榄香烯注射液对吉非替尼在PC-9/GR细胞内转运动力学影响

目的研究榄香烯注射液对吉非替尼(GEF)在PC-9/GR细胞内转运动力学影响,探讨该药在逆转肿瘤多药耐药方面的作用。方法活体生物发光技术实时监测PC-9/GR^(Fluc)细胞内ABC耐药蛋白底物D-荧光素钾动力学行为。采用MTT法测定PC-9/GR细胞的耐药性,榄香烯、GEF单用药及联合用药时的细胞毒性,Compusyn软件分析两药联合是否具有协同作用。运用HPLC法,测定联合用药组及GEF单用药组药物在PC-9/GR细胞中的摄取量。结果榄香烯能显著增加细胞内D-荧光素钾的荧光响应强度。吉非替尼对PC-9及PC-9/GR细胞的IC50值分别为0.01、1.50μg/m L,耐药倍数为150倍。所有联合药物组的联合用药指数(combination index,CI)值都小于1,表明两药联合具有较好的协同作用。细胞摄取结果表明,配伍榄香烯(ELE)后,GEF在PC-9/GR细胞摄取明显增加(P<0.05)。结论榄香烯增加D-荧光素钾荧光响应强度,促进细胞对GEF摄取,说明在一定程度上能抑制耐药蛋白的外排功能从而逆转耐药。

细胞内转运载体超支化聚砜胺及其生物相容性

通过制备超支化聚砜胺-异硫氰酸荧光素聚合物(PSA-FITC),研究其生物相容性、肿瘤细胞对其内吞作用和在正常小鼠体内的生物分布,以探讨PSA作为载体进行药物和基因体内输送的可行性.在碱性条件下共价结合PSA与FITC,形成荧光标记聚合物(PSA-FITC)后测定聚合物中FITC含量.在不同时间点,通过流式细胞术检测细胞对聚合物的内吞作用;正常balb/c裸鼠尾静脉注射PSA-FITC 24 h后,用小动物活体荧光成像系统研究各脏器聚合物分布.不同浓度PSA与3T3小鼠成纤维细胞及KB人口腔上皮肿瘤细胞分别孵育24,48,72 h后,通过MTT法测得其生物相容性.结果表明,PSA生物相容性良好,72 h的细胞半抑制浓度大于1 mg/mL.细胞摄入PSA-FITC高效快速,3 h阳性细胞百分含量为99.24%±1.03%,且具有时间依赖性.在正常小鼠体内,PSA在各主要脏器或组织中无明显特异性浓聚.超支化聚砜胺具有明显生物低毒性和高效细胞内转运特点.由于其表面功能基团容易改性,作为载体,通过连接结合配体或抗体,在肿瘤的主动靶向治疗中具有广阔的应用前景.

FKBP52在重组腺相关病毒载体胞内转运中的作用研究

目的探讨细胞质中FKBP52对重组腺相关病毒(AAV)介导的基因转导效率的作用。方法测定AAV在FKBP52-野生型(WT)、FKBP52-杂合型(HE)及FKBP52-基因敲除(KO)鼠胚纤维母细胞(MEFs)中的基因转导效率,观察羟基脲(HU)对不同基因型MEFs中AAV转导效率的影响。采用流式细胞术、EMSA、Southernblot、免疫沉淀、West-ernblot等方法分析FKBP52对AAV在细胞内转运的作用。结果传统的单链AAV不能有效地转导FKBP52-WTMEFs,在FKBP52-HE及FKBP52-KOMEFs中的转导效率也未见明显增加。在这些细胞中,AAV不能有效地转运至细胞核。HU处理后能使AAV在WTMEFs中的转导效率提高25倍,但是在KOMEFs中AAV转导效率仅提高4倍。为避免AAV第二链合成的影响,进一步采用自身互补的AAV(scAAV)载体进行研究,结果发现,HU能使WTMEFsscAAV基因转导效率增强23倍,但在KOMEFs中转导效率仅增加4倍。提示,HU处理后KOMEFs中转导效率未增加的原因并非由于AAV第二链的合成障碍所致。HU处理后,59%的AAV基因组DNA出现在WTMEFs细胞核,KOMEFs细胞核中为28%,提示HU介导的AAV转运通路在KOMEFs中存在缺陷。转染FKBP52表达质粒的KOMEFs经HU处理后,AAV所介导的基因转导效率恢复至WTMEFs的水平,且直接与其转运至细胞核的转运功能改善相吻合。结论作为一种细胞分子伴侣蛋白,FKBP52能促进AAV在细胞内转运,有益于重组AAV载体在人类基因治疗中的应用。

