GRSF1/GPX4轴调控的铁代谢紊乱在小鼠脑缺血再灌注损伤中的作用

目的探讨GRSF1/GPX4轴调控的铁代谢紊乱在小鼠脑缺血再灌注损伤中的作用。方法清洁级雄性C57BL/6小鼠18只,采用随机数字表法将其分为假手术组、脑缺血再灌注组、脑缺血再灌注+GRSF1过表达组,每组各6只。脑缺血再灌注组采用线栓法制备小鼠脑缺血再灌注损伤模型;脑缺血再灌注+GRSF1过表达组于造模前7天注射GRSF1过表达慢病毒。再灌注24h后行神经功能评分,TUNEL法检测细胞凋亡率,Western blot法检测GRSF1、GPX4、IRP2、TfR1和铁蛋白表达水平。结果与假手术组比较,脑缺血再灌注组神经功能评分、凋亡率、IRP2、TfR1、铁蛋白表达水平升高,GRSF1、GPX4表达水平降低(P<0.05);与脑缺血再灌注组比较,脑缺血再灌注+GRSF1过表达组神经功能评分、凋亡率、IRP2、TfR1、铁蛋白表达水平降低,GRSF1、GPX4表达水平升高(P<0.05)。结论过表达GRSF1通过上调GPX4抑制铁离子代谢紊乱进而减轻小鼠脑缺血再灌注损伤。

控制性再灌注对急性冠状动脉综合征患者PCI术后再灌注损伤和不良事件的影响

目的 探讨控制性再灌注对急性冠状动脉综合征患者行经皮冠状动脉介入治疗PCI术后再灌注损伤和不良事件的影响。方法 选择2019年6月至2023年12月于南京医科大学附属明基医院接受治疗的100例行PCI手术的急性冠状动脉综合征患者作为研究对象,根据随机数字表法将其分为完全再灌注组和控制性再灌注组各50例。完全再灌注组于球囊扩张成形后立刻植入支架,控制性再灌注组于球囊扩张成形,血流开通并获得有效再灌注后延迟30 min植入支架。植入支架后对所有患者均进行为期1 h的冠状动脉内双传感器导线连续压力和流量信号实时监测,测量患者术后的血流动力学变化和心肌标志物水平,记录患者术后的不良事件发生情况。并通过Pearson相关性分析再灌注压力和零流量压力(Pzf)、肌钙蛋白T、肌酸激酶同工酶(CK-MB)峰值水平的相关性。结果 术后40 min开始充血时平均峰值速度、小动脉阻力指数水平控制性再灌注组高于完全再灌注组(P <0.05);术后即刻、术后20 min的平均远端静息压(Pd)水平控制性再灌注组低于完全再灌注组(P <0.05);术后即刻、术后20 min、术后60 min的基线微血管阻力(hMR)水平控制性再灌注组低于完全再灌注组(P <0.05);术后40 min开始Pzf水平控制性再灌注组低于完全再灌注组(P <0.05);术后24 h的肌钙蛋白T、CK-MB水平均高于治疗前,但控制性再灌注组低于完全再灌注组(P <0.05);术后24 h的乳酸脱氢酶水平低于手术前,且控制性再灌注组低于完全再灌注组(P <0.05);再灌注早期的Pd与再灌注60 min后的Pzf呈正相关(r=0.553,P <0.05),与再灌注6 h、12 h、24 h后的CK-MB峰值呈正相关(r=0.324、0.301、0.432,P <0.05)。两组患者的术后不良反应发生情况比较差异无统计学意义(P> 0.05)。结论 急性冠状动脉综合征患者PCI术后进行压力控制性再灌注可以更好地保持冠状动脉微血管完整性,抑制缺血再灌注所引起的再灌注损伤,且不会增加术后并发症的发生率。

