木犀草素、欧当归内酯A和黄芪皂苷Ⅰ单用及联用对人肝星状细胞株LX-2增殖、活化的影响

目的 探讨木犀草素(Lut)、欧当归内酯A(Lev)和黄芪皂苷Ⅰ(Ast)单用及联用对人肝星状细胞株LX-2增殖、活化的影响。方法 取对数生长期的LX-2细胞,采用噻唑蓝(MTT)法考察Lut、Lev和Ast对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的LX-2细胞增殖的影响、联用比例确定及Lut、Lev和Ast联用对TGF-β1诱导LX-2细胞增殖的影响;应用CalcuSyn软件计算Lut、Lev及Ast联用抑制LX-2细胞增殖的联合指数(CI),分析3者联用类型;通过蛋白免疫印迹法(Western blot)检测3者对LX-2细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和TGF-β1蛋白表达的影响。结果 MTT结果显示,Lut、Lev和Ast联用摩尔比为1∶1∶10,3者单用及联用对TGF-β1诱导的LX-2细胞增殖均具有抑制作用(P<0.05),并呈浓度依赖性;CalcuSyn软件分析结果显示,3者联用对LX-2细胞的增殖抑制率>15%时CI<1,说明3者联用具有协同增效的作用;Western blot结果显示,Lut、Lev及Ast联用能够显著降低TGF-β1诱导的LX-2细胞中α-SMA蛋白的表达(P<0.01),降低LX-2细胞中TGF-β1蛋白的表达(P<0.05)。结论 Lut、Lev和Ast单用及联用均能抑制LX-2细胞的增殖、活化,3者联用作用更强、具有协同增效的作用,该作用可能与下调肝星状细胞TGF-β1蛋白表达有关。

HPLC-UV法测定银杏内酯A、B、C

[目的]建立高效液相色谱-紫外检测器(HPLC-UV)法测定银杏内酯A、B、C的浓度,并对其进行方法学验证。[方法]考察了包括检测波长、8种不同的流动相体系及其比例、进样量、流速和柱温。方法验证涵盖了专属性、精密度、准确度、线性范围、重复性、系统适用性、加样回收率和稳定性。[结果]色谱柱为Agilent TC-5 C_(18),检测波长为220 nm,流动相为水-甲醇(70∶30),进样量为20μL,柱温30℃,流速为1.0 mL/min且线性关系良好,色谱峰之间无互相干扰。[结论]该方法准确、有效,经济且易得,操作简单,为其他银杏内酯药物含量测定提供了可靠的参考。

高速逆流色谱法分离纯化银杏叶中白果内酯和银杏内酯A、B、C

目的从银杏叶中分离纯化白果内酯和银杏内酯A、B、C。方法银杏叶提取液经醋酸乙酯萃取、D-101大孔吸附树脂柱和Al2O3柱纯化后得到总内酯提取物,提取物再经两次高速逆流色谱分离制备4种内酯单体。结果25%乙醇热提取、醋酸乙酯萃取、D-101柱、pH4.0的Al2O3柱对总内酯的提纯最终使总内酯质量分数达到44.98%。经高速逆流色谱制备得到的白果内酯和银杏内酯A、B、C最高质量分数分别为98.3%、98.9%、98.8%、98.4%。结论本法简便快速、回收率高。

