赖型钩端螺旋体内鞭毛蛋白基因的体外扩增、分子克隆、核苷酸序列分析及其编码33kDa内鞭毛蛋白对BALB/c小鼠的兔疫/保护作用

戴保民教授于1986年任博士导师,1981～1987年任卫生部医学科学委员,1986～1993年任国际细菌学会钩端螺旋体命名委员会协作委员,1992～1997年任卫生部自然疫源性疾病专家咨询委员,1990年获卫生部科技进步一等奖,1992年获国家科技进步三等奖。

问号赖型钩体与七日热型钩体内鞭毛蛋白基因的克隆及序列分析

目的 筛选钩体核酸疫苗的候选株 ,并从基因水平解释钩体血清型的特异性。方法 通过 PCR方法扩增赖型 0 17株及七日热型 5 6 6 10株钩体的内鞭毛蛋白 (fla B)基因 ;经 T/A快速克隆法将 PCR产物连接于PGEM- T Easy Vector载体。用 α-互补法、PCR法及酶切分析鉴定重组质粒 ,获得了重组质粒 p DHTF0 17和p DHTF6 10 ;双脱氧终止法对两个重组质粒中的克隆化 fla B基因进行测序。结果 两型 fla B基因长 85 2 bp,编码2 83个氨基酸。两个基因的限制性内切酶位点相似 ,含多个常见酶切位点。基因编码的蛋白质预测相对分子质量为31.3× 10 3。结论 几个血清型的 fla B基因同源性达 90 %～ 99%。

赖型钩体flaB2与VR1012中的CpG基序分析

目的 对问号赖型钩端螺旋体 (赖型钩体 ) DNA疫苗〔包括内鞭毛蛋白基因 (fla B2 )和质粒 DNA表达载体 (VR10 12 )〕的 Cp G基序 (Cp G motifs)进行分析 ,为 DNA疫苗免疫机制的阐明和提高 DNA疫苗的效能奠定基础。方法 以 fla B2与 VR10 12构建重组 DNA的免疫原 ,对 fla B2及 VR10 12全核苷酸序列进行计算机分析 (分类、计数和定位 )。结果 Cp G的“C”的侧翼为两个嘌呤 ,“G”的侧翼为两个嘧啶 ,在 fla B2中共 3个 ,分别为GACGCT,GACGTC和 GACGCC;在 VR10 12中共 11个 ,分别为 GACGTC1个 ,GACGCT2个 ,GACGCC1个 ,GACGTT1个 ,GGCGTT2个 ,GGCGCT2个 ,GGCGCC1个 ,AACGCT1个 ,其中特别重要的 TGACGTCA4个和 TAACGCCA有 1个 ,位于 5′端 4 5 6～ 4 6 3;5 0 9～ 5 16 ;5 92～ 5 99;778～ 785和 4 86～ 4 93;4个 TGACGTCA和 1个TAACGCCA均位于 5′端且相对集中。结论 赖型钩体 fla B2与 VR10 12构成的 DNA疫苗含有 TGACGTCA等Cp G,这些基序又称免疫刺激序列 ,构成了