铁死亡用于心肌缺血再灌注损伤治疗的研究进展

铁死亡是一种铁依赖性的脂质过氧化介导细胞膜损伤致细胞死亡的新方式,其受多种细胞代谢途径的调控,包括铁代谢、脂质代谢、氧化还原系统等,许多器官的损伤和退行性病变均与其相关,在治疗缺血性疾病和脂质过氧化相关的退行性变疾病中有巨大潜力。心肌缺血再灌注损伤(MIRI)是急性心肌梗死患者进行血运重建治疗后最常见的死亡原因,近年的研究表明铁死亡与MIRI密切相关,通过氧化应激、铁代谢、脂质代谢、内质网应激、炎症反应等影响MIRI,干预再灌注过程中的铁死亡可以有效改善心功能,减少梗死面积。本文就铁死亡在MIRI中的具体作用及相关研究进展予以综述。

基于脑肠轴探讨益气活血化浊解毒方对脑缺血再灌注损伤大鼠的影响

目的:基于脑肠轴探讨益气活血化浊解毒方(YHHJP)对脑缺血再灌注损伤(CIRI)大鼠脑组织炎症因子、脑和结肠组织紧密连接、肠道菌群及其代谢产物的影响。方法:50只SPF级雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham)、模型组(MCAO)、YHHJP低、中、高剂量组(TCM-L/TCM-M/TCM-H)。采用Zea Longa线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型,治疗3 d后观察神经功能缺损评分,TTC染色计算脑梗死面积,尼氏染色观察脑组织病理形态改变,HE染色观察脑和结肠组织病理形态改变,ELISA检测脑组织IL-1β、IL-6、TNF-α和血清LPS含量,生物化学法检测血清D-乳酸(D-LA)含量,实时荧光定量PCR检测脑组织ZO-1、Claudin-5和结肠组织ZO-1、Claudin-1基因表达,16S rDNA高通量测序检测肠道菌群。结果:与假手术组相比,模型组大鼠脑和结肠组织病理损伤严重,肠道菌群微生态结构存在明显差异,神经功能损伤加重,脑梗死面积增加,脑组织IL-1β、IL-6、TNF-α和血清LPS、D-LA含量升高,脑组织ZO-1、Claudin-5及结肠组织ZO-1、Claudin-1基因表达降低(P<0.05)。与模型组相比,YHHJP低、中、高剂量组大鼠脑组织和结肠组织病理损伤减轻,肠道菌群微生态紊乱得到改善,神经功能损伤减轻,脑梗死面积明显缩小,脑组织IL-1β、IL-6、TNF-α含量显著降低,结肠组织ZO-1、Claudin-1基因表达显著升高(P<0.05);YHHJP中、高剂量组大鼠血清LPS、D-LA含量明显降低,脑组织ZO-1、Claudin-5基因表达显著升高(P<0.05)。结论:YHHJP可改善CIRI,其机制可能与调节肠道菌群多样性,抑制肠道细菌代谢产物LPS、D-LA释放,增加紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-5、Claudin-1基因表达,下调炎症因子分泌有关。

缺血性脑卒中血管芯片的构建及再灌注内皮损伤机制研究

目的缺血再灌注损伤(IRI)是脑血管严重狭窄或堵塞后,血流恢复灌注而引发的继发性损伤。针对脑卒中患者采用的静脉溶栓(IVT)和机械取栓(MT)两种再灌注治疗均会引起脑IRI,然而这两种方法对血管内皮细胞的影响及机制研究却鲜有报道。据此,设计了一种气动控制的缺血性脑卒中血管芯片,用以动态模拟并实时观察缺血再灌注过程,探讨渐进(IVT)和瞬时(MT)再灌注对内皮功能的影响。方法构建缺血性脑卒中血管芯片,采用气动法分别模拟不同再灌注过程,检测内皮细胞内皮间充质转化(End MT)、促炎因子(MCP-1、IL-1β、IL-6)、血管黏附分子(ICAM-1、VCAM-1)和紧密连接(ZO-1、Occludin)等表达变化,并评估白藜芦醇(REV)和阿司匹林(ASA)两种药物对IRI的治疗效果。结果两种再灌注方式都会导致缺血后更严重的内皮功能障碍,血管内皮细胞发生End MT,促炎因子释放增加、黏附分子表达上调、紧密连接丢失。与渐进再灌注相比,瞬时再灌注的内皮功能损伤更为严重。REV和ASA对促炎因子和黏附分子的表达均有抑制作用。结论与瞬时再灌注(MT)相比,渐进再灌注(IVT)会造成更严重的内皮细胞功能障碍,血管内皮细胞发生End MT,触发更严重的炎症反应,因此MT对内皮功能影响更小。该芯片模型可作为IRI治疗药物的初步验证平台。

