反应蛋白和白介素-6的影响。方法:采用随机双盲对照方法,将108例2型糖尿病患者随机分为3组,分别服用含有不同成分(ALA、EPA、DHA)的ω-3PUFA胶囊4g/d,观察时间为6个月,A组(金枪... 目的:观察不同成分的ω-3PUFA对2型糖尿病患者血脂水平及C反应蛋白和白介素-6的影响。方法:采用随机双盲对照方法,将108例2型糖尿病患者随机分为3组,分别服用含有不同成分(ALA、EPA、DHA)的ω-3PUFA胶囊4g/d,观察时间为6个月,A组(金枪鱼油组,胶囊成分为ω-3PUFA-DHA+EPA)、B组(亚麻籽油组,胶囊成分为ω-3PUFA-ALA)、C组(玉米油组,对照组)。分别在基线、3个月、6个月时检测血脂、白介素-6和C反应蛋白等,进行统计学分析。结果:(1)组内比较:A组在3个月时HDL较治疗前升高,其差异具有统计学意义(P<0.05),6个月时具有显著统计学差异(P<0.01);6个月时,TC水平较治疗前降低,其差异具有统计学意义(P<0.05);B组和C组3月、6个月时,血脂无明显变化(均P>0.05)。组间比较:3个月时,3组患者血脂水平均无显著差异(P均>0.05);6个月时A组和C组之间HDL水平差异具有统计学意义(P<0.05)。(2)组内比较:A组CRP和IL-6水平在3个月时均较治疗前降低,其差异具有统计学意义(P<0.05),6月时具有显著统计学差异(P<0.01);B组和C组3个月、6个月时,CRP和IL-6水平无明显变化(P均>0.05)。组间比较:3个月时,3组CRP和IL-6水平均无显著差异(P均>0.05);6个月时A组和C组之间CRP和IL-6水平差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:服用ω-3PUFA(金枪鱼油,胶囊成分ω-3PUFA-DHA+EPA)4g/d可以升高2型糖尿病患者高密度脂蛋白,降低总胆固醇水平,并能降低糖尿病患者C反应蛋白和白介素-6水平。 展开更多
关键词 2糖尿病 ω-3多不饱和脂肪酸 动脉粥样硬化 C反应蛋白 白介素-6
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牛耳皮肤成纤维细胞的分离培养及转染线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因研究
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作者 于永生 罗晓彤 +2 位作者 曹阳 张立春 王晓阳 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期87-90,98,共5页
为了核移植法制作转线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因克隆牛提供供体细胞,体外分离培养牛耳成纤维细胞并进行了线虫-ω3脂肪酸去饱和酶基因。采用胰蛋白酶消化法分离培养牛耳皮肤成纤维细胞,线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因表达载体以脂质法介导... 为了核移植法制作转线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因克隆牛提供供体细胞,体外分离培养牛耳成纤维细胞并进行了线虫-ω3脂肪酸去饱和酶基因。采用胰蛋白酶消化法分离培养牛耳皮肤成纤维细胞,线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因表达载体以脂质法介导转染细胞,通过G418筛选9 d获得稳定转染的细胞克隆。PCR鉴定外源基因在细胞基因组中的整合,对阳性克隆进行传代2~3次后,利用RT-PCR检测外源基因的转录。结果表明:细胞贴壁后9 d可获取原代皮肤成纤维细胞,基因转染后利用G418筛选9 d即可获得转基因细胞,对转基因细胞进行传代,PCR检测显示CMV启动子和ω-3脂肪酸去饱和酶基因整合到细胞基因组中,RT-PCR检测显示ω-3脂肪酸去饱和酶基因在转基因传代细胞中得到有效转录。本研究为下一步通过核移植方法获得转基因肉牛提供了条件。 展开更多
关键词 牛耳皮肤成纤维细胞 线虫ω-3脂肪酸去饱和 基因转染 脂质体
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麻疯树叶绿体ω-3脂肪酸去饱和酶的BIBAC文库筛选及其生物信息学分析
