黄芪颗粒联合微RNA-30a对肾病综合征小鼠肾组织中内质网应激相关蛋白、有丝分裂原活化蛋白激酶蛋白和血清炎症因子水平的影响

目的探讨黄芪颗粒联合微RNA(miR)-30a对肾病综合征小鼠内质网应激、炎症水平和有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)蛋白表达的影响。方法将50只小鼠随机分为对照组(n=10)和模型组(n=40)。模型组小鼠经尾静脉注射阿霉素溶液(7.5 mg·kg^(-1))制备原发性肾病综合征(PNS)模型,对照组小鼠经尾静脉注射等体积的生理盐水。造模成功后将模型组小鼠随机分为PNS组、黄芪组、miR-30a组和黄芪+miR-30a组,每组10只。黄芪组小鼠灌胃黄芪颗粒冲剂(20 mg·g^(-1)),每日2次;miR-30a组小鼠经尾静脉注射miR-30a antagomir(10 mg·kg^(-1)),每周1次;黄芪+miR-30a组小鼠灌胃黄芪颗粒冲剂(20 mg·g^(-1),每周1次),同时经尾静脉注射miR-30a antagomir(10 mg·kg^(-1));模型组和对照组小鼠灌胃与黄芪组等量的生理盐水,每日1次;各组小鼠均干预4周。于给药0、2、4周时检测各组小鼠24 h尿蛋白;于末次给药24 h后,应用全自动生物化学分析仪检测各组小鼠血清中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、血尿素氮(BUN)和血肌酐(Scr)水平,采用酶联免疫吸附试验法检测各组小鼠血清中白细胞介素(IL)-6、IL-8和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,苏木精-伊红染色观察各组小鼠肾组织病理学变化,免疫组织化学法检测各组小鼠肾组织中糖调节蛋白-78(GRP-78)和激活转录因子6(ATF6)的表达,Western blot法检测各组小鼠肾组织中GRP-78、ATF6、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK)、线粒体外活化蛋白激酶(ERK)、磷酸化线粒体外活化蛋白激酶(p-ERK)蛋白表达。结果PNS组、黄芪组、miR-30a组和黄芪+miR-30a组小鼠给药0、2、4周时24 h尿蛋白显著高于对照组(P<0.05)。给药2、4周时,黄芪组、miR-30a组和黄芪+miR-30a组小鼠的24 h尿蛋白显著低于PNS组(P<0.05);黄芪组与miR-30a组小鼠的24 h尿蛋白比较差异无统计学意义(P>0.05);黄芪+miR-30a组小鼠24 h尿蛋白显著低于黄芪组和miR-30a组(P<0.05)。PNS组、黄芪组、miR-30a组和黄芪+miR-30a组小鼠血清中TC、TG、BUN、Scr水平显著高于对照组(P<0.05);黄芪组、miR-30a组和黄芪+miR-30a组小鼠血清中TC、TG、BUN、Scr水平显著低于PNS组(P<0.05);黄芪组与miR-30a组小鼠血清中TC、TG、BUN、Scr水平比较差异无统计学意义(P>0.05);黄芪+miR-30a组小鼠血清中TC、TG、BUN、Scr水平显著低于黄芪组和miR-30a组(P<0.05)。PNS组、黄芪组、miR-30a组和黄芪+miR-30a组小鼠血清中IL-6、IL-8、TNF-α水平显著高于对照组(P<0.05);黄芪组、miR-30a组和黄芪+miR-30a组小鼠血清中IL-6、IL-8、TNF-α水平显著低于PNS组(P<0.05);黄芪组与miR-30a组小鼠血清中IL-6、IL-8、TNF-α水平比较差异无统计学意义(P>0.05);黄芪+miR-30a组小鼠血清中IL-6、IL-8、TNF-α水平显著低于黄芪组和miR-30a组(P<0.05)。对照组小鼠肾小球排列规则,无明显炎症细胞浸润;PNS组小鼠肾小球排列不规则,有大量炎症细胞浸润到肾间质;与PNS组相比,黄芪组和miR-30a组小鼠肾组织病理学变化得到明显改善,肾间质炎症细胞浸润明显减少;黄芪+miR-30a组小鼠肾间质偶见炎症细胞。PNS组、黄芪组、miR-30a组和黄芪+miR-30a组小鼠肾组织中GRP-78、ATF6蛋白相对表达量及p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK/ERK比值显著高于对照组(P<0.05);黄芪组、miR-30a组和黄芪+miR-30a组小鼠肾组织中GRP-78、ATF6蛋白相对表达量及p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK/ERK比值显著低于PNS组(P<0.05);黄芪组与miR-30a组小鼠肾组织中GRP-78、ATF6蛋白相对表达量及p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK/ERK比值比较差异无统计学意义(P>0.05);黄芪+miR-30a组小鼠肾组织中GRP-78、ATF6蛋白相对表达量及p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK/ERK比值显著低于黄芪组和miR-30a组(P<0.05)。结论黄芪颗粒联合miR-30a可显著降低肾病综合征小鼠内质网应激,减轻炎症反应,抑制肾组织中MAPK蛋白的表达。