铁死亡在脑缺血再灌注损伤机制中的研究进展

铁死亡是近年来新发现的一种细胞死亡方式,参与了多种病理生理过程,如缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤、神经退行性疾病、肿瘤等。缺血性脑卒中(ischemia stroke,IS)目前在世界范围内缺乏有效防治手段,而铁死亡参与脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia reperfusion injoury,CIRI)过程,为治疗IS提供了希望。文章通过检索PubMed、万方、维普及CNKI等数据库近年来发表的相关文献后纳入50篇文章,从铁代谢、铁死亡的概念、机制和调控、铁死亡在CIRI机制中的作用以及抑制铁死亡的方法等方面入手,为探讨通过抑制铁死亡寻找潜在治疗IS的新策略的可能性提供参考。

铜死亡在脑缺血-再灌注损伤中的研究进展与展望

铜死亡是一种由铜离子(Cu^(2+)/Cu^(+))载体诱导发生的可调节的独特细胞死亡方式,其与细胞凋亡、焦亡、自噬和铁死亡等都不尽相同。本文就铜离子代谢、铜死亡的发生机制,以及其对脑缺血-再灌注损伤(CIRI)过程中产生的影响及其相关的可能作用路径作一综述,以期为靶向研究铜死亡来减轻CIRI提供新的思路,为脑卒中治疗提供新的方向。

当归-川芎药对改善脑缺血再灌注急性损伤的代谢组学机制分析

目的:运用代谢组学方法探究当归-川芎药对抗脑缺血再灌注急性损伤的可能机制。方法:60只雌性SD大鼠随机分成6组,每组10只。DG、CX和GX组按5倍临床剂量给药当归、川芎、当归-川芎药对;NM组按照20 mg/(kg·d)灌胃尼莫地平片混悬液;假手术组和模型组大鼠灌胃等体积生理盐水;连续灌胃7 d。除假手术组,其他5组于第7天采用线栓法制备大脑中动脉栓塞/再灌注(MCAO/R)损伤大鼠模型。再灌注24 h后,采集血清和脑组织标本,采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱(UPLC-QTOF/MS)技术进行非靶向代谢组学检测,利用非监督主成分分析(PCA)、有监督型偏最小二乘-判别分析(PLS-DA)和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)筛选差异代谢物,并进行代谢通路注释。结果:假手术组和模型组血清和脑组织代谢轮廓存在明显差异(P<0.05),共筛选出与MCAO/R相关的嘌呤类、磷脂类、脂肪酸类等19个潜在生物标志物,其中血清生物标志物5个,脑组织生物标志物14个。与当归-川芎药对治疗MCAO/R损伤密切相关的生物标志物有11个,主要与抗坏血酸与醛酸代谢、烟酸和烟酰胺代谢、甘油磷脂代谢、戊糖和葡糖醛酸的相互转化、柠檬酸循环等代谢通路有关。结论:当归-川芎药对可逆转脑缺血再灌注急性损伤大鼠的代谢紊乱,筛选出的内源性差异代谢物或可成为该药对治疗脑缺血再灌注急性损伤的潜在靶点。