银杏内酯A对小鼠脑缺血/再灌注损伤的保护作用及其抑制NF-κB信号通路下调p53、Caspase-3表达的机制

目的探讨银杏内酯A(Ginkgolide A,GA)对缺血/再灌注脑损伤小鼠的保护作用及其可能的作用机制。方法采用小鼠短暂性大脑中动脉阻塞(transient middle cerebralartery occlusion,tMCAO)模型观察GA(10,20 and 40 mg.kg-1)对小鼠脑梗死范围、脑含水量及神经症状的影响,并进行病理组织学检查;采用实时荧光定量PCR技术检测缺血大脑皮层p53 mRNA的表达;应用Western blot法检测缺血大脑皮层IκBα、pIκBα及Caspase-3蛋白水平的表达。结果 GA对缺血/再灌注小鼠神经症状有明显的改善作用,能明显降低脑梗死范围,降低脑含水量,脑组织病理组织学也显示了GA对神经细胞的保护作用。Western blot结果显示:小鼠脑缺血/再灌后,IκBα蛋白水平明显降低,GA能明显升高IκBα的蛋白水平,降低pIκBα和Caspase-3的蛋白水平。PCR结果表明:小鼠脑缺血/再灌后,p53 mRNA水平升高,GA能下调p53 mRNA的表达。结论 GA对缺血/再灌注小鼠脑损伤有明显保护作用,该作用可能与其抑制NF-κB信号通路,下调p53、Caspase-3的表达有关。

银杏内酯A和B混合物对大鼠永久性局灶性脑缺血的保护作用

目的研究银杏内酯A和B混合物(ginkgolide A and ginkgolide B,GKAB)对大鼠永久性局灶性脑缺血的保护作用。方法采用大鼠永久性大脑中动脉阻塞(permanent middle cerebral artery occlusion,pMCAO)模型观察GKAB12.5、25、50mg/kgiv给药对脑梗死体积、脑含水量、行为学症状及组织形态学(光镜)的影响。结果GKAB12.5、25、50mg/kgiv给药呈剂量依赖性减少pMCAO大鼠脑梗死体积、降低脑含水量、改善行为学症状及减轻脑组织形态改变。50、25mg/kg组与模型组相比均有显著性差异(P<0.01、0.05)。结论GKAB对大鼠永久性局灶性脑缺血损伤具有保护作用。

川芎内酯A预处理对大鼠离体心脏缺血再灌注所致血管内皮细胞损伤的保护作用

目的:观察川芎内酯A预处理对大鼠离体心脏缺血再灌注所致血管内皮细胞损伤的保护作用。方法:采用Langendorff离体心脏灌流方法,在恒温恒压条件下,以0.5mL.min-1的灌流速度给药,剂量分别为0.05,0.025,0.0125g.L-1与K-H灌流液同时灌流心脏10min;全心停灌30min,再灌60min。结果:川芎内酯A预处理能提高大鼠离体心脏停灌再灌期的冠脉流量;降低冠脉流出液中IL-1β浓度和TXB2/6-Keto-PGF1α的比值;室性心动过速(VT)和心室颤动(VF)的发生率降低,VT,VF持续时间缩短;心肌匀浆液乳酸脱氢酶、丙二醛的含量降低,超氧化物歧化酶活性提高。结论:川芎内酯A预处理对大鼠离体心脏停灌再灌注损伤所致的血管内皮细胞损伤可能具有保护作用。

银杏内酯A和银杏内酯B在健康人体内的药动学的实验研究

目的 用本实验室建立的测定血液中内酯浓度的方法 ,对银杏内酯A(ginkgolideA ,GA)和银杏内酯B(ginkgolideB ,GB)在 10例健康受试者体内的药动学进行了研究。方法 10例健康受试者 ,静脉滴注银杏叶提取物注射液 (舒血宁注射液 ) ,于给药后不同的时间取血 ,用气相 质谱联用法测定血药浓度 ,并计算GA和GB的药动学参数。结果 健康受试者静脉点滴GA和GB后的代谢均符合二房室模型 ,t1/ 2 分别为 3.73,4.2 5h。AUC值分别为 6 830 5 .10 ,19714.6 9ng·min·mL-1。结论 GC

一测多评法测定中成药中洋川芎内酯A和藁本内酯

目的以丁苯酞为内标一测多评法测定都梁滴丸、白带丸、血府逐瘀胶囊中洋川芎内酯A和藁本内酯。方法待测药物以甲醇提取,HPLC分析采用的色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为甲醇-水(52∶48)。测定洋川芎内酯A和藁本内酯的相对校正因子,考察其校正因子的重现性,并与外标法进行比较。结果都梁滴丸和血府逐瘀胶囊能同时检测出洋川芎内酯A和藁本内酯,而白带丸仅检测出藁本内酯。在Agilent Eclipse XDB-C18、Phenomenex Luna C18和Agilent Zorbax SB-C18色谱柱上测定的相对校正因子重现性好,与外标法实测值无显著差异。结论本法可用于川芎、当归的质量控制,解决了洋川芎内酯A和藁本内酯对照品不稳定的难题。