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作者 付瑜华 夏志强 +1 位作者 王海燕 王文泉 《中国农学通报》 CSCD 2012年第31期21-28,共8页
旨在建立麻疯树BIBAC文库筛选目的基因快捷高效的方法,并对其克隆的叶绿体ω-3脂肪酸去饱和酶基因进行生物信息学分析。本研究利用高密度杂交膜从麻疯树BIBAC文库中筛选到含有叶绿体ω-3脂肪酸去饱和酶基因的克隆,对其测序并用生物信息... 旨在建立麻疯树BIBAC文库筛选目的基因快捷高效的方法,并对其克隆的叶绿体ω-3脂肪酸去饱和酶基因进行生物信息学分析。本研究利用高密度杂交膜从麻疯树BIBAC文库中筛选到含有叶绿体ω-3脂肪酸去饱和酶基因的克隆,对其测序并用生物信息软件对获得全长序列及编码的蛋白质序列的特性进行分析。将筛选到的阳性克隆进行测序,并将该序列与麻疯树叶绿体ω-3脂肪酸去饱和酶基因进行比对,相似性达到99%,证实此克隆为含叶绿体ω-3脂肪酸去饱和酶基因(JcFAD7)的BIBAC克隆。麻疯树叶绿体ω-3脂肪酸去饱和酶基因长度为2655bp,含有8个外显子和7个内含子,编码525个氨基酸。该基因编码的蛋白质为不具有信号肽的亲水性蛋白,二级结构元件多为α-螺旋和无规则卷曲,含有2个大的跨膜区域,在麻疯树中为单拷贝。本研究建立了高密度杂交膜从BIBAC文库中筛选目的基因快速高效的方法,同时也验证了该方法的可行性并对克隆到的基因进行了生物信息学分析。 展开更多
关键词 叶绿体ω-3脂肪酸去饱和 高密度杂交膜 SOUTHERN杂交 生物信息学
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Mistic融合蛋白促进ω-3脂肪酸去饱和酶Fat-1在大肠埃希菌中高效表达 被引量:1
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作者 赵艳 柳欣欣 +3 位作者 王大新 李湘鸣 陈平 王昊 《重庆医学》 CAS 北大核心 2016年第16期2190-2193,共4页
目的构建真核膜蛋白ω-3脂肪酸去饱和酶Fat-1基因在大肠埃希菌中的高效表达质粒。方法利用分子克隆技术构建携带Fat-1基因的重组原核表达质粒pET32a-Fat-1和插入膜蛋白表达分子伴侣Mistic基因的pET32a-Mistic-Fat-1;将两种重组质粒转化... 目的构建真核膜蛋白ω-3脂肪酸去饱和酶Fat-1基因在大肠埃希菌中的高效表达质粒。方法利用分子克隆技术构建携带Fat-1基因的重组原核表达质粒pET32a-Fat-1和插入膜蛋白表达分子伴侣Mistic基因的pET32a-Mistic-Fat-1;将两种重组质粒转化大肠埃希菌株BL21(DE3),IPTG诱导表达Fat-1蛋白和M110-Fat-1蛋白,通过十二烷基-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)灰度分析其表达量,蛋白免疫印迹法(Western blot)进一步鉴定蛋白表达。结果经酶切鉴定和测序证实成功构建了pET32a-Fat-1和pET32a-Mistic-Fat-1原核表达载体;SDS-PAGE和Western blot证实ω-3脂肪酸去饱和酶Fat-1在原核表达系统中没有明显诱导表达,而M110-Fat-1融合蛋白在大肠埃希菌中获得了高效表达,占全细胞蛋白总量的15%。结论ω-3脂肪酸去饱和酶Fat-1基因与Mistic基因融合表达,实现了在原核宿主中高效表达真核膜整合蛋白ω-3脂肪酸去饱和酶Fat-1。 展开更多
关键词 Mistic ω-3脂肪酸去饱和Fat-1基因 膜蛋白 高效表达
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ω-3多聚不饱和脂肪酸脱氢酶的真核表达及鉴定 被引量:1
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作者 吴静 杨利敏 +2 位作者 施振声 黄立纲 刘文军 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期44-47,共4页