内质网应激在代谢相关脂肪性肝病中的作用机制研究进展

随着人类生活方式的改变,代谢相关脂肪性肝病(metabolic dysfunctionassociated fatty liver disease,MAFLD)的患病人群急剧扩张,目前MAFLD位于全世界慢性肝病的首位。MAFLD可进一步发展为肝纤维化、肝硬化甚至肝细胞癌,严重威胁人类健康。但目前其发病机制不明确,尚无批准的治疗手段。因此,越来越多的学者研究MAFLD的发病机制,而内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)引发的未折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR)对MAFLD的发展有着重要影响,其参与胰岛素抵抗、脂质代谢、炎症和自噬等多个环节。本文将总结MAFLD疾病特征及ERS在MAFLD的作用机制和研究现状,对发现MAFLD治疗靶点至关重要。

乙型肝炎病毒大表面蛋白诱导内质网应激调控p27 IRES翻译活性的机制研究

目的探讨在乙型肝炎病毒大表面蛋白(LHB)诱导的内质网应激条件下,抑癌基因p275′UTR内部核糖体进入位点(IRES)的活性变化及其调控机制。方法构建双荧光素酶报告质粒,用双荧光素酶报告基因实验检测p275′UTR中IRES的活性;利用qRT-PCR和Western blotting检测LHB诱导的未折叠蛋白反应相关分子水平;RNA下拉、质谱技术和RNA免疫沉淀筛选并确认潜在的与p275′UTR结合的相关蛋白;siRNA转染建立PCBP2和ANXA2敲低细胞模型,用双荧光素酶报告基因检测在敲低PCBP2和ANXA2后p27 IRES翻译活性的变化。结果成功构建了检测p27 IRES活性的双荧光素酶报告质粒。LHB可以诱导内质网应激,同时显著提高p27的IRES翻译活性(P<0.01)。LHB过表达激活了PERK通路并提高了eIF2α的磷酸化水平,特异性PERK通路抑制剂GSK2606414使RERK和eIF2α的磷酸化水平降低,从而引起p275′UTR的IRES翻译活性显著降低(P<0.01,P<0.05)。同时,磷酸酶抑制剂Sal003能显著增加eIF2α磷酸化水平,使p27 IRES活性进一步增强(P<0.01,P<0.05)。最后,我们发现PCBP2和ANXA2作为潜在的反式作用因子可增强p27 IRES活性。结论LHB诱导的内质网应激通过eIF2α磷酸化增强p27 IRES翻译活性。反式作用因子PCBP2和ANXA2正向调控其IRES翻译活性。

p38 MAPK通路调控自噬-内质网应激途径介导草酸钙肾结石形成的机制研究

目的 探究p38 MAPK通路对大鼠草酸钙(CaOx)肾结石形成的影响及其作用机制,为肾结石的治疗选择提供新的思路。方法 将40只大鼠分为对照组、SB203580组、CaOx组、SB203580+CaOx组,每组10只,CaOx组和SB203580+CaOx组以1%乙二醇与1%氯化铵配制的混合液灌胃建立CaOx肾结石模型,对照组和SB203580组以饮用水灌胃;造模后,SB203580组和SB203580+CaOx组腹腔注入剂量为5 mg/kg的SB203580,1次/d,连续注射14 d,对照组和CaOx组腹腔注入等体积生理盐水。称量大鼠肾脏质量并计算肾脏系数,全自动生化分析仪检测血清中血清尿素氮(BUN)和血肌酐(SCr)水平,酶联免疫吸附法(ELISA)测定尿液中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)和肾损伤分子-1(KIM-1)水平,钙盐染色(Von Kossa)观察黑色晶体沉积及组织损伤情况,原位末端标记法(TUNEL)观察肾小管细胞凋亡情况,免疫组化染色检测自噬标记物表达,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)与蛋白质印迹(Western blotting)测定自噬及内质网应激途径相关分子表达。结果 与CaOx组比较,SB203580+CaOx组大鼠造模后体质量较高(P<0.05),肾脏质量、肾脏系数、BUN、SCr、NGAL、KIM-1水平均较低(P<0.05),肾脏组织病理损伤减轻且黑色结晶明显减少,TUNEL阳性细胞比例、LC3B与Beclin-1阳性表达面积占比、LC3B、Beclin-1、CHOP、GRP78 mRNA表达、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白比值、Beclin-1、CHOP、GRP78蛋白表达均下调(P<0.05),p62 mRNA和蛋白表达上调(P<0.05)。结论 p38 MAPK通路参与大鼠CaOx肾结石形成,抑制该通路能够减少肾结石形成,该作用可能与其调控自噬-内质网应激有关。

