高乌头药材常规项检查及高乌甲素、冉乌头碱含量测定

目的对高乌头药材进行常规项检查并测定高乌甲素、冉乌头碱含量,为建立高乌头药材质量标准提供参考。方法采集不同产地高乌头药材,采用薄层色谱法进行定性鉴别,按药典水分测定法(烘干法)、灰分测定法、浸出物测定法测定水分、灰分和浸出物,采用HPLC测定高乌甲素和冉乌头碱含量。结果薄层色谱斑点清晰,分离度好;暂定高乌头药材中水分、总灰分及酸不溶性灰分分别不得过11.0%、12.0%、7.0%,水溶性浸出物和醇溶性浸出物分别不少于18.2%、10.6%;高乌头药材中冉乌头碱和高乌甲素含量分别不少于0.125%、0.815%。结论本研究所建立的方法准确可靠,可用于高乌头药材质量评价。

中国乌头的研究——ⅩⅩⅡ.赣皖乌头生物碱的研究

从赣皖乌头(Aconitum finetianum Hand-Mazz)中又分得五个生物碱,其中三个为新的二萜类生物碱,分别命名为去氧刺乌头碱(deoxylappaconitine,3),赣乌新碱(neofinaconitine,4)和异刺乌头碱(isolappaconitine,5).经IR、MS、H和C NMR推定了它们的化学结构.另两个为已知生物碱ajacine(1)和inuline(2).

高乌头不同溶剂萃取部位HPLC多波长指纹图谱研究

目的建立一种评价多波长色谱指纹图谱的新方法——均谱法(MFM),用于高乌头药材不同极性部位HPLC指纹图谱研究,为全面评价高乌头药材的质量提供参考。方法采用系统溶剂法对不同产地高乌头药材95%乙醇提取物进行萃取,依次得到石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、乙醇和水6个不同的溶剂萃取部位;采用HPLC法分别于235,254,280,290,308 nm紫外波长下检测,将每个萃取部位5个波长下HPLC图谱的信号加和后求平均值作为该部位的均谱;采用中药指纹图谱相似度评价系统(2012版)对10批高乌头药材不同溶剂萃取部位HPLC均谱进行共有峰确认及相似度评价。结果建立了高乌头药材不同溶剂萃取部位的多波长指纹图谱(MWCF),高乌头石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、乙醇及水提部位MWCF分别确定了36,26,34,24,16,19个共有峰,均指认了2个指纹峰(高乌甲素和冉乌头碱)。不同产地高乌头药材同一极性部位MWCF相似度较高,说明10批不同产地高乌头药材基源一致,且提示提取和萃取工艺相对稳定;不同极性部位之间化学成分有明显差异,共有峰数目从多到少,高乌甲素和冉乌头碱从有逐渐变到无,充分表征了有效成分在各个萃取部位的分布特征。结论所建的均谱法能够使高乌头药材化学指纹信息最大化,能够最大限度地表征高乌头药材指纹图谱特征,不同溶剂萃取部位MWCF可以全面反映高乌头药材的化学成分分布,为高乌头药材的整体质量评价提供参考。

紫花高乌头药材的质量标准研究

目的建立紫花高乌头药材的质量标准,提高其质量控制水平。方法采用薄层色谱(TLC)对不同产地紫花高乌头药材进行定性鉴别;按《中国药典》方法测定其水分、灰分与浸出物;采用高效液相色谱-二极管阵列检测(HPLC-DAD)技术建立不同产地紫花高乌头药材指纹图谱并对其有效成分进行含量测定。结果不同产地紫花高乌头药材TLC斑点清晰,分离度好;暂定其药材水分、总灰分及酸不溶性灰分分别不得过10.0%、11.0%、4.5%,醇溶性浸出物应不少于24.0%;建立了紫花高乌头药材指纹图谱,标定共有峰14个,紫花高乌头药材中高乌甲素与冉乌头碱的含量应不少于0.126%、0.018%。结论该研究所建立的方法准确可靠、重复性好、特征性强,可用于紫花高乌头药材的质量评价。

基于模拟炮制技术的高乌头炮制过程中主要生物碱含量动态变化研究

目的 探讨甘草汁蒸制高乌头过程中主要生物碱含量动态变化规律。方法 将高乌头加甘草汁和不加甘草汁分别蒸制0,0.5,1,2,3,4,5 h,干燥处理,采用HPLC测定高乌头不同炮制品中高乌甲素、冉乌头碱以及新增成分的含量;采用高乌甲素和冉乌头碱对照品进行模拟炮制;采用制备液相分离新增成分并结合NMR及UPLC-QTOF-MS进行鉴定。结果 高乌头加或不加甘草汁蒸制过程中,随蒸制时间的延长,高乌甲素和冉乌头碱含量明显降低,同时产生2个新峰(峰1,峰2),其含量明显增加,说明新增成分和甘草汁无关,而与蒸制处理有关,对比不加甘草汁蒸制,加甘草汁蒸制后毒-效成分高乌甲素和冉乌头碱含量降低幅度适中,说明加甘草汁比不加甘草汁蒸制合理;模拟炮制结果显示,炮制过程中高乌甲素和冉乌头碱含量逐渐降低;经鉴定新增成分(峰2)为5-羟基甲糖醛。结论 高乌头炮制后主要生物碱成分发生了较大变化,可能与加甘草汁蒸制“减毒存效”密切相关。

