小鼠抗内质网相关的干扰素诱导病毒抑制蛋白(viperin)多克隆抗体的制备

目的以纯化的内质网相关的干扰素诱导病毒抑制蛋白(viperin)免疫小鼠制备其多克隆抗体并鉴定其特异性。方法对BALB/c小鼠颅内注射鸭坦布苏病毒,刺激小鼠脑组织产生viperin,通过反转录PCR从小鼠大脑组织克隆viperin,并将其插入至pGEX-6P-1原核表达载体,转化至大肠杆菌Rosetta。用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)对重组蛋白诱导表达,对其进行可溶性分析,以氯化钾染色切胶法对大量表达蛋白进行纯化;将纯化的重组viperin蛋白经腹部皮下免疫小鼠制备多克隆抗体,利用间接ELISA测定多抗效价,Western blot法和间接免疫荧光法(IFA)检测BHK-21仓鼠肾成纤维细胞瞬时表达的viperin蛋白鉴定viperin抗体的特异性和敏感性。结果成功克隆并表达小鼠viperin基因,制备的抗体效价可达1∶25600,小鼠抗viperin多克隆抗体可特异性识别BHK-21细胞表达的viperin蛋白。结论成功制备特异性较好的小鼠抗viperin多克隆抗体。

猪Viperin的C末端结构域促进PEDV RNA合成

为了研究猪干扰素诱导内质网关联病毒抑制蛋白(Viperin)基因各个功能区对猪流行性腹泻病毒(PEDV)RNA合成的影响,本试验构建了猪源Viperin各个功能区的质粒,将质粒在Vero E6细胞中过表达。免疫荧光和蛋白印迹试验结果显示,猪Viperin各个功能区均在Vero E6细胞质中正确表达;用PEDV感染过表达Viperin的Vero E6细胞,荧光定量PCR检测结果显示,Viperin能够显著提高病毒RNA水平;用PEDV感染的siRNA干扰Vero E6细胞,荧光定量PCR检测结果显示,干扰Viperin基因表达可显著抑制病毒RNA水平;用PEDV感染过表达Viperin各个功能区的Vero E6细胞,荧光定量PCR检测结果显示,Viperin的C末端区域能够显著促进病毒RNA合成。因此,本试验为最终阐明宿主体内Viperin调控病毒增殖的机制提供了一定的试验依据。