具核梭杆菌诱导内质网应激相关蛋白GRP 78及XBP 1高表达在食管鳞癌中的临床意义

【目的】分析食管鳞癌(ESCC)中具核梭杆菌(Fn)对内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)及X盒结合蛋白1(XBP1)的诱导效应,并探讨其潜在机制及临床意义。【方法】采用Fn感染ESCC细胞KYSE150及KYSE140不同时间(12 h、24 h及48 h),通过氧化应激指标试剂盒及Western blot检测各组细胞中氧化应激指标(ROS、MDA与SOD)及GRP78与XBP1的表达情况。实验分为Fn组,Fn+siNC1组,Fn+siGRP78组,Fn+siNC2组及Fn+siXBP1组,比较各组细胞中氧化应激指标、紫杉醇(PTX)应答效力、增殖、侵袭及转移能力差异。采用RNA scope及免疫组化法检测234例ESCC组织及癌旁组织中Fn感染及GRP78与XBP1的表达情况。利用卡方检验分析各因素与患者临床病理特征之间的相关性。采用Kaplan-Meier生存分析比较各因素对患者生存期的影响。【结果】与Fn未感染的KYSE150及KYSE140组细胞相比,Fn感染组(12 h、24 h及48 h)细胞中ROS与MDA含量逐渐增加,SOD活性逐渐降低,且GRP78及XBP1表达量逐渐增高(均P<0.05)。与Fn组、Fn+siNC1组及Fn+siNC2组相比,Fn+siGRP78组及Fn+siXBP1组细胞中ROS与MDA含量减少,SOD活性增强,PTX应答效力增强,增殖、侵袭及转移能力减弱(均P<0.05)。ESCC组织中Fn感染率、GRP78及XBP1阳性率分别为43.16%、69.66%及60.68%,三者具有显著一致性(P<0.05)。Fn感染阳性、GRP78及XBP1高表达的患者多为有吸烟、饮酒史的男性患者,且肿瘤分化程度低、浸润程度深、淋巴结转移率高、临床分期多为Ⅲ/Ⅳ期。三者阳性组的患者5年生存期均缩短(P<0.05)。【结论】Fn可通过诱导GRP78及XBP1高表达,引发内质网应激,促进ESCC恶性演进。

内质网应激PERK-eIF2α-AFT4-CHOP信号通路在血液肿瘤中的研究进展

在生理状态下,内质网主要负责蛋白质的生物合成和成熟。然而,当机体稳态受到内外因素干扰破坏后,引发内质网中未折叠和错误折叠蛋白的累积,进而诱导产生内质网应激和未折叠蛋白反应(UPR)。在内质网应激条件下,未折叠蛋白反应可通过不同途径来维持细胞内稳态,其中活化蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)是其重要途径之一。活化的PERK使真核翻译起始因子2亚基α(eIF2α)磷酸化,引发活性转录因子4(ATF4)选择性翻译,并与促凋亡转录因子C/EBP同源蛋白(CHOP)的启动子直接结合诱导细胞凋亡。该信号通路也是UPR参与血液肿瘤细胞和免疫细胞调节的重要机制之一。本文阐述了PERK-eIF2α-ATF4-CHOP信号通路在血液肿瘤中的研究进展,以及靶向该信号通路在血液肿瘤治疗中的潜在价值。

内质网应激相关因子氧调节蛋白150在子宫腺肌症中的表达及临床意义

目的:探讨内质网应激相关因子氧调节蛋白150(ORP150)在子宫腺肌症中的表达及临床意义。方法:回顾性选取2020年4月—2022年4月海安市人民医院收治并接受手术治疗的88例子宫腺肌症患者作为研究对象作为研究组,另选取本院同期收治的92例子宫肌瘤患者作为对照组,检测和比较两组的血清ORP150、血管内皮生长因子(VEGF)表达水平,并分析子宫腺肌症患者血清ORP150与VEGF表达之间的相关性,分析子宫腺肌症患者血清ORP150表达和临床病理特征之间的关系。结果:研究组血清ORP150和VEGF表达水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,子宫腺肌症患者血清ORP150与VEGF的表达水平呈明显正相关关系(P<0.05)。88例子宫腺肌症患者中,不同病理类型、异位腺体处于不同时期患者的血清ORP150表达比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:ORP150在子宫腺肌症患者血清中表达水平较高,其与血清VEGF呈正相关性,并与患者病理类型、异位腺体所处时期的病理特征有关。