川芎内酯A预处理对心肌微血管内皮细胞缺氧/复氧损伤保护作用及机制研究

目的:探讨川芎内酯A预处理对心脏微血管内皮细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用及作用机制。方法:采用体外培养的大鼠乳鼠心脏微血管内皮细胞,空白组不加任何处理;单纯H/R组缺氧4 h/复氧2 h;单纯预处理组低氧25 m in/复氧30 m in,然后缺氧4 h/复氧2 h,各给药组分别加1×10-7,1×10-9,1×10-11mol.L-1的川芎内酯A孵育55 m in,然后缺氧4 h/复氧2 h;实验结束后取细胞上清液测一氧化氮(NO),一氧化氮合酶(NOS),内皮素(ET),取造模后的且固定在盖玻片的细胞,用原位杂交法检测iNOSmRNA和ETmRNA的基因表达。结果:H/R组细胞存活数降低明显,细胞培养液中NO和NOS活性显著降低,ET的活性明显升高,iNOSmRNA表达量减少,ETmRNA表达量增加;川芎内酯A 3个剂量组与H/R组比较,细胞存活数均明显增加,细胞培养液中NO和NOS活性增加,ET活性降低,iNOSmRNA表达量增加而ETmRNA表达量则减少。结论:川芎内酯A预处理能减轻内皮细胞损伤,对心脏微血管内皮细胞缺氧/复氧损伤可能具有保护作用,其作用机制可能与上调内皮细胞中iNOSmRNA的表达和下调ETmRNA的表达有关。

银杏内酯A对胆碱能神经功能损伤引起的SD大鼠学习记忆的促进作用

目的 研究银杏内酯 A对 Meynert基底核 (NBM)损伤引起的 SD大鼠学习记忆的改善作用。方法 通过 N -甲基 -D-天冬氨酸 (NMDA)单侧损伤 SD大鼠 NBM以破坏胆碱能神经功能 ,采用 Y型迷宫法检测动物空间辨别学习记忆能力 ,利用放射化学法检测皮层胆碱乙酰转移酶 (Ch AT)活力 ,观察银杏内酯 A对胆碱能损伤记忆功能的恢复 ,脑内 Ch AT的变化。结果 银杏内酯 A对胆碱能损伤记忆功能具有恢复作用 ,且能防止 Ch AT活力降低。结论 银杏内酯 A能改善

银杏内酯A对缺血/再灌注损伤的大鼠心功能的影响

目的探讨银杏内酯A(Ginkgolide A,GA)对离体大鼠心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤的心功能的影响。方法 Langendorff灌注离体大鼠心脏,用停灌复灌的方式制备心肌缺血/再灌注损伤模型,记录左心室收缩峰压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)、收缩压和舒张压最大变化速率(±LVdp/dtmax)和心率(HR)的变化,并测定复灌后冠状动脉流出液中LDH和SOD的含量及心肌梗死面积。分离单个细胞进行GA预处理,模拟缺血/再灌注培养后检测心肌细胞存活率和单个心肌细胞的收缩幅度。结果 GA预处理以后,LVSP、-dp/dtmax和HR在复灌10 min时较缺血/再灌注组具有明显的改善(P<0.05),并增加心率,减少LDH的生成,增加SOD的活性,降低心肌梗死面积。经GA预处理的心肌细胞存活率明显提高,10μmol.L-1GA能够明显提高缺血后单个心肌细胞的收缩幅度。结论 GA对缺血/再灌注损伤的心肌具有一定的改善作用。

