梯度流体剪应力下破骨前体细胞迁移与胞内钙分布的关联性

目的阐明局部梯度流体剪应力(fluid shear stress,FSS)是否会造成胞内Ca^(2+)浓度梯度的特异性分布,并最终决定细胞的迁移方向。方法利用COMSOL软件对流动腔内FSS分布进行数值模拟。建立FSS作用下破骨前体细胞RAW264.7胞内Ca^(2+)染色方法,并对细胞施加梯度FSS,定量分析胞内Ca^(2+)浓度分布和动态变化以及细胞迁移参数。结果破骨前体细胞更倾向于向低FSS区域迁移,且振荡流会调节细胞内Ca^(2+)沿细胞迁移方向分布,当阻断力敏感阳离子选择性通道、磷脂酶C、内质网钙信号通路和清除细胞外钙后,细胞向低FSS方向的迁移速度显著降低,但是沿液体流动方向的迁移速度显著增强。同时,细胞沿液体流动方向的Ca^(2+)分布显著升高。结论梯度FSS作用下,破骨前体细胞可以感受到这种梯度效应,且胞内Ca^(2+)沿迁移方向的特异性分布,最终导致破骨前体细胞向低FSS区域迁移。研究结果为最终阐明动态外力作用下骨组织重建的细胞和分子机制提供了较为重要的基础数据。

全麻机制研究——细胞内钙离子信号通路研究进展

全身麻醉药物的分子作用机制及细胞作用机制虽不明确,但是其对神经递质释放的影响已经达到共识:一方面全身麻醉药物分子与离子通道蛋白或突触蛋白直接作用可以改变神经递质的释放,另一方面也可能通过改变细胞内信号通路而影响神经递质的释放。作为细胞内的重要信使,钙离子浓度([Ca2+]i)受到钙内流系统、钙外流系统及内质网等多方面调节,而存在于这些调节通路的蛋白受体大多数被证明是全身麻醉药物的潜在作用位点。细胞内钙离子最终影响细胞兴奋性和神经递质的释放的重要作用,使得全身麻醉药物调节[Ca2+]i成为研究全麻机制的重要方面。

共聚焦显微技术分析卡维地洛对人心房肌细胞内钙离子的影响

目的:研究卡维地洛对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的人心房肌细胞内钙超载的拮抗作用。方法:急性分离单个人心房肌细胞。实验分4组:正常对照组; AngⅡ组:加入终浓度为0.1μmol/L的AngⅡ;卡维地洛组:加入终浓度为1μmol/L的卡维地洛; AngⅡ+卡维地洛组:卡维地洛1μmol/L与AngⅡ0.1μmol/L同时加入。以Fluo 3/AM荧光指示剂负载,应用激光共聚焦显微镜技术,分别于加入干预药物后即刻与15 min检测[Ca2+]i变化。结果:对照组和卡维地洛组人心房肌细胞内荧光强度和荧光光密度值较低。AngⅡ加入后即刻,细胞内荧光光密度值开始增加,15 min后细胞内荧光强度和荧光光密度值显著增高(P<0.05)。而AngⅡ+卡维地洛组细胞内荧光光密度值显著低于AngⅡ组(P<0.05)。结论:AngⅡ可引起人心房肌细胞内Ca2+超载,卡维地洛能显著减轻AngⅡ诱导的人心房肌细胞内Ca2+超载。

用焦锑酸分子探针测定细胞内钙离子的研究

钙离子在人体生理活动中具有重要作用,近年来人们通过生化方法对其进行了广泛研究,但在超微结构水平运用焦锑分子探针技术显示细胞内钙,国内报道较少。本文介绍运用焦锑酸酸分子探针技术对细胞内的钙离子分布进行原位定位的方法,研究各种情况下钙在细胞内不同区域内的含量。材料和方法一、动物:雄性大耳白免6只,体重1.