SEL1L分子及内质网相关降解途径在肿瘤进展中的作用

lin-12-like抑制/增强子(suppressor/enhancer of lin-12-like,SEL1L)分子可以参与调控多种肿瘤进展;同时,其作为内质网相关降解途径(endoplasmic reticulum-associated degradation,ERAD)的重要组成,还参与调控蛋白质合成,与内质网应激(ER stress)及其引起的未折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR)密切相关。在肿瘤微环境中,ERAD不仅参与调控肿瘤细胞的生物学行为,对肿瘤进展发挥重要作用;其还参与对免疫细胞增殖分化、功能以及代谢途径的调节,影响免疫细胞发挥抗肿瘤免疫作用。因此,深入了解探索肿瘤微环境中SEL1L分子及ERAD的潜在机制,可为肿瘤发生、发展及免疫治疗提供新理论和新靶点。本文就SEL1L分子及其参与的内质网相关降解途径在肿瘤进展与免疫调节中的作用进行简要综述。

金水缓纤方对肺纤维化大鼠肺组织内质网应激/未折叠蛋白反应通路的影响

目的观察金水缓纤方对肺纤维化大鼠肺组织内质网应激/未折叠蛋白反应(ERS/UPR)通路的影响.方法选择32只SPF级SD大鼠,按随机数字法分为正常对照组、模型组、金水缓纤方组与吡非尼酮组,每组8只.采用一次性气管内注射博来霉素(5 mg/kg)复制肺纤维化大鼠模型.于制模前1d和制模后28 d、42d测定大鼠肺功能;制模后42d处死大鼠取肺部组织,行苏木素-伊红(HE)染色和Masson染色观察各组大鼠肺组织病理学改变;采用原位末端缺刻标记试验(TUNLE)测定肺组织细胞凋亡情况;采用定量比色法测定肺组织羟脯氨酸(HYP)含量;采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)测定葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、X-框结合蛋白1(XBP-1)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)的mRNA表达水平;采用蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)测定E-钙黏蛋白(E-cad)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、GRP78、XBP-1、磷酸化真核细胞翻译起始因子-2α(p-eIF2α)、CHOP、Smad2/3的蛋白表达水平.结果与正常对照组比较,制模后42d模型组大鼠肺功能指标潮气量(TV)、呼气峰流速(PEF)、吸气峰流速(PIF)均明显下降[TV(mL):1.55±0.24比2.39±0.37,PEF(mL/s):17.64±2.79比21.94±3.05,PIF(mL/s):18.30±3.99比26.95±2.09,均P<0.05],气道狭窄指数(Penh)明显升高(0.71±0.12比0.52±0.05,P<0.05);光镜观察肺组织病理学改变可见:模型组肺泡间隔增厚,肺泡和肺间质有广泛炎症细胞浸润,且胶原纤维大量沉积,肺泡炎和肺纤维化评分均明显升高[肺泡炎评分(分):2.50±0.84比0.17±0.41,肺纤维化评分(分):6.17±1.17比0.33±0.52,均P<0.01];肺组织HYP含量、细胞凋亡指数(AI)和GRP78 mRNA、XBP-1 mRNA、CHOP mRNA及p-eIF2α、α-SMA、GRP78、XBP-1、CHOP、Smad2/3的蛋白表达水平均明显增加[HYP(μg/g):16.98±3.58比11.57±2.35,AI:(24.27±2.73)%比(1.40±0.78)%,GRP78 mRNA(2^(-ΔΔCt)):5.01±0.57比1.00±0.12,XBP-1 mRNA(2^(-ΔΔCt)):2.20±0.39比1.00±0.25,CHOP mRNA(2^(-ΔΔCt)):2.40±0.45比1.00±0.14,α-SMA/GAPDH:1.24±0.15比0.17±0.04,GRP78/GAPDH:1.50±0.11比0.07±0.02,XBP-1/GAPDH:1.97±0.10比0.61±0.06,p-eIF2α/GAPDH:1.21±0.18比0.11±0.02,CHOP/GAPDH:1.32±0.15比0.04±0.02,Smad2/3/GAPDH:1.12±0.17比0.19±0.12,均P<0.01],E-cad的蛋白表达水平明显降低(E-cad/GAPDH:0.34±0.07比1.44±0.19,P<0.01).与模型组比较,金水缓纤方组和吡非尼酮组TV、PEF、PIF均升高[TV(mL):2.03±0.17、2.10±0.36比1.55±0.24,PEF(mL/s):21.84±3.43、19.25±2.06比17.64±2.79,PIF(mL/s):22.78±2.67、24.25±2.16比18.30±3.99],Penh明显降低(0.58±0.10、0.58±0.11比0.71±0.12,均P<0.05),肺组织病理学变化显著改善,胶原纤维有所减少,金水缓纤方组和吡非尼酮组肺泡炎和肺纤维化评分均明显降低[肺泡炎评分(分):1.50±0.55、1.33±1.03比2.50±0.84,肺纤维化评分:4.67±1.37、3.83±1.17比6.17±1.17,均P<0.05],HYP含量、AI明显减少[HYP(μg/g):13.31±2.94、13.20±2.21比16.98±3.58,AI:(5.20±1.20)%、(7.43±1.79)%比(24.27±2.73)%,均P<0.05],肺组织GRP78、XBP-1、CHOP的mRNA表达和α-SMA、GRP78、XBP-1、p-eIF2α、CHOP、Smad2/3的蛋白表达水平均降低[GRP78 mRNA(2^(-ΔΔCt)):1.64±0.35、2.10±0.22比5.01±0.57,XBP-1 mRNA(2^(-ΔΔCt)):1.75±0.40、1.06±0.30比2.20±0.39,CHOP mRNA(2^(-ΔΔCt)):1.94±0.16、1.83±0.32比2.40±0.45,α-SMA/GAPDH:0.46±0.14、0.48±0.23比1.24±0.15,GRP78/GAPDH:0.75±0.03、0.56±0.05比1.50±0.11,XBP-1/GAPDH:1.16±0.07、0.62±0.06比1.97±0.10,p-eIF2α/GAPDH:0.81±0.12、0.61±0.09比1.21±0.18,CHOP/GAPDH:0.49±0.10、0.30±0.06比1.32±0.15,Smad2/3/GAPDH:0.71±0.12、0.76±0.20比1.12±0.17,均P<0.05],E-cad的蛋白表达升高(E-cad/GAPDH:0.57±0.11、0.76±0.07比0.34±0.07,均P<0.05).结论金水缓纤方能改善肺功能,减少胶原沉积,减轻肺纤维化,其机制与其作用ERS/UPR通路抑制上皮间质转化和细胞凋亡有关.