不同产地高乌头药材HPLC指纹图谱及2种生物碱成分含量测定

目的:建立不同产地高乌头药材的HPLC指纹图谱,并测定其中2种主要生物碱成分含量,为高乌头药材质量控制提供参考依据。方法:采用HPLC-DAD技术,以Dikma spursil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),乙腈-0.05 mol·L^(-1)磷酸二氢钠水溶液为流动相梯度洗脱,建立高乌头药材的指纹图谱并进行含量测定;采用中药指纹图谱相似度评价系统(2012版)对10批样品进行共有峰确认及相似度评价;通过SPSS 21.0统计软件采用主成分分析(PCA)和聚类分析(CA)对HPLC指纹图谱进行模式识别分析。结果:建立了高乌头药材指纹图谱,10批高乌头药材的相似度均>0.90;标定共有峰11个,并对其中2主要成分(高乌甲素、冉乌头碱)进行含量测定;聚类分析法(CA)将所有批次高乌头药材共分为4类,反映了10个批次不同地区高乌头药材的质量特征;主成分分析法(PCA)筛选出累计贡献率达到89.748%的4个主成分,得到决定高乌头药材质量5个化学成分。结论:建立的HPLC指纹图谱结合含量测定,PCA,CA方法,可以客观、有效、全面地用于高乌头药材的质量评价。

高乌头炮制品的HPLC指纹图谱研究及其2种生物碱成分含量测定

目的建立不同产区高乌头炮制品的HPLC指纹图谱,并测定2种生物碱成分的含量,为高乌头制品质量控制提供参考依据。方法通过HPLC梯度洗脱建立高乌头炮制品的指纹图谱,并采用中药指纹图谱相似度评价系统(2012版)、主成分分析和聚类分析对指纹图谱进行分析。结果建立了高乌头炮制品指纹图谱,10批高乌头制品的相似度>0.90,标定共有峰18个,并对其中2主要成分(高乌甲素、冉乌头碱)进行含量测定;聚类分析将所有批次高乌头制品分为4类,反映了10批不同产区高乌头制品的质量特征;主成分分析筛选出累计贡献率达到88.8%的4个主成分,得到决定高乌头药材质量7个化学成分。结论该方法重复性好、特征性强,可用于高乌头炮制品全面质量评价。

蒙药紫花高乌头HPLC指纹图谱及生物碱含量测定

目的:建立蒙药紫花高乌头药材HPLC指纹图谱及生物碱含量测定方法,用于不同产地紫花高乌头药材的质量评价。方法:采用Phenomenex Gemini C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.04mol·L-1醋酸铵溶液为流动相进行梯度洗脱建立紫花高乌头药材的指纹图谱,并测定高乌甲素与冉乌头碱含量;采用相似度评价、聚类分析(CA)和主成分分析(PCA)3种方法对10批紫花高乌头药材指纹图谱进行研究。结果:建立了紫花高乌头药材HPLC指纹图谱,确定了14个共有峰,测定了10批次样品中高乌甲素与冉乌头碱含量;通过相似度评价、聚类分析及主成分分析结果可知10批紫花高乌头药材质量有差异,栽培品和野生品种之间质量有明显差异。结论:建立的HPLC指纹图谱结合含量测定,PCA和CA方法可以客观、有效、全面地用于紫花高乌头药材的质量评价。

甘草汁蒸制高乌头后“减毒存效”部位化学成分UPLC-Q-TOF-MS分析

目的:分析高乌头炮制前后三氯甲烷部位化学成分并揭示炮制后化学成分的转化机制。方法:通过系统溶剂法制备高乌头炮制前后三氯甲烷部分,采用UPLC-Q-TOF-MS技术对比研究高乌头炮制前后三氯甲烷部位化学成分变化规律;采用模拟炮制技术,发现高乌甲素及冉乌头碱炮制前后发生质变与量变特征成分的转化机制,从而揭示甘草汁蒸制高乌头后“减毒存效”的炮制原理。结果:高乌头炮制后化学成分组成及比例发生明显变化,其中有7个成分消失,新增30个成分。从生品三氯甲烷部分中检测到30个化合物,共鉴定出9个;从制品三氯甲烷部分中检测到53个化合物,其中有30个为新增成分,共鉴定出13个。对比炮制前后化学成分,发现炮制后消失的成分为8-O-acetylexcelsine,推测此成分可能为毒性成分;炮制后新增成分有高乌宁乙、L49/50、L6、L19、邻氨基苯甲醛,可能为药效物质基础。结论:高乌头炮制后发生质变与量变特征成分的转化途径有多种,这些转化途径可能为甘草汁蒸制高乌头的解毒途径。