荧光探针示踪pDNA/壳聚糖纳米粒在细胞内转运

目的采用荧光探针追踪质粒DNA(pDNA)/壳聚糖(CS)纳米粒在细胞内转运轨迹,分析CS介导的细胞转染屏障。方法绿色荧光蛋白质粒基因作为报告基因进行体外转染实验,用异硫氰酸荧光素分别标记pDNA和CS,荧光显微镜下观察细胞对pDNA/CS纳米粒的吸附,流式细胞技术测定细胞对pDNA/CS纳米粒的摄取率,激光扫描共聚焦显微镜下观察pDNA/CS纳米粒在细胞内转运和入核过程。结果pDNA/CS纳米粒以小聚集体形式吸附在细胞表面,细胞吸附受介质pH值的影响。流式细胞仪定量分析表明,细胞对pDNA/CS纳米粒有高摄取率,共温孵4h,细胞摄取率为88·8%。激光扫描共聚焦显微图像显示,pDNA/CS纳米粒依赖细胞内吞功能经细胞(内外)转运通道进入细胞。pDNA/CS纳米粒与细胞共温孵3h,CS主要分布在胞浆中,pDNA不仅分布在胞浆中,核内也清楚可见荧光标记的pDNA。结论荷正电的pDNA/CS纳米粒以小聚集体形式被细胞吸附,通过细胞胞吞作用进入细胞。pDNA/CS纳米粒主要在胞浆中解离,pDNA入核。实验提示,增加pDNA/CS纳米粒在胞浆中解离将有助于提高CS介导的转染效率。

内质网和细胞骨架在植物病毒细胞内转运中的作用

植物病毒的侵染循环是一个病毒-寄主互作过程。内质网和细胞骨架在病毒细胞内转运中起着重要调节作用,不仅协助病毒从复制位点转运到细胞边缘胞间连丝处,还可能介导多余病毒因子的降解。针对植物细胞内质网和细胞骨架在烟草花叶病毒等植物病毒细胞内转运过程中所起的作用进行了综述。

护理程序在急诊重症患者医院内转运中的应用

急诊室是医院的重要组成部分,是接诊各类急症患者的前沿窗口.急诊患者常因诊断和治疗的需要进行医院内转运,运用整体护理理念把护理程序运用到急诊患者的院内转运中,能收到一定效果.

中药多糖类化合物肠内转运与代谢研究的思考

通过研究分析国内外有关中药多糖类化合物现状,提出:中药多糖类化合物在小肠难吸收,推进至大肠后在肠道微生态的作用下,代谢生成小分子寡糖类等,这些寡糖类代谢产物部分被吸收产生类似于多糖的药理作用,而剩余部分经大肠排泄,药材中的多糖是前药等观点,并就中药多糖类化合物肠内转运与代谢的研究方法提出的设想。

MHCⅠ类分子胞内转运机制研究进展

主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)Ⅰ类分子在细胞内的转运过程大致可分为以下3个环节:1)新合成的MHCⅠ类分子在内质网(endoplasmic reticulum,ER)腔内装载抗原肽;2)肽-MHC分子复合体经过囊泡转运由高尔基体(Golgi apparatus)到达细胞膜表面,活化CD8+T细胞;3)细胞对MHCⅠ类分子的回收过程。近年来的研究显示,此转运过程中涉及泛素化、内吞作用等机制,而多种病毒可干扰MHCⅠ类分子的各转运环节,达到免疫逃避的目的。故本文针对近年该领域的研究进展作一综述。