内质网应激在肝脏疾病中的作用及机制研究进展

肝脏疾病病种繁多且病因不明,严重影响人类健康。内质网是维持细胞内稳态的关键细胞器,然而其长期暴露于危险因素会引发内质网应激(ERS),并伴随下游信号通路的异常活化。ERS可导致肝细胞脂质积累,并诱发炎症、氧化损伤和凋亡,引起肝损伤,促进多种肝脏疾病的发生发展。然而,ERS也可通过若干机制保护肝细胞,如通过启动内质网相关降解和自噬降低细胞内压力,恢复细胞功能并维持胞内稳态;诱发受感染细胞、癌细胞的凋亡以阻断疾病进展等。因此,靶向ERS或其通路中的关键蛋白有望成为治疗肝脏疾病的有效方法。

天香丹通过GRP78/NLRP3信号通路调控内质网应激抗动脉粥样硬化的作用机制研究

目的:基于葡萄糖调节蛋白78(GRP78)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路探讨天香丹通过调控内质网应激抗动脉粥样硬化的作用机制。方法:将雄性载脂蛋白E基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠随机分为模型组、阿托伐他汀组、天香丹组,每组11只,给予高脂饲料诱导动脉粥样硬化模型;另取10只雄性C57BL/6J小鼠作为正常组。于造模10周后给予相应药物治疗,连续干预12周。采用苏木精-伊红(HE)染色观法察胸主动脉病理特点;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素18(IL-18)、活性氧(ROS)含量;免疫组织化学法(IHC-P)检测胸主动脉中GRP78和NLRP3蛋白阳性表达水平。结果:各实验组存活6只。与模型组比较,阿托伐他汀组和天香丹组IL-1β、IL-18、ROS表达含量均降低(P<0.05或P<0.01);GRP78、NLRP3蛋白阳性表达均明显减少(P<0.05或P<0.01)。结论:天香丹能有效改善动脉粥样硬化性心血管疾病小鼠炎症反应,其作用机制可能与调控内质网应激GRP78/NLRP3信号通路抑制炎症小体活化、减轻动脉粥样硬化炎症损伤有关。