目的:构建ω-3多聚不饱和脂肪酸脱氢酶真核表达载体,并在293T细胞(人胚肾细胞)中实现表达。方法:通过RT-PCR法扩增得到ω-3多聚不饱和脂肪酸脱氢酶基因fat1,构建重组真核表达载体pCMV-Myc-fat1,用脂质体法转染293T细胞,Western blot检测... 目的:构建ω-3多聚不饱和脂肪酸脱氢酶真核表达载体,并在293T细胞(人胚肾细胞)中实现表达。方法:通过RT-PCR法扩增得到ω-3多聚不饱和脂肪酸脱氢酶基因fat1,构建重组真核表达载体pCMV-Myc-fat1,用脂质体法转染293T细胞,Western blot检测fat1的表达,并用间接免疫荧光(IFA)确定其在293T细胞中的定位情况。结果:构建真核表达质粒pCMV-Myc-fat1,转染293T细胞后,可检测到细胞内有fat1的表达并确定其在细胞中的位置。结论:成功构建真核表达质粒pCMV-Myc-fat1,可检测出细胞内有fat1的表达并确定其在细胞膜和细胞质内均有表达,为进行fat1的功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 ω-3多聚不饱和脂肪酸脱氢 fat1 人胚肾细胞
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n-3多不饱和脂肪酸辅助治疗2型糖尿病的临床效果观察 被引量:2
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作者 滑丽美 张力 +3 位作者 吴明月 杨雅茗 雷敏 于建敏 《临床误诊误治》 CAS 2021年第5期38-43,共6页
目的观察n-3多不饱和脂肪酸辅助治疗2型糖尿病的临床效果。方法选取2018年3月—2019年5月就诊的2型糖尿病70例,按照辅助治疗方法不同将其分为研究组和对照组两组各35例。研究组给予鱼油软胶囊(含n-3多不饱和脂肪酸)辅助治疗,对照组给予... 目的观察n-3多不饱和脂肪酸辅助治疗2型糖尿病的临床效果。方法选取2018年3月—2019年5月就诊的2型糖尿病70例,按照辅助治疗方法不同将其分为研究组和对照组两组各35例。研究组给予鱼油软胶囊(含n-3多不饱和脂肪酸)辅助治疗,对照组给予大豆油胶囊辅助治疗,均口服治疗4周。观察比较两组治疗前后营养指标、血糖指标、血脂指标和氧化应激指标,以及治疗期间不良反应发生情况。结果治疗前,两组营养指标、血糖指标、血脂指标和氧化应激指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗后,研究组空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、胰岛素抵抗指数(IR)、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和丙二醛(MDA)均低于治疗前,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)均高于治疗前;FBG、HbA1c、IR、甘油三酯、LDL-C和MDA均低于对照组,HDL-C和GSH-Px均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。治疗期间,两组均无相关不良反应发生。结论n-3多不饱和脂肪酸辅助治疗2型糖尿病患者可在一定程度上改善血糖、血脂和氧化应激状态,从而有望减少心血管等并发症发生。 展开更多
关键词 糖尿病 2 N-3多不饱和脂肪酸 血糖 血脂 谷胱甘肽过氧化物 丙二醛
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野生蕉ω-3脂肪酸去饱和酶基因FAD7密码子偏性分析 被引量:2
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作者 赖志宸 林玉玲 《福建农业学报》 CAS 北大核心 2017年第5期503-507,共5页
为了解FAD7的密码子使用特性,试验采用CodonW、SPSS19.0、MEGA5.0等软件和EMBOSS在线程序对野生蕉FAD7密码子偏性进行分析,同时与其他单/双子叶植物FAD7和模式生物基因组进行比较。结果显示,野生蕉FAD7密码子偏性水平较弱,密码子组成和... 为了解FAD7的密码子使用特性,试验采用CodonW、SPSS19.0、MEGA5.0等软件和EMBOSS在线程序对野生蕉FAD7密码子偏性进行分析,同时与其他单/双子叶植物FAD7和模式生物基因组进行比较。结果显示,野生蕉FAD7密码子偏性水平较弱,密码子组成和结尾偏好使用G或C,而CUC、CAG和AGG等在该基因中具有较高的使用频率;物种间FAD7比较结果发现,单子叶植物FAD7密码子组成明显偏好G或C,而双子叶植物则完全相反;基于密码子使用频率FAD7聚类结果与CDS分类结果一致,均能将单/双子叶植物区分开来;此外,大肠杆菌原核表达受体系统可作为野生蕉FAD7基因异源表达理想试验体系。研究结果为野生蕉FAD7后续结构和功能研究提供了科学依据。 展开更多