谷氨酸诱发培养的大鼠星形胶质细胞内钙升高的机制

目的 研究谷氨酸对纯化培养的大鼠星形胶质细胞的胞内钙信号的影响及受体作用机制。 方法 用显微荧光测量技术监测星形胶质细胞内钙信号的动态变化和谷氨酸对其的影响 ,观察阻断NMDA和 /或AMPA受体 ,谷氨酸对胞内钙信号影响的变化。 结果 谷氨酸明显升高胞内游离钙浓度 ,NMDA和AMPA受体拮抗剂、胞外钙离子浓度的降低及钙离子螯合剂均可不同程度地减弱其引发的胞内游离钙离子升高程度。 结论 谷氨酸通过多种途径影响星形胶质胞内钙信号 ,激活NMDA和AMPA受体是其中的重要机制之一。

蒺藜皂苷对缺氧/复氧诱导大鼠皮层神经元凋亡及细胞内钙变化的作用

目的:观察蒺藜皂苷(TTLS)对缺氧/复氧诱导的大鼠皮层神经元凋亡及细胞内游离钙离子浓度变化的影响。方法:原代培养大鼠皮层神经元,建立缺氧/复氧损伤的皮层神经元凋亡模型。比色法测定细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放漏出率;AnnexinV-FITC/PI双染,流式细胞仪定量分析细胞凋亡百分率;Fluo-3荧光染色,激光扫描共聚焦显微镜观察细胞内钙平均荧光值变化。结果:缺氧3h复氧12h可诱导出皮层神经元凋亡,引起细胞内钙离子浓度增高,高于对照组(P<0.01)。蒺藜皂苷(0.025g/L)能明显降低缺氧/复氧诱导的神经元凋亡,并可降低细胞内钙浓度,与模型组比较有显著差异(P<0.01)。结论:蒺藜皂苷可降低由缺氧/复氧诱导的皮层神经元的凋亡,减轻细胞损伤,这种作用机制可能与其抑制神经细胞内钙超载有关。

缺氧诱导心肌细胞凋亡与Caspase-3激活及细胞内钙超载的关系

目的 :研究缺氧对心肌细胞Caspases的激活效应与细胞内钙的关系。方法 :将培养的心肌细胞暴露于 95 %N2 / 5 %CO2 混合气体培养室进行缺氧处理 ,缺氧 0、30min、1、3、6、12、2 4h后 ,应用激光共聚焦显微镜检测缺氧早期心肌细胞胞浆游离钙的变化 ;应用细胞内钙螯合剂、Caspase 1与Caspase 3特异性抑制剂预处理心肌细胞后缺氧12h ,检测DNA片段化与Caspase 3活性 ;Westernblot、RT PCR方法分别检测细胞线粒体与胞浆中Cytc蛋白的变化以及Caspase 3mRNA表达的改变。 结果 :缺氧后 30min心肌细胞胞浆游离钙即显著增高 ,1h达到峰值。缺氧3h线粒体Cytc无显著变化 ,而胞浆中Cytc开始增多 ,至缺氧 12h ,线粒体中Cytc仅见一弱阳性条带 ,而胞浆呈强阳性反应 ,缺氧 2 4h线粒体中已不能检测到Cytc。缺氧 3h心肌细胞Caspase 3mRNA上调 ,在观察的 2 4h内持续处于高表达状态。分别应用Caspase 3抑制剂和细胞内钙螯合剂预处理心肌细胞后均可使心肌细胞Caspase 3活性降低并完全阻断DNA片段化发生 ,细胞内钙螯合剂与Caspase 3抑制剂联合应用使凋亡细胞百分率降低的程度比分别单独使用两者更明显。结论 :缺氧可致心肌细胞线粒体Cytc释放至胞浆 ,导致Caspase途径激活 ,从而导致细胞凋亡。缺氧所致心肌细胞钙超载在时序上早于?

滨蒿内酯对豚鼠气管平滑肌细胞细胞内钙离子浓度的影响

目的 :探讨滨蒿内酯 (Scop)松弛豚鼠气管平滑肌的机制。方法 :进行豚鼠气管平滑肌细胞分离 ,通过负荷钙离子荧光指示剂fluor 3 AM进行 [Ca2 + ]i 测定。结果 :Scop可直接降低豚鼠气管平滑肌 [Ca2 + ]ii,并且能抑制磷酸组织胺 (His)和咖啡因 (caffeine)对气管平滑肌 [Ca2 + ]i 的升高作用。结论