Cyclin D1通过促进糖酵解改善肾脏缺血再灌注诱导的急性肾损伤的机制

目的探索CCND1通过促进糖酵解改善肾缺血再灌注诱导的急性肾损伤(AKI)的作用及其分子机制,为AKI提供新的治疗靶点。方法采用8周龄的C57/BL6雄性小鼠构建肾脏缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury,IRI)模型。使用CCND1过表达质粒及CCND1干扰质粒,在体内及体外验证CCND1在AKI中的作用。用肌酐检测试剂盒、尿素氮检测试剂盒检测肾脏功能,通过免疫组化、免疫荧光、实时荧光定量PCR、Western blot等方法检测肾小管上皮细胞糖酵解、肾脏损伤等指标。结果在肾缺血再灌注诱导的AKI模型中,肾小管上皮细胞CCND1表达下调,细胞及组织出现损伤。在体内使用CCND1过表达质粒过表达CCND1,IRI小鼠的肾脏功能较前明显改善,肾脏损伤较前减轻,过表达CCND1可促进糖酵解,促进丙酮酸的生成,使能量生成增加。在肾小管上皮细胞中,过表达CCND1后可促进糖酵解,能量生成增加,减轻AKI;相反,敲低CCND1会抑制糖酵解,细胞能量生成严重受阻,损伤进一步加重。结论在AKI中,肾小管上皮细胞中CCND1表达下调,过表达CCND1可以减轻肾缺血再灌注诱导的AKI,这可能与过表达CCND1可促进糖酵解、及时恢复细胞和组织的能量供给等机制相关。

组蛋白去乙酰化酶3——预防器官缺血/再灌注损伤的关键靶点

组蛋白去乙酰化酶3(histone deacetylase 3,HDAC3)在染色质重塑过程中发挥重要的作用,而染色质重塑反过来调节基因转录,因此,HDAC3通过表观遗传调控作用参与多种疾病的病理生理过程。器官缺血/再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury,IRI)是导致多种疾病,如迟发性神经元坏死、不可逆性休克、心肌梗死、急性器官功能衰竭及器官移植排斥反应等疾病发生发展的病理生理学过程。该文就HDAC3的病理生理学功能及其在人体实质器官IRI发生发展中的作用进行综述,同时也探讨了HDAC3在IRI中的治疗价值。

降香水提物和挥发油对心肌缺血/再灌注损伤大鼠预防作用的代谢组学研究

目的研究心肌缺血/再灌注(MI/R)损伤大鼠经降香水提物(DOA)和降香挥发油(DOO)治疗后血清代谢物的变化,探讨MI/R损伤发病及药物作用机制。方法采集假手术组、MI/R模型组、DOA给药组和DOO给药组大鼠的血清样本,应用气相飞行时间质谱联用系统(GC-TOF-MS)对样本进行代谢图谱分析,将数据预处理后导入SIMCA 14.1软件进行多元统计学分析。结果经主成分分析(PCA)、偏最小二乘法分析(PLS-DA)及正交偏最小二乘法分析(OPLSDA),模型组与假手术组明显分离,给药组与模型组分离,并向假手术组靠近,在代谢组学的角度证明了DOA和DOO对MI/R损伤大鼠的治疗作用,实验共分析鉴别出13个内源性生物标记物,分别与糖代谢、脂代谢和氨基酸代谢通路相关。结论 DOA和DOO可以对MI/R损伤大鼠起到很好的保护作用,推测其可能是通过调节糖代谢、脂代谢和氨基酸代谢通路而发挥作用。

肠道微生物群及其代谢物在肠缺血再灌注损伤中的研究进展

肠缺血再灌注(IIR)损伤是一类病死率较高的危重病症,目前临床尚缺乏预防和治疗IIR损伤的有效措施。肠道微生物群及其代谢物在IIR损伤的发生、发展、诊断和治疗过程中起关键作用。不同肠道细菌的丰度、组成及其主要代谢物(短链脂肪酸、次级胆汁酸和色氨酸代谢物等)水平变化可从不同角度阐述IIR损伤的致病机制,改变肠道微生物及其代谢产物水平可影响IIR的肠道损伤。因此,深入研究肠道微生物群及其代谢物在IIR中的作用机制,可以为IIR损伤的诊断、预防和治疗提供关键靶点。