内质网应激头颈部鳞状细胞癌细胞通过外泌体miR⁃26a⁃5p调控PTEN/AKT通路促进巨噬细胞PD⁃L1表达

目的探讨内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)的头颈部鳞状细胞癌(head and neck squa⁃mous cell carcinoma,HNSCC)细胞分泌的外泌体miRNA表达变化对巨噬细胞的影响机制。方法本研究已通过单位伦理委员会审查批准。通过蛋白质免疫印迹(Western blot,WB)和实时荧光定量PCR实验(RT⁃qPCR)检测HNSCC肿瘤组织及癌旁组织ERS相关蛋白,包括蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R⁃like endoplas⁃mic reticulum kinase,PERK)和葡萄糖调节蛋白78(glucose⁃regulated protein 78,GRP78)的表达水平;以500 U/mL干扰素⁃γ(interferon⁃γ,IFN⁃γ)处理人喉鳞癌细胞系HN4细胞48 h,诱发HN4细胞产生内质网应激反应,收集HN4细胞分泌的外泌体,通过生物信息学分析鉴定外泌体的miRNA种类,预测miRNA的靶基因,将巨噬细胞转染miRNA、与收集的外泌体共培养、并敲低巨噬细胞PTEN表达,以WB和RT⁃qPCR检测外泌体miRNA调控的下游信号通路蛋白酪氨酸磷酸酶(phosphate and tension homology deleted on chromsome ten,PTEN)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)及程序性死亡受体⁃1配体(programmed death receptor ligand 1,PD⁃L1)表达变化。结果HNSCC肿瘤组织相比癌旁组织ERS相关蛋白表达水平升高(P<0.05);RNA测序及实验验证表明ERS的HN4细胞分泌的外泌体miR⁃26a⁃5p表达上调(P<0.05);PTEN是miR⁃26a⁃5p的靶基因,miR⁃26a⁃5p升高巨噬细胞PD⁃L1表达水平,并下调PTEN表达(P<0.05);巨噬细胞与ERS外泌体共培养,miR⁃26a⁃5p和PD⁃L1表达上升,PTEN表达下降,p⁃AKT表达升高(P<0.05);敲低巨噬细胞PTEN表达,PD⁃L1表达上升(P<0.01)。结论ERS的HNSCC细胞通过外泌体miR⁃26a⁃5p调控PTEN/AKT通路及PD⁃L1的表达。

基于内质网应激反应探究针刺治疗卒中后抑郁的机制

卒中后抑郁(Post Stroke Depression,PSD)发生在脑卒中后,以情感低落、兴趣丧失、自我价值感下降、睡眠障碍等症状为主要临床表现。为探究针刺治疗PSD的具体分子机制,作者通过查阅近年来PubMed、CNKI、万方、维普等国内外数据库的资料和文献,将PSD与内质网应激反应(endoplasmic reticulum stress,ERS)的关系及针刺通过干预ERS来治疗PSD的临床研究和动物实验研究进行总结分析,厘清ERS的发生机制以及针刺干预ERS的可能靶点。该文章得出推论,针刺可能通过调节ERS相关通路蛋白,抑制炎症反应及超负荷ERS介导的细胞凋亡来改善PSD患者的临床症状。因此,该研究将针刺治疗手段调控PSD后发生ERS的相关靶点机制进行归纳,以期日后为针刺治疗PSD的可探索靶点方向提供新的思路及一定的科学依据。

内质网应激诱导内质网自噬的分子机制

内质网应激是细胞在应对缺氧、营养缺乏等情况时产生的保护性应激反应,通过诱导未折叠蛋白质反应的3条通路来缓解内质网的蛋白质堆积。内质网应激通过内质网自噬受体诱导的内质网自噬,是降解不易被未折叠蛋白质反应途径降解的未折叠或错误折叠的蛋白质,以及恢复内质网形态结构的重要途径。哺乳动物和酵母细胞中存在多种内质网自噬受体,主要功能为促进内质网碎片的形成,并捕获自噬底物,将内质网碎片和未折叠或错误折叠的蛋白质递送至自噬溶酶体中进行降解。每种内质网自噬受体具有独特的结构导致它们捕获自噬底物的方式不尽相同;同时,内质网应激通过不同的途径调控内质网自噬受体的表达和磷酸化。因而,内质网应激通过不同的分子机制激活内质网自噬受体介导的内质网自噬。此外,内质网应激介导的内质网自噬在许多人类疾病的发生发展中发挥重要的作用。阐明内质网应激诱导内质网自噬的具体机制,为内质网自噬相关疾病的防治提供理论依据。因此,本文将综述内质网应激启动哺乳动物细胞中内质网自噬受体FAM134B、RTN3L、SEC62、CCPG1和酵母细胞中内质网自噬受体Atg39、Atg40、Erp1介导的内质网自噬的分子机制,以及内质网应激诱导的内质网自噬与神经退行性疾病和肿瘤等人类疾病的联系,为内质网自噬相关疾病的防治提供新策略。