全氟辛酸对大鼠海马细胞内钙离子浓度的影响

采用连续灌胃染毒的方法,探讨了全氟辛酸(Perfluorooctanoic acid,PFOA)经口急性染毒对大鼠海马细胞内钙离子浓度的影响.选择雄性Wistar大鼠40只,实验组PFOA染毒剂量分别为2、8、30mg·kg-1(bw).连续灌胃染毒7天后,制备海马单细胞悬液,采用Fura-2/AM荧光探针法测定海马细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i),使用固相萃取-高效液相色谱/质谱联机法(HPLC/MS-MIS)检测血清与脑组织中PFOA浓度.结果表明,染毒组大鼠血清与脑中PFOA浓度均显著高于对照组水平(p<0.01),血清与脑中PFOA浓度之间存在显著的正相关关系(r2=0.611,p<0.01).PFOA染毒8、30mg·kg-1(bw)实验组海马细胞[Ca2+]i分别为(207.89±22.84)nmol·L-1和(284.19±14.75)nmol·L-1,显著高于对照组((141.68±11.47)nmol·L-1)和PFOA染毒2mg·kg-1(bw)实验组((147.38±19.23)nmol·L-1)(p<0.01).大鼠脑、血清中PFOA浓度分别与海马[Ca2+]i存在正相关关系(r2=0.552,p<0.01;r2=0.756,p<0.01).研究结果显示,PFOA暴露可使血清和脑组织中PFOA浓度增加,引起大鼠海马神经元细胞[Ca2+]i升高.

血管钠肽抑制低氧对大鼠心成纤维细胞内钙浓度升高的作用

为了观察血管钠肽 (vasonatrinpeptide ,VNP)对低氧作用时心成纤维细胞增殖的影响 ,将分离纯化乳鼠心成纤维细胞 ,随机分为 4组 :对照组、低氧组 ( 2 %～ 3 % )、VNP组 ( 10 -8～ 10 -6 mol/L)和VNP +低氧组。用MTT比色法、3H TdR掺入法观察细胞增殖情况 ,采用激光共聚焦方法研究VNP对细胞内钙浓度 ( [Ca2 +]i)水平的影响。旨在探讨VNP对低氧刺激心成纤维细胞增殖的影响及机制。我们发现 ,低氧可以使培养的乳鼠心成纤维细胞MTT光吸收值 (OD值 )较对照组显著增高 (P <0 0 5 )。VNP ( 10 -6 mol/L)可以显著降低低氧刺激的心成纤维细胞MTTOD值和细胞内 3H TdR掺入量的增高 (P <0 0 5 )。对照组 [Ca2 +]i 水平无显著差异 ,低氧组 [Ca2 +]i 水平显著升高 ,而VNP ( 10 -6 mol/L)能使升高的 [Ca2 +]i 水平较对照组、低氧组显著降低 (P <0 0 5 )。结果表明 ,VNP能减弱低氧对心成纤维细胞生长的刺激作用 ,其机制可能与Ca2 +等信号转导分子有关。

针刺足阳明经穴对家兔胃窦平滑肌细胞内钙离子浓度的影响

目的:探讨针刺足阳明经穴对胃平滑肌细胞内第二信使Ca^(2+)的影响。方法:将45只家兔随机分为生理盐水组、阿托品模型组、针刺足阳明经穴组、针刺足少阳经穴组、针刺足太阳经穴组,每组9只。分组处理后,取胃窦平滑肌,制成活的单个平滑肌细胞悬液,以荧光分光光度计测定细胞内钙离子浓度([Ca^(2+)]i),结果:针刺足阳明经穴组胃窦平滑肌细胞内[Ca^(2+)]i明显高于阿托品模型组(P<0.01),而其他各组间细胞内[Ca^(2+)]i差异均无显著性意义(P>00.5)。结论:针刺足阳明经穴对胃运动的影响与胃平滑肌细胞内Ca^(2+)

针刺通过颅脑损伤大鼠血清对SY5Y细胞内钙离子浓度的影响

目的:研究针刺通过颅脑损伤大鼠血清对SY5Y细胞内钙离子[Ca2+]i的影响。方法:采用激光共聚焦显微镜的动态扫描功能和荧光分子探针技术,从针灸血清学和细胞学角度,对针刺通过颅脑损伤大鼠血清对SY5Y细胞[Ca2+]i的影响进行研究。结果:各组血清孕育后SY5Y细胞[Ca2+]i相比较显示,模型对照组的荧光强度明显高于空白对照组(P<0.01),而针刺治疗组的荧光强度虽然也高于空白对照组(6h组除外),但明显低于模型对照组(P<0.01)。结论:颅脑损伤大鼠的血清可使SY5Y细胞[Ca2+]i升高,针刺可以通过血清减缓此过程的发生。