Drp1介导线粒体能量代谢拮抗大鼠缺血再灌注肾损伤

目的探讨线粒体动力相关蛋白1(Drp1)介导线粒体能量代谢参与缺血再灌注肾损伤的分子机制。方法实验时间2020年10月14日。8~10周龄雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、假手术组、模型组和Drp1抑制剂组,每组5只,每只体质量为0.25~0.30 kg。通过手术建立大鼠肾脏缺血再灌注急性肾损伤模型,Drp1抑制剂组大鼠腹腔注射线粒体分裂抑制剂(mitochondrial division inhibitor 1,Mdivi-1)20 mg/kg体质量,其余各组大鼠注射等体积生理盐水,造模24 h留取血清及肾脏组织。比较组间大鼠血肌酐水平、肾组织病理学改变、肾组织细胞凋亡情况、线粒体超微结构、线粒体ATP酶活力,并建立体外HK-2细胞缺氧复氧模型,经处理后JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位变化。采用方差分析。结果与假手术组比较,模型组大鼠血肌酐明显升高[(41.12±1.895)μmol/L比(48.68±2.065)μmol/L],肾小管损伤评分升高[(1.29±0.426)分比(6.50±0.577)分],每高倍镜视野下大鼠肾组织细胞凋亡数量增加[(2.40±0.547)个比(10.20±1.095)个],电镜下线粒体损伤更明显,线粒体ATP酶活力降低[(6.38±0.321)U/mg prot比(4.18±0.198)U/mg prot],HK-2细胞缺氧复氧模型中,模型组较假手术组线粒体膜电位降低的细胞比例增多[(9.81±0.251)%比(4.24±0.598)%],差异均有统计学意义(均P<0.05)。与模型组相比,Drp1抑制剂组大鼠血肌酐下降[(48.68±2.065)μmol/L比(43.28±0.895)μmol/L],肾小管损伤评分降低[(6.50±0.577)分比(4.50±0.578)分],每高倍镜视野下大鼠肾组织细胞凋亡数量减少[(10.20±1.095)个比(6.60±1.140)个],线粒体结构损伤减轻,细胞线粒体ATP酶活力增加[(4.18±0.198)U/mg prot比(5.16±0.628)U/mg prot],HK-2细胞缺氧复氧模型中,Drp1抑制剂组较模型组线粒体膜电位降低的细胞比例减少[(5.90±0.360)%比(9.81±0.251)%],差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论选择性抑制Drp1可通过抑制线粒体分裂,有效改善能量代谢障碍,减少细胞凋亡,减轻肾缺血再灌注损伤。