关键词 野生蕉 密码子偏性 ω-3脂肪酸去饱和 聚类分析
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ω-3多不饱和脂肪酸对吸烟男性2型糖尿病患者内皮功能影响的研究 被引量:1
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作者 蔡晓盛 杨立善 +4 位作者 陶凯 余玉慧 陈景海 陈颖 周乐 《中国现代医生》 2017年第36期10-14,共5页
目的探讨ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3 PUFA)对吸烟男性2型糖尿病(T2DM)患者内皮功能影响。方法将60例吸烟男性T2DM患者按随机原则分为A、B两组,每组30例。采取2个阶段交叉实验设计,每阶段3个月。第1阶段A组口服ω-3 PUFA片,B组口服安慰剂,... 目的探讨ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3 PUFA)对吸烟男性2型糖尿病(T2DM)患者内皮功能影响。方法将60例吸烟男性T2DM患者按随机原则分为A、B两组,每组30例。采取2个阶段交叉实验设计,每阶段3个月。第1阶段A组口服ω-3 PUFA片,B组口服安慰剂,两组剂型相同,每天早晚各1片,第1阶段实验开始和结束时间为T1和T2;经1个月药物洗脱期后,第2阶段两组治疗措施互换,B组服用ω-3 PUFA,A组服用安慰剂,第2阶段实验开始和结束时间为T3和T4。于每个阶段开始和结束时间检测患者内皮依赖性血流介导的舒张功能(FMD)、空腹血糖、GHB、TC、LDL-C、HDL、TG、IL-6、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)。结果第1阶段A组治疗后T2时间FMD较T1时间显著升高,TG、LDL-C、IL-6、PAI-1较T1显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。第2阶段B组治疗后T4时间FMD较T3时间显著升高,TG、LDL-C、IL-6、PAI-1较T3显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论ω-3 PUFA可改善吸烟男性T2DM患者内皮功能,对心脑血管预防保护有重要作用。 展开更多
关键词 ω-3多不饱和脂肪酸 2糖尿病 吸烟 男性 内皮功能
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富含ω-3多不饱和脂肪酸克隆猪制备的关键技术研究 被引量:4
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作者 潘登科 陈红星 +2 位作者 冯书堂 李奎 邓继先 《中国畜牧兽医》 CAS 2007年第5期22-25,共4页
作者综述了制备富含ω-3多不饱和脂肪酸克隆猪的研究意义和国内外的研究现状,并介绍了自己的研究进展。用化学合成的方法获得了Cbriggsae的ω-3脂肪酸去饱和酶基因sFat-1,并构建了哺乳动物细胞表达载体。通过显微注射的方法制备了转基... 作者综述了制备富含ω-3多不饱和脂肪酸克隆猪的研究意义和国内外的研究现状,并介绍了自己的研究进展。用化学合成的方法获得了Cbriggsae的ω-3脂肪酸去饱和酶基因sFat-1,并构建了哺乳动物细胞表达载体。通过显微注射的方法制备了转基因小鼠,sFat-1基因能够在转基因小鼠中产生更多更长链的而且更有价值的DHA以及DPA。在确认sFat-1基因功能的基础上,将载体转染到猪胎儿成纤维细胞,利用阳性的细胞克隆通过核移植方式制备富含ω-3多不饱和脂肪酸克隆猪。 展开更多
关键词 ω-3脂肪酸去饱和基因 多不饱和脂肪酸 sFat1 转基因小鼠 克隆猪
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