α-突触核蛋白/A53T突变体损伤SH-SY5Y细胞的MAM并导致线粒体结构异常及自噬

目的研究α-突触核蛋白(α-syn)A53T突变体对人神经母细胞瘤细胞内质网线粒体相关膜(MAM)的影响,进而探讨α-syn突变后导致神经元毒性的分子细胞机制。方法首先构建过表达α-syn/A53T突变基因的人神经母细胞瘤细胞系(SH-SY5Y)细胞,然后利用分子邻位杂交(PLA)的方法标记MAM并计数MAM的数量。用Rhod2标记线粒体钙离子,动态观测线粒体钙离子变化情况。用激光共聚焦显微镜及电镜技术进一步观察线粒体的结构。结果过表达α-syn/A53T突变体可以导致明显的细胞毒性(P<0.001),MAM的数量显著减少(P<0.001),MAM钙离子转运受到抑制。线粒体变为短棒状、球状,并在神经细胞内出现线粒体空泡以及自噬体。结论α-syn/A53T突变体可以通过破坏SH-SY5Y细胞的MAM导致线粒体结构异常并自噬。