益气活血药方对心肌缺血再灌注损伤模型大鼠氧化应激及线粒体能量代谢的影响

目的研究益气活血药方对心肌缺血再灌注损伤后模型大鼠氧化应激及线粒体能量代谢的影响。方法将50只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、益气活血药组、氯喹组、益气活血药+氯喹组,每组10只,除假手术组外,其余各组均采用左冠状动脉前降支结扎法构建心肌缺血再灌注损伤模型,假手术组于左冠状动脉前降支行穿线处理不进行结扎。益气活血药组于造模后次日按8.2 g/(kg·d)予益气活血药液灌胃;氯喹组在造模前30 min腹腔注射10 mg/kg氯喹,造模后次日予2 mL无菌蒸馏水灌胃;益气活血药+氯喹组在造模前30 min腹腔注射10 mg/kg氯喹,造模后次日按8.2 g/(kg·d)予益气活血药液灌胃;模型组和假手术组均于术后次日给予2 mL无菌蒸馏水灌胃,各组均连续灌胃4周。比较各组心功能指标左室舒张末期内径(LVEDd)、左室收缩末期内径(LVESd)、左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)水平变化情况,比较各组心肌组织氧化应激指标活性氧(ROS)、过氧化氢酶(CAT)、总抗氧化能力(T-AOC)水平变化情况,比较各组心肌细胞能量代谢指标三磷酸腺苷(ATP)、钠离子(Na^(+))-钾离子(K+)-ATP酶和钙离子(Ca^(2+))-ATP酶水平变化情况。结果与假手术组大鼠比较,模型组大鼠心功能指标LVEDd、LVESd均升高(P<0.05),LVFS、LVEF均降低(P<0.05);与模型组比较,益气活血药组及益气活血药+氯喹组大鼠心功能指标LVEDd、LVESd均降低(P<0.05),LVFS、LVEF均升高(P<0.05);与益气活血药组比较,氯喹组及益气活血药+氯喹组大鼠心功能指标LVEDd、LVESd水平均升高(P<0.05),LVFS、LVEF水平均降低(P<0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠心肌组织ROS水平升高(P<0.05),CAT、T-AOC水平均降低(P<0.05);与模型组比较,益气活血药组及益气活血药+氯喹组大鼠心肌组织ROS水平均降低(P<0.05),CAT、T-AOC水平均升高(P<0.05);与益气活血药组比较,氯喹组及益气活血药+氯喹组大鼠心肌组织ROS水平均升高(P<0.05),CAT、T-AOC水平均降低(P<0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠心肌细胞ATP、Na^(+)-K+-ATP酶、Ca^(2+)-ATP酶水平均降低(P<0.05);与模型组比较,益气活血药组及益气活血药+氯喹组大鼠心肌细胞ATP、Na^(+)-K+-ATP酶、Ca^(2+)-ATP酶水平均升高(P<0.05);与益气活血药组比较,氯喹组及益气活血药+氯喹组大鼠心肌细胞ATP、Na^(+)-K+-ATP酶、Ca^(2+)-ATP酶水平均降低(P<0.05)。结论益气活血药方对心肌缺血再灌注损伤具有保护作用,可明显促进心功能恢复,其作用机制可能与提高心肌抗氧化能力,改善线粒体功能和能量代谢有关。

心肌缺血再灌注损伤的代谢组学研究进展

心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia-reperfusion injury,MIRI)作为心肌梗死后血管重建不良后果的主要原因,严重影响患者的远期疗效,因其致病机制复杂,是临床治疗的难点。随着代谢组学的广泛应用和快速发展,越来越多的研究表明MIRI的发生可能与心肌能量代谢障碍有关,且涉及糖代谢、脂质代谢、氨基酸代谢等多种代谢途径。近年来,对MIRI能量代谢及中西医治疗有关的代谢组学研究已取得一定进展,现将其阐述如下,以期为MIRI临床治疗和研究提供新的思路。

活血荣络方对脑缺血再灌注损伤大鼠SIRT1/PGC-1α信号通路的影响

目的观察活血荣络方对脑缺血再灌注损伤(CIRI)大鼠SIRT1/PGC-1α信号通路的影响,初步探讨其对CIRI的保护机制。方法60只大鼠随机分为假手术组、模型组、活血荣络方组、EX-527组、EX-527+活血荣络方组和艾地苯醌组,采用线栓法建立CIRI大鼠模型。给药组于造模前36 h首次予相应药物灌胃(10 mL/kg),之后每24 h给药1次,共3次,EX-527组和活血荣络方+EX-527组于再灌注前20 min腹腔注射EX-527(5 mL/kg),其余各组在相同时间灌胃蒸馏水或腹腔注射生理盐水。再灌注24 h后对大鼠进行神经功能缺损评分,HE染色观察缺血皮质区损伤情况,试剂盒检测皮质区三磷酸腺苷(ATP)含量,免疫组化检测缺血皮质区沉默信息调节因子1(SIRT1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)蛋白表达,RT-qPCR检测缺血皮质区SIRT1、PGC-1αmRNA表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分升高,缺血皮质区神经元损伤严重,ATP含量减少,SIRT1、PGC-1α蛋白和mRNA表达降低(P<0.05)。与模型组比较,活血荣络方组和艾地苯醌组大鼠神经功能缺损评分降低,缺血皮质区神经元损伤改善,ATP含量增加,SIRT1、PGC1-α蛋白和mRNA表达升高(P<0.05);EX-527组大鼠神经功能缺损评分升高,缺血皮质区神经元损伤加重,ATP含量减少,SIRT1、PGC-1α蛋白和mRNA表达降低(P<0.05)。与活血荣络方组比较,活血荣络方+EX-527组大鼠神经功能缺损评分升高,缺血皮质区神经元坏死和凋亡增多,ATP含量减少,SIRT1、PGC-1α蛋白和mRNA表达降低(P<0.05)。结论活血荣络方可促进CIRI大鼠ATP生成,改善神经功能缺损症状,其机制可能与激活SIRT1/PGC-1α信号通路有关。