内质网应激与心血管疾病的研究进展

内质网(ER)是真核细胞最主要的膜性结构,是细胞内重要生理过程发生的关键细胞器。在多种内外因素的作用下,ER的稳态受到破坏,导致蛋白质加工运输受阻,未折叠蛋白或错误折叠蛋白在ER腔内聚集,形成内质网应激(ERS),并触发未折叠蛋白反应(UPR)。适度的ERS通过UPR信号通路减少蛋白质合成、促进蛋白质降解、增加协助蛋白质折叠的分子伴侣,最终缓解ER压力。但是,如果ERS过强或持续时间过长,超过细胞的自身调节能力时,UPR可启动细胞凋亡,亦可导致疾病。大量研究表明,ERS与多种心血管疾病(CVD)的发生发展密切相关。该综述主要阐述UPR在几种常见CVD中的研究进展和靶向UPR作为CVD的潜在治疗方法。

黄连化浊胶囊对分泌及Ras相关GTP酶1A敲除诱导的外被蛋白Ⅱ功能障碍胰岛β细胞内质网应激的干预效果

目的考察黄连化浊胶囊对分泌及Ras相关GTP酶1A(sar-1A)敲除诱导的外被蛋白Ⅱ(COP-Ⅱ)功能障碍胰岛β细胞内质网应激的干预效果。方法将小鼠胰岛β细胞Min6分为空白组(Min6细胞无任何干预)、阴性对照(NC)组(Min6细胞转染sar-1A-NC-siRNA)及sar-1A siRNA组(Min6细胞转染sar-1A siRNA)。收集sar-1A siRNA转染的Min6细胞,分为空白血清组(用含10%大鼠空白血清的培养基培养),5%、10%、20%黄连化浊胶囊组(分别用含5%、10%、20%黄连化浊胶囊含药血清的培养基培养),以及罗格列酮组(用含10%罗格列酮含药血清的培养基培养)。采用qPCR检测Min6细胞中sar-1A miRNA的表达、免疫荧光法检测sec31蛋白的表达,蛋白质印迹法检测胰岛素原、磷酸化真核翻译起始因子2α(p-eIF2α)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、X盒结合蛋白1(XBP1)、肌醇需求酶1(IRE1)、X盒(X-box)蛋白的表达。结果空白组与NC组Min6细胞中sar-1A mRNA、sec31蛋白及胰岛素原、p-eIF2α、CHOP、XBP1、IRE1、X-box蛋白表达差异均无统计学意义(P均>0.05);与NC组相比,sar-1A siRNA组Min6细胞中sar-1A mRNA、sec31蛋白及胰岛素原和X-box蛋白表达均降低(P均<0.05),p-eIF2α、CHOP、XBP1、IRE1蛋白表达均升高(P均<0.05)。与空白血清组相比,5%、10%、20%黄连化浊胶囊组及罗格列酮组Min6细胞中sar-1A mRNA表达均升高(P均<0.05),5%、10%、20%黄连化浊胶囊组Min6细胞中sar-1A mRNA表达逐渐升高,各组间差异均有统计学意义(P均<0.05)。空白血清组与5%黄连化浊胶囊组Min6细胞中sec31蛋白及胰岛素原、p-eIF2α、CHOP、XBP1、IRE1、X-box蛋白表达差异均无统计学意义(P均>0.05);与5%黄连化浊胶囊组相比,10%、20%黄连化浊胶囊组及罗格列酮组Min6细胞中sec31蛋白和胰岛素原表达均增加(P均<0.05),p-eIF2α、CHOP、XBP1、IRE1、X-box蛋白表达均降低(P均<0.05)。结论sar-1A敲除后胰岛β细胞存在COP-Ⅱ功能障碍,黄连化浊胶囊能够降低sar-1A敲除后胰岛β细胞的内质网应激水平。