银杏内酯A,B在家兔体内的药代动力学研究

目的 建立测定血液中内酯浓度的方法 ,并对银杏内酯A ,B在大白兔体内的药物代谢动力学进行了研究。方法 6只大耳白兔 ,于耳缘静脉按 4mg·kg- 1 给银杏内酯生理盐水溶液 ,于给药后不同的时间放血 ,用气相 质谱联用法 (GC MS)测定血药浓度 ,计算药代动力学参数。结果 大耳白兔静脉注射银杏内酯A ,B后的代谢符合二房室模型 ,t1 2 分别为 1.5 ,0 .96h。AUC值分别为 36 1.5 5 ,97.70 μg·ml·min- 1 。结论 用GC MS法测定银杏内酯的血药浓度 ,从色谱图可以看出 ,银杏内酶A ,B的分离效果良好 ,血浆杂质峰不干扰测定 ,专一性强 ,平均回收率高 ,稳定性好 ,灵敏度较高 。

气相色谱法同时测定蟛蜞菊中的蟛蜞菊倍半萜内酯A和B(英文)

蟛蜞菊具有抗肿瘤、抗病毒作用,其主要活性成分是倍半萜内酯类物质。以分离纯化所得的结晶倍半萜内酯A与B为参考标准,采用HP毛细管色谱柱(30m×0.25mm i.d.×0.25μm),程序控制升温,氢火焰离子化检测器检测,测定了蟛蜞菊的地上部分(茎叶和花)中倍半萜内酯A与B的含量。测定结果表明:蟛蜞菊茎叶中的倍半萜内酯A和B的含量分别为(239±6.4)μg/g和(156±15)μg/g;花中倍半萜内酯A和B的含量分别为(233±6.5)μg/g和(173±16)μg/g。该法可用于蟛蜞菊原料及其药品的质量控制。

银杏内酯A对LPS诱发肝细胞损伤的保护作用及机制

目的探讨银杏内酯A(GA)对脂多糖(LPS)诱发肝细胞损伤的保护作用及可能机制。方法将大鼠肝细胞随机分为6组:正常组、LPS组、LPS+CLI-095组、LPS+GA 20μmol/L组、LPS+GA 10μmol/L组、LPS+GA20μmol/L+LY294002组。MTT法检测细胞活性,Western blotting法检测肝细胞Toll样受体4(TLR4)表达,检测肝细胞NF-κB活性[NF-κB p65、磷酸化-NF-κB p65(p-p65)、磷酸化-IκBα(p-IκBα)、NF-κB p65基因结合活性],检测培养液中炎症细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平。结果与正常组比较,LPS组肝细胞TLR4表达增加(P<0.05),NF-κB p65、p-p65、p-IκBα水平升高(P均<0.05),NF-κB p65基因结合活性增强(P<0.05),培养液中IL-1β、IL-6、TNF-α水平升高(P均<0.05),细胞活性降低(P<0.05)。与LPS组比较,GA剂量依赖性地抑制TLR4表达及NF-κB信号激活(P均<0.05),降低上述炎症因子的释放(P均<0.05),同时提高细胞活性(P<0.05)。TLR4抑制剂CLI-095干预后,LPS引起的肝细胞上述变化被阻断(P<0.05)。PI3K/Akt抑制剂LY294002可抵消GA对肝细胞的保护作用(P均<0.05)。结论 GA可抑制LPS引起的肝细胞炎症反应、提高细胞活性,其机制可能与抑制LPS引起的TLR-NF-κB信号过度激活有关;PI3K/Akt通路参与了LPS诱发肝细胞损伤过程。

HPLC测定银杏愈伤组织内酯A的研究

建立了一种可用于银杏离体细胞培养物中内酯Ａ含量分析的ＲＰ－ＨＰＬＣ方法。样品经低浓度甲醇提取后，用中性或酸性氧化铝固相萃取柱纯化，用示差检测器检测，银杏内酯Ａ的最低检测限为 ０，０１２ μｇ，方法回收率为（９６．０±２）％，ＲＳＤ为 ３．１％。