纤毛内转运蛋白20和上皮型黏附素在口腔鳞癌中的表达及意义

目的应用免疫组化方法检测口腔鳞癌中纤毛内转运蛋白(IFT)20和上皮型黏附素(E-cadherin)的表达特征,关注肿瘤中两种蛋白表达的相关性及临床意义。方法确诊为口腔鳞癌的76例患者作为观察组,留取术后的蜡块组织,70例距肿瘤边缘>5 cm的正常牙龈鳞状上皮组织作为对照组。用免疫组化方法检测IFT20和E-cadherin的表达。结果观察组中IFT20表达阳性率明显高于对照组,观察组中E-cadherin表达阳性率明显低于对照组,观察组中IFT20和E-cadherin阳性率与肿瘤最大径、累犯骨组织、脉管内瘤栓和Ki67增殖指数密切相关。相关性分析显示观察组中IFT20和E-cadherin的表达呈负相关性。结论口腔鳞癌中IFT20高表达、E-cadherin低表达可以促进肿瘤的发生和进展,二者可能具有负向协同作用。

胞内转运对根尖牙乳头干细胞表面CXC趋化因子受体4表达的影响

目的:探讨胞内转运途径受到抑制后,根尖牙乳头干细胞(stem cells from apical papilla,SCAP)表面CXC趋化因子受体4(CXC chemokine receptor 4,CXCR4)表达的变化,为了解SCAP迁移机制提供实验依据。方法:采用免疫荧光共染色方法和原位邻近连接技术(proximity ligation assay,PLA)检测SCAP胞内CXCR4与细胞胞内转运相关细胞器标记蛋白的共定位,检测指标包括早期胞内体标记蛋白Rab5、循环胞内体标记蛋白Rab11A、溶酶体标记蛋白Lamp1。分别采用80μmol/L的内吞抑制剂Blebbistatin、80μmol/L的内吞抑制剂Dyanasore对SCAP进行预处理1 h,流式细胞分析方法检测表面阳性表达CXCR4的SCAP所占百分比,使用单因素方差分析进行统计学分析。结果:免疫荧光共染色结果显示,CXCR4在SCAP胞内的表达位置与早期胞内体标记物Rab5、循环胞内体标记物Rab11A的表达位置重合,小部分与溶酶体标记物Lamp1的表达位置重合。PLA结果显示,CXCR4在SCAP胞内与Rab5、Rab11A、Lamp1均存在共定位。阴性对照组SCAP CXCR4阳性表达的细胞为0.13%±0.10%,经Blebbistatin、Dynasore抑制内吞后,表面CXCR4阳性表达的SCAP显著增多,分别为13.34%±1.31%、4.03%±0.92%,差异有统计学意义(F=161.762,P<0.001),且Blebbistatin组多于Dynasore组,差异有统计学意义(P<0.001)。结论:采用内吞抑制剂抑制CXCR4的胞内转运途径,可使表面表达CXCR4的SCAP增多,提升了SCAP迁移的潜能。

Rab29对甲状旁腺激素受体胞内转运的调控作用研究

目的研究Rab29在细胞内的分布以及对甲状旁腺激素受体(PTHR)胞内转运的调控作用。方法采用免疫荧光技术观察Rab29在细胞内的分布;细胞内分别转染野生型Rab29和Rab29两种突变型,免疫荧光技术观察3种Rab29在细胞内的分布;细胞内共转染PTHR和Rab29,免疫荧光技术处理后,在电镜下观察Rab29调控PTHR的胞内分布;半衰期实验检测细胞Rab29基因敲减后PTHR的稳定性。结果 Rab29定位于反式高尔基体,Rab29突变型的细胞内定位均由野生型的核周聚集变为细胞内弥散状,Rab29的缺陷导致了PTHR的逆膜转运受损和稳定性下降。结论定位于反式高尔基体的Rab29是逆膜转运通路中不可或缺的一部分,对PTHR的胞内转运起着重要的调控作用。