机械牵拉对培养人视网膜色素上皮细胞内钙离子的影响

目的:观察培养人视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelial cells,RPEs)在受机械牵拉力时细胞内Ca^2+的变化。方法:将胶原包被的磁珠悬液加入培养人RPE细胞后孵育,附着磁珠的细胞放置在恒定磁场中,使用钙荧光指示剂fluo-3/AM和激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察在机械牵拉作用的前后细胞内钙离子的变化情况。结果:RPE细胞荧光着色很强,遍布整个细胞,其中细胞核比细胞质更强。机械牵拉后荧光强度显著增强,加入氯化锰后迅速降低。EGTA预处理的细胞在受力后荧光强度增加不显著,加入氯化钙后明显增强。细胞松弛素D预处理的细胞在受力后荧光强度比正常组增高2倍以上。结论:机械牵拉能显著增加钙离子内流,并且增加细胞内的钙库释放。钙离子内流可能是RPE细胞损伤前的信号。

滨蒿内酯对原代和传代培养豚鼠气道平滑肌细胞内钙的影响

目的探讨滨蒿内酯(scoparone,Scop)对原代及短期传代培养的豚鼠气道平滑肌细胞(airway smooth musclecells,ASMCs)内钙的影响,同时,比较原代与传代ASMCs在形态、生长曲线及内钙释放受Scop及caffeine影响的异同。方法细胞计数法绘制原代及传代培养ASMCs的生长曲线,应用Fluo-3/AM为细胞内Ca2+示踪剂,通过倒置荧光纤维镜观察和记录原代及短期传代培养的ASMCs的细胞形态及其细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的改变。结果原代和传代培养ASMCs的倍增时间分别为(31.89±1.24)h和(22.91±6.82)h,传代培养ASMCs的倍增时间明显缩短(P<0.05),传代培养的ASMCs相对原代培养ASMCs体积增大。在细胞外液无钙条件下,不同浓度的Scop(10-6、10-5、10-4mol.L-1)可降低静息状态下培养的ASMCs的[Ca2+]i,并与给药浓度有关,原代与传代培养的ASMCs比较,对不同浓度的Scop的降钙反应无明显异同(P>0.05);不同浓度咖啡因(caffeine,10-4、10-3、10-2mol.L-1)在10-4mol.L-1Scop存在下,可升高ASMCs的[Ca2+]i,传代培养的ASMCs[Ca2+]i较原代对caffeine的反应下降(P<0.01)。结论Scop可降低培养的ASMCs的[Ca2+]i,并且不受细胞传代影响。短期传代培养的ASMCs相对于原代细胞,形态及内钙释放通道特性发生了改变。

蝙蝠葛碱拮抗缓激肽诱导人成神经细胞瘤细胞胞内钙升高的作用

目的 胞内钙离子浓度升高是Alzheimer病 (AD)显著的病理生理学变化之一 ,本研究讨论蝙蝠葛碱对缓激肽诱导人成神经细胞瘤细胞胞内钙升高的影响。方法 采用钙荧光探针Fura 2 /AM定量测试了蝙蝠葛碱 (Dau)对缓激肽诱导的人成神经细胞瘤细胞 (SH SY5Y)胞内钙升高作用的影响。结果 Dau可显著抑制缓激肽所致胞内钙离子浓度 ([Ca2 + ]i)升高 ,并存在剂量 效应关系。结论 Dau有抑制AD样 [Ca2 + ]i升高的作用 ,为AD的发病机制和防治提供了新的线索。

黄芪甲苷对心肌细胞L型钙电流及细胞内钙的影响

目的研究黄芪甲苷(astragaloside IV,AS-IV)对豚鼠心室肌细胞L型钙电流和细胞内钙的影响。方法分离单个豚鼠心室肌细胞,应用全细胞膜片钳技术测定钙电流,并采用荧光显微镜CCD成像系统动态观察细胞内钙(intracellular calcium concentration,[Ca2+]i)变化。结果 1×10-6mol·L-1AS-IV可明显抑制I Ca-L,使最大电流峰值降低32.6%。AS-IV对60 mmol·L-1KCl诱导的[Ca2+]i升高有抑制作用,最大荧光密度变化值从1.17±0.30(n=6)降低到0.26±0.16(n=5,P<0.05)。AS-IV可直接促进钙池内钙释放,使[Ca2+]i从0.08±0.02(n=10)升高到0.23±0.07(n=8,P<0.05)。结论 AS-IV抑制L型钙通道,可减少细胞外钙内流;同时它促进内钙释放,对心肌细胞内钙稳态表现为双向调节作用。

