EMC6对宫颈癌HeLa细胞生长的影响研究

目的研究EMC6(内质网膜复合亚基6)基因对宫颈癌HeLa细胞生长的影响及EMC6在宫颈癌发生过程中的作用,为探讨诱导自噬用于治疗宫颈癌提供线索。方法 (1)构建3种质粒:EMC6真核表达质粒、特异性干扰EMC6质粒、空质粒。分别将3种质粒转染HeLa细胞。筛选3组中的稳定表达细胞株。(2)用Real timePCR、Western blot检测3组质粒转染后Hela细胞中EMC6mRNA表达结果。(3)15只裸鼠被随机地分成3组。接种3种表达株至裸鼠皮下成瘤。记录3组瘤体生长速度及并测量瘤体大小。免疫组化检测3组瘤体组织中EMC6蛋白表达水平。结果与HeLa组(未转染质粒)裸小鼠相比,Hela-shRNA组(EMC6被干扰)裸小鼠致瘤活性明显增强,生长加快,瘤体体积明显变大(P<0.05)。HeLa-EMC6组(EMC6过表达)裸小鼠致瘤活性明显降低,生长缓慢,瘤体体积明显缩小(P<0.05)。Hela-shRNA组裸小鼠瘤体重量(1.03±0.12)g,较HeLa组肿瘤增重28.75%(P<0.05);HeLa-EMC6组瘤体重量(0.39±0.14)g,较HeLa组明显减轻51.25%(P<0.05)。结论EMC6蛋白在裸鼠体内能明显抑制HeLa细胞生长,致瘤性降低。

EMC6在宫颈癌中的表达及临床意义

目的研究新发现的基因内质网膜复合亚基6(EMC6)在正常宫颈、宫颈上皮内瘤样病变及宫颈癌组织中的表达。方法收集正常宫颈组织(正常宫颈组)及宫颈上皮内瘤变组织(CIN组)各80例和宫颈癌组织100例(宫颈癌组)石蜡组织标本。用免疫组化法研究EMC6分别在上述病例中的表达。结果宫颈癌组中EMC6表达率为64.0%(64/100),CIN组中EMC6表达率为93.8%(75/80),正常宫颈组中EMC6表达率为81.3%(65/80),各组EMC6表达差异有统计学意义(P<0.05)。EMC6蛋白表达率与宫颈癌患者年龄、临床分期、癌组织的大小、大体类型、病理类型、分化程度、有无淋巴结转移等均无相关性(P>0.05)。结论 EMC6的表达降低可能参与了宫颈癌的发生、发展。但EMC6表达水平与宫颈癌患者的各临床特征,包括年龄、期别、癌组织的大小、大体类型、病理类型、病理分化程度、有无淋巴结转移等无关。

含EMC6基因重组真核表达载体的构建及其在人肝L-02细胞中的异位表达

目的:构建pcDNA3.1(+)/EMC6真核表达载体,并将其在人肝L-02细胞株中过表达。方法:查询Pub Med上EMC6的基因序列,针对该序列设计引物,提取L-02细胞的总RNA、聚合酶链式反应(PCR)扩增目的片段,采用基因重组技术将EMC6的cDNA定向插入真核表达载体pcDNA3.1中,构建pcDNA3.1(+)/EMC6真核表达载体,经菌落PCR,测序验证构建的准确性。应用脂质体转染方法将重组载体转入L-02细胞中,RT-PCR、蛋白质印迹法检测EMC6基因的mRNA和蛋白表达水平。结果:PCR和基因测序结果均表明pcDNA3.1(+)/EMC6重组质粒构建成功,RT-PCR和蛋白质印迹检测结果证实EMC6在人肝L-02细胞中过表达。结论:成功构建人pcDNA3.1(+)/EMC6重组质粒,并在L-02细胞中过表达。