紫花高乌头药材的TLC鉴别及主要生物碱的测定

目的对紫花高乌头药材进行TLC检查并测定其主要生物碱高乌甲素、冉乌头碱的含量。方法采用TLC法对紫花高乌头进行定性鉴别;采用HPLC法测定药材中乌甲素、冉乌头碱的含量;按《中国药典》中的方法测定其水分、灰分与浸出物的含量。结果紫花高乌头药材的TLC斑点清晰,分离度好;暂定药材的水分、总灰分及酸不溶性灰分分别不得过10.0%、11.0%、4.5%,醇溶性浸出物应不少于24.0%;紫花高乌头药材中高乌甲素、冉乌头碱的含量应不少于0.126%、0.018%。结论所用方法简便准确,可用于紫花高乌头药材的质量评价。

高乌头炮制前后镇痛抗炎活性部位HPLC指纹图谱建立及质量研究

目的建立高乌头炮制前后镇痛抗炎活性部位指纹图谱,从物质基础上揭示高乌头炮制后镇痛抗炎活性增强的原因。方法通过HPLC梯度洗脱分别建立10批不同地区高乌头药材炮制前后三氯甲烷萃取部分的指纹图谱,并采用中药指纹图谱相似度评价系统(2012版)进行分析。结果建立了生、制高乌头三氯甲烷活性部位HPLC指纹图谱;在生、制品三氯甲烷活性部位图谱中分别标出3个共有峰、15个共有峰,制品新增12个峰,其中1、2、7号峰增加特别明显,占新增峰面积的72.3%~84.5%;同时对生、制品三氯甲烷部分2个共有成分(高乌甲素、冉乌头碱)进行定量测定,炮制后其量均降低,冉乌头碱量降低至原来的1/3。结论该方法重现性好、特征性强,可用于高乌头生、制品镇痛抗炎活性部位的质量评价,为阐明高乌头炮制前后物质基础变化及炮制原理提供科学依据。

高乌头活性成分提取工艺的优化

为开发并优化高乌头(Aconitum sinomontanum)中有效成分高乌甲素及冉乌头碱的提取工艺,采用高效液相色谱法测定高乌甲素及冉乌头碱含量,以二者综合提取率为考察指标,采用正交实验设计优选最佳提取工艺。结果表明,优选工艺为药材粉末加10倍量的80%甲醇及2%药材量的浓盐酸,在75°C下回流提取6小时。经验证,优选所得的工艺稳定可行,可作为高乌头活性成分提取的新工艺。

高乌头炮制品质量标准研究

目的:建立高乌头炮制品质量标准,提高其质量控制水平。方法:采用性状、TLC对高乌头炮制品进行定性鉴别;采用HPLC对其有效成分进行含量测定;采用药典方法测定其水分、灰分和浸出物。结果:高乌头炮制品薄层色谱斑点清晰,分离度好;暂定其炮制品药材水分、总灰分及酸不溶性灰分分别不得过12.5%、10.9%、5.3%,水溶性浸出物和醇溶性浸出物应分别≥24.8%、21.8%;高乌头炮制品中冉乌头碱与高乌甲素的含量应≥0.059%、0.438%。结论:该研究所建立的方法准确可靠,可用于高乌头炮制品质量控制和评价。

高乌头炮制品HPLC指纹图谱建立及质量研究

目的建立统一条件的色谱指纹图谱鉴别和含量测定分析方法,用于不同产区高乌头炮制品的质量研究。方法通过HPLC梯度洗脱建立高乌头炮制品的指纹图谱,并采用中药指纹图谱相似度评价系统(2012版)、主成分分析(PCA)和聚类分析(CA)对指纹图谱进行分析。结果建立了高乌头炮制品指纹图谱,10批高乌头制品的相似度均大于0.90,标定共有峰18个,并对其中2主要成分(高乌甲素、冉乌头碱)进行含量测定,聚类分析(CA)将所有批次高乌头制品分为4类,反映了10批不同产区高乌头制品的质量特征;主成分分析筛选出累计贡献率达到88.824%的4个主成分,得到决定高乌头药材质量7个化学成分。结论该方法重现性好、特征性强可用于高乌头炮制品全面质量评价。

LC-Q-TOF/MS方法分析氢溴酸高乌甲素及其注射剂中有关物质

目的:研究氢溴酸高乌甲素及其注射剂中有关物质。方法:建立HPLC方法对2批氢溴酸高乌甲素原料药及21批注射剂中的有关物质进行了考察,采用LC-Q-TOF/MS技术对主要有关物质的结构进行了初步鉴定。结果:氢溴酸高乌甲素原料药及其注射剂中主要存在6个有关物质,分别为高乌宁辛、N-去乙酰基高乌甲素、冉乌头碱、异刺乌头碱、9-去氧基刺乌头碱和刺乌宁。其中刺乌宁为氢溴酸高乌甲素酯键水解的降解产物,其余杂质来源于原植物。结论:建立的方法能有效地分离主成分氢溴酸高乌甲素与有关物质,为氢溴酸高乌甲素原料药及其注射剂的质量控制、工艺优化及贮存提供参考。