酸枣仁-合欢花对抑郁模型大鼠海马内质网应激IRE1α/ASK1/JNK通路的影响

目的基于内质网应激(ERS)肌醇依赖性激酶1α(IRE1α)/凋亡信号调节激酶1(ASK1)/c-Jun氨基末端激酶(JNK)通路探讨酸枣仁-合欢花对孤养结合慢性不可预见性温和应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)抑郁模型大鼠的干预作用。方法将144只大鼠随机分为正常组、模型组及酸枣仁-合欢花高、中、低剂量组和文拉法辛组。除正常组外,其他各组进行21 d的孤养结合CUMS制备大鼠抑郁模型。用旷场实验和Morris水迷宫实验观察大鼠行为学变化;用透射电镜观察海马神经细胞超微结构变化;用TUNEL染色法观察海马神经细胞凋亡情况;用Western Blot法检测海马组织IRE1α、磷酸化(P)-IRE1α、ASK1、P-ASK1、JNK、P-JNK、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)、胱天蛋白酶3(Caspase-3)蛋白表达水平;用Real-Time PCR法检测海马IRE1α、ASK1、JNK、Bax、Bcl-2、Caspase-3 mRNA表达水平。结果与正常组比较,模型组旷场实验中水平运动和垂直运动得分下降(P<0.01);水迷宫实验中逃避潜伏期增加、跨越原平台次数减少(P<0.01);海马神经细胞凋亡数增加(P<0.01);海马P-IRE1α/IRE1α、P-ASK1/ASK1、P-JNK/JNK、Bax、Caspase-3蛋白及IRE1α、ASK1、JNK、Bax、Caspase-3 mRNA表达水平升高、Bcl-2蛋白及mRNA表达水平降低(P<0.01)。与模型组比较,酸枣仁-合欢花各组及文拉法辛组旷场实验中水平运动和垂直运动得分升高(P<0.01);水迷宫实验中逃避潜伏期缩短、跨越原平台次数增加(P<0.01);海马神经细胞凋亡数减少(P<0.01);海马P-IRE1α/IRE1α、P-ASK1/ASK1、P-JNK/JNK、Bax、Caspase-3蛋白及IRE1α、ASK1、JNK、Bax、Caspase-3 mRNA表达水平降低,Bcl-2蛋白及mRNA表达水平升高(P<0.05,P<0.01),且酸枣仁-合欢花中剂量组较高、低剂量组效果更好。结论酸枣仁-合欢花可能通过调节内质网应激IRE1α/ASK1/JNK通路发挥抗抑郁作用。

内质网应激与内皮功能障碍关系及临床治疗研究进展

内皮功能障碍作为动脉粥样硬化的早期关键事件,不仅贯穿动脉粥样硬化病变全程,还与其他多种心血管疾病的发病密切相关。近年来有研究发现,内质网应激(ERS)相关蛋白在心血管疾病中的表达呈上升趋势,ERS可能通过促进内皮功能障碍加重心血管疾病的进展。现总结ERS与内皮功能障碍及动脉粥样硬化发病机制的关系,并介绍一些缓解ERS的药物,有望为临床实现内皮功能障碍及心血管疾病的治疗提供一定参考价值。

PERK通路在内质网应激诱导的中脑多巴胺能神经元死亡中作用

目的 探讨PERK通路在内质网应激诱导的中脑多巴胺能神经元变性死亡中的作用。方法 利用小鼠原代培养成纤维细胞,应用Western blot和免疫荧光染色法,观察内质网应激诱导剂毒胡萝卜素(thapsigargin)对PERK通路的激活,利用小鼠原代培养中脑多巴胺能神经元,应用TH免疫荧光染色法对存活的中脑多巴胺能神经元进行计数,以观察PERK抑制剂GSK2606414对长时程Thapsigargin处理诱导的中脑多巴胺能神经元死亡的影响。结果 在Thapsigargin处理后的原代成纤维细胞中p-PERK、p-eIF2α、ATF4水平均显著升高,Thapsigargin诱导中脑多巴胺能神经元死亡,PERK抑制剂GSK2606414可显著减少长时程Thapsigargin处理诱导的中脑多巴胺能神经元死亡。结论 内质网应激激活PERK通路;长时程内质网应激导致中脑多巴胺能神经元死亡,抑制PERK通路的激活可以缓解长时程内质网应激导致的中脑多巴胺能神经元死亡,PERK通路参与了长时程内质网应激导致的中脑多巴胺能神经元变性死亡。

基于内质网应激探究中医药防治心力衰竭

近年来,心力衰竭的患病人数逐年增加,对于人们生活质量产生严重影响,研究发现内质网应激在心力衰竭的发生发展中产生重要作用,一方面,内质网应激可以促进心血管疾病向心力衰竭的转变;另一方面,内质网应激会加重心力衰竭的严重程度。中医药在治疗心力衰竭、改善患者预后方面具有显著疗效,对于内质网应激的调控也有显著作用,可以通过改善其相应感受器通路的表达来缓解内质网应激,下调未折叠蛋白反应,减少心肌细胞凋亡,延缓心力衰竭进程。