欧当归内酯A对实验性纤维化肝脏NO及内皮细胞功能的影响

目的:探讨欧当归内酯A调节纤维化肝脏NO释放的抗肝纤维化作用机制。方法:40只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、欧当归内酯A 3 mg/kg组、欧当归内酯A 6 mg/kg组,每组10只。以四氯化碳(CCl4)与高脂低蛋白饮食复合因素诱导肝纤维化模型,连续6周。药物观察组于造模第4周腹腔注射给药至结束。观察肝组织炎性反应及胶原沉积、eNOS表达及MDA、SOD、NO、NOS水平。体外以800μmol/L氯化钴作用于SK-HEP-1细胞24 h诱导细胞缺氧损伤,药物处理后观察细胞活力、vWF表达、上清及胞内NO水平。结果:与模型组比较,欧当归内酯A各组肝细胞变性和炎性反应坏死有所减轻,纤维化改善;高剂量组SOD和MDA显著改善,NO和NOS降低,eNOS阳性表达下降(P<0.05)。体外实验显示,药物干预后细胞活力得到改善,vWF平均荧光强度减弱,NO释放显著改善(P<0.05)。结论:欧当归内酯A具有抗肝纤维化的作用,其机制可能与抗脂质过氧化损伤,改善内皮细胞功能,调节NO释放有关。

正相高效液相色谱法制备银杏内酯A和银杏内酯B

以实验室自制的银杏浸膏精制物为原料,采用正相高效液相色谱法分离制备得到银杏内酯A、银杏内酯B 单体．采用φ40mm×300 mm正相色谱柱、蒸发光散射检测器等组成的制备色谱系统,以乙酸乙酯、石油醚和甲醇 混合溶剂作为流动相,通过考察流动相中溶剂配比、流速和上样量等因素对分离效果的影响,确定了适宜的色谱条 件:流动相中乙酸乙酯、石油醚和甲醇的体积比为55:40:5、流速26mL／min、上样量120mg．经过一次分离即可得 到银杏内酯A、B单体,纯度可达99．7％和98．4％,收率分别为73.8％和74．2％．采用IR、13C-NMR、1H-NMR及质谱 进行结构鉴定,结构数据与文献值相符．

气相色谱法测定川芎挥发油中Z-藁本内酯及川芎内酯A的含量

目的:建立川芎挥发油中 Z-藁本内酯和川芎内酯 A 的气相色谱含量测定法。方法:采用 SE-54(50 m×0.2 mm)石英毛细管柱,以邻苯二甲酸二乙酯为内标,柱温240℃,汽化室及检测器温度均为280℃,分流比1:30,检测器 FID。结果:Z-藁本内酯、川芎内酯 A 线性范围分别为5.23～26.15 mg·mL^(-1)(r=0.9999)及3.25～16.26 mg·mL^(-1)(r=0.9987);精密度实验的 RSD(n=5)分别为0.72%和1.0%;重复性实验的 RSD(n=5)分别为0.81%和2.1%;平均回收率(n=5)分别为100.2%(RSD=2.0%)和97.29%(RSD=2.6%)。结论:该方法准确、重现性好、简便易行,可用于质量控制。

银杏内酯A、B对豚鼠乳头肌细胞的电生理效应

目的 :研究银杏内酯A、B(GA、GB)抗心肌缺血与抗心律失常的效应及其机制。方法 :细胞内微电极方法记录乳头肌动作电位。灌流模拟缺血液造缺血模型以及在低钾台氏液中加入氯化铯灌流诱发延迟后除极 (DAD)模型。观察GA、GB在生理、缺血状态下对乳头肌动作电位各项电生理参数以及DAD的影响。结果 :生理条件下 10 -6 mol/LGA、GB使APD50 分别缩短 9.1%和 6.2 % ;APD90 分别缩短 8.4%和 5 .9%。缺血状态下APD明显缩短、APA减小、RP及 0期Vmax减小 (P <0 .0 5～ 0 .0 1)。GA、GB可延缓和减轻缺血引起的上述变化 (P <0 .0 1) ,GA、GB可降低DAD的发生率 (P <0 .0 1)。结论 :银杏内酯A、B有缓解和改善心肌缺血作用 。