4种磷脂囊泡的细胞毒性及促胰岛素细胞内转运的研究

目的探讨4种磷脂囊泡对人肺腺癌细胞(A549)的细胞毒性及促细胞内胰岛素转运的影响。方法 4种胰岛素磷脂囊泡处理A549细胞,采用噻唑蓝比色法(MTT)检测磷脂囊泡细胞毒性,电化学发光法(ECLIA)检测细胞内胰岛素含量。结果 MTT实验结果显示胰岛素浓度≤0.2 U·m L-1时细胞存活率>95%,50%胰岛素磷脂囊泡浓度对细胞存活率的影响以胰岛素脂质体组最高(62.48±2.46)%,乙醇脂质体组最低(16.85±5.05)%,相对安全性顺序依次为:脂质体>脂质微泡>丙二醇脂质体>乙醇脂质体。相同浓度下4种磷脂囊泡促细胞内胰岛素转运的含量排序依次为:脂质微泡>丙二醇脂质体>乙醇脂质体>脂质体。结论以磷脂类膜材构建的脂质体、脂质微泡具备较高安全性,脂质微泡促进胰岛素细胞内转运能力最强。

老年骨肉瘤术后组织中纤毛内转运蛋白20、癌胚抗原相关细胞黏附分子6和抑癌基因的表达及意义

目的应用免疫组化方法检测老年人骨肉瘤患者术后组织中纤毛内转运蛋白(IFT)20、癌胚抗原相关细胞黏附分子(CEACAM)6和抑癌基因PTEN(PTEN)的表达,研究三种蛋白在不同临床特征中的表达差别。方法病理确诊的69例老年人骨肉瘤术后组织作为观察组,选择50例外伤后切除的正常骨组织作为对照组,采用免疫组化SP法检测两组中IFT20、CEACAM6和PTEN的表达。结果两组中IFT20、CEACAM6和PTEN表达的阳性率差别显著,观察组中IFT20、CEACAM6和PTEN表达的阳性率均与肿瘤的最大径线、有无软组织浸润、有无转移及不同Ennecking分期有关。相关分析显示IFT20和PTEN的表达呈负相关。结论老年人骨肉瘤术后组织IFT20和CEACAM6高表达,PTEN低表达,三者异常表达可以促进肿瘤的发生和进展,IFT20可能通过调节抑癌基因PTEN的表达发挥生物学作用。

我院院内转运信息化建设现状的探讨

随着信息技术的不断发展,信息化的影响已经渗入到各行各业的方方面面,在医学医疗领域,信息化技术也逐渐发展成熟,取得不可或缺的地位。院内转运是医院运输的重要板块,而国内的许多医疗单位在院内运输信息化建设方面尚不成熟,在此背景之下,我院开展了院内转运信息化建设的项目,通过在院内转运工作中实施信息化手段,一方面提升了我院的转运工作效率,另一方面,也为我院转运工作人员提供了便捷的工作平台,大幅提升了转运人员的工作质量。但是在转运需求日益增加和复杂的现状下,我院的转运工作也凸显出不同的问题,为进一步优化我院院内转运工作,探讨我院转运工作中的不足及其可能的有效措施。

安全转运护理措施在急诊危重患者医院内转运中的应用效果

目的:观察安全转运护理措施在急诊危重患者医院内转运中的应用效果。方法:选取需要进行医院内转运的急诊危重患者178例为研究对象,按照随机数字表法将患者分成对照组和观察组各89例,对照组患者采用常规医院内转运方式,观察组在对照组基础上采用安全转运护理措施,比较两组患者的转运效果。结果:观察组患者在转运过程中意外情况发生率为6.74%(6/89),明显低于对照组的21.35%(19/89),差异有统计学意义(P<0.05);观察组患者护理满意度评分明显高于对照组,医院内转运时间明显短于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:在常规医院内转运方式基础上,急诊危重患者医院内转运采用安全转运护理措施可有效降低意外情况发生率、提高护理满意度、减少转运时间。