过量摄氟后大鼠肾细胞内钙水平与氧化应激损伤研究

目的研究过量氟对大鼠肾细胞中游离钙( [Ca2+] i )水平的影响与氧化应激的关系。方法应用饮水加入氟化钠进行大鼠染毒实验,采用Fura鄄2/AM荧光指示剂测定慢性氟中毒大鼠肾细胞内[Ca2+] i浓度的变化,同时测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH鄄Px)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性和脂质过氧化终产物丙二醛(MDA)生成。结果过量氟可刺激肾细胞内[Ca2+] i浓度增高,高钙加氟组与高钙对照组相比差异有显著意义(P< 0.05),低钙加氟组高于低钙对照组(P< 0.001);SOD活力水平低钙加氟组低于低钙对照组,差异有显著意义(P< 0.05),MDA生成低钙加氟组高于低钙对照组(P< 0.05);GSH鄄Px活力变化不明显。结论(1)过量氟所致的大鼠细胞内[Ca2+] i超载和不同程度的氧化侵袭,可能在氟骨症病理过程中起重要作用;(2)投氟伴随低钙可加重细胞内[Ca2+] i超载和氧化侵袭,提示钙营养与氟中毒发病有着重要联系。

西红花苷对培养的牛内皮细胞内钙的调节作用

目的 观察西红花苷对不同刺激因子5-羟色胺（5-HT）、组胺（His）、过氧化氢（H2O2）所致内皮细胞内钙升高的影响。方法 采用Fluo-3/AM荧光染色剂负载细胞,在激光共聚焦扫描显微镜上测定培养的单个牛内皮细胞内游离钙的浓度。结果 在含钙的Hank’s液中,5-经色胺、组胺、过氧化氢能明显升高静息状态的细胞内钙,增幅分别为280％、320％、285％。西红花苷1、10μmol/L对5-羟色胺、组胺、过氧化氢引起的钙增高有显著的抑制作用,并呈一定的剂量依赖性。0.1μmol/L西红花苷对细胞内钙升高无显著影响。结论 西红花苷抗动脉粥样硬化、高血压及炎症作用可能与其内皮细胞保护作用有关。

低浓度的哇巴因引起豚鼠心室肌细胞内钙增高的可能途径

目的观察哇巴因（ouabain，OUA）对豚鼠心室肌细胞内游离钙浓度（[Ca^2＋]i）的影响。方法酶解分离豚鼠心室肌细胞，负载Flu03-AM，激光共聚焦显微镜术测定单个心室肌细胞[Ca^2＋]。的荧光密度，结果用相对荧光强度（FI—FI0）／FI0（％）表示，其中，FI0：给药前的荧光密度值，FI：给药后的荧光密度值。结果在正常台氏液及无钙台氏液中，OUA（1×10^-9-1×10^-6mol·L^-1）浓度依赖性地升高细胞内钙浓度，在正常台氏液分别为16．7±6．8（P〈0.01）、26.0±4.7（P〈0.01）、183.0±101．0（P〈0.01）、295.0±172.0（P〈0.01），而在无钙台氏液中OUA升高[Ca^2＋]，不如在正常台氏液中，分别为9．19±4、73（P〈0.05）、20.75±5、2（P〈0.05）、85.79±64.7（P〈0.05）、231.0±26．0（P〈0.05）。肌浆网钙通道抑制剂理阿诺碱Ryanodine（1×10^-5mol·L^-1）可部分抑制正常台氏液时OUA的效应5、3±2、1（P〈0.01）。在无钠无钾台氏液中，OUA（1×10^-9-1×10^-6mol·L^-1）对心室肌细胞[Ca^2＋]．的影响分别为16.5±6.5、25.0±5.0、162．0±45．0.280．0±96.0与正常台氏液比较无差别（P〉0．05）。蛋白酪氨酸激酶抑制剂三羟异黄酮（genistein，GST；1、10、50、100μmol·L^-1）可浓度依赖性地抑制正常台氏液中的OUA效应，分别为17．5±3．1、14.2±8.9、0.8±7．6（P〈0.05）、-1．9±6．7（P〈0．01）。L-型钙通道激动剂Bay K8644，肌浆网钙通道开放剂Ryanodine（1×10^-7mol·L^-1）在正常台氏液中均可提高[Ca^2＋]；为13．3±3.2（P〈0．05）、6．4±5.6（P〈0．05）。三羟异黄酮可取消其效应为-13．0±21．0（P〈0．01）、-1.6±5．9（P〈0.01）。结论低浓度的OUA升高豚鼠心室肌细胞内游离钙浓度，此作用与其开放钙通道及促进内钙释放有关，且信号转导通过此二途径起作用。