基于铁死亡探讨温阳复元方对脑缺血再灌注损伤大鼠神经损伤的保护机制

目的基于铁死亡探讨中药温阳复元方改善脑缺血再灌注损伤(Cerebral ischemia-reperfusion injury,CIRI)大鼠神经损伤的可能机制。方法SD大鼠72只,随机分为假手术组、模型组、温阳复元方组、铁死亡诱导剂组、温阳复元方+铁死亡诱导剂组、铁死亡抑制剂组,每组12只。假手术组手术步骤同模型组,但线栓只插入颈内动脉深度9 mm,不堵塞大脑中动脉,其余各组采用线栓法构建大脑中动脉闭塞/再灌注(middle cerebral artery occlusion/reperfusion,MCAO/R)模型。在造模前24 h开始,按照分组给予铁死亡诱导剂(100 mg·kg^(-1))、铁死亡抑制剂(5 mg·kg^(-1))腹腔注射;中药温阳复元方(18.0 g·kg^(-1))灌胃于麻醉清醒后2 h开始。各干预措施每天1次,连续7 d。分别于MCAO/R术后第1、3、7天采用Longa评分标准进行神经功能缺损评分。疗程结束后取材,采用苏木素-伊红染色法(HE)观察各组大鼠神经元形态学变化,透射电子显微镜观察各组大鼠神经元超微结构变化,生化试剂盒检测脑组织亚铁离子(Fe^(2+))和还原型谷胱甘肽(GSH)含量的变化,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)、Western Blot法检测转运铁蛋白受体1(TFR1)、铁调节蛋白1(IRP1)、膜铁转运蛋白(FPN)mRNA及蛋白的表达变化。结果(1)与假手术组比较,模型组大鼠在各时间点神经功能缺损评分均升高(P<0.01);HE染色显示神经元稀疏杂乱、细胞核固缩、边缘出现空泡,电镜下可见神经元线粒体数目减少、线粒体膜密度增加或破裂溶解、线粒体嵴消失;Fe2+含量与TFR1 mRNA及蛋白表达量升高(P<0.01),GSH含量与IRP1、FPN mRNA及蛋白表达量明显下降(P<0.05,P<0.01)。(2)与模型组比较,温阳复元方组大鼠在各时间点神经功能缺损评分降低(P<0.05);神经元数目增多且排列相对整齐、细胞核形态完整清晰,神经元线粒体结构相对完整、线粒体膜相对完整、线粒体嵴清晰;Fe^(2+)含量与TFR1 mRNA及蛋白表达量下降(P<0.05,P<0.01)、GSH含量与IRP1及FPN mRNA、蛋白表达量升高(P<0.05,P<0.01)。(3)与温阳复元方组比较,铁死亡诱导剂组及温阳复元方+铁死亡诱导剂组大鼠在各时间点神经功能缺损评分均升高(P<0.05);神经元分布杂乱,细胞核缩小,边缘出现空泡,线粒体膜密度增加可见部分破裂溶解、线粒体数目减少、线粒体嵴消失;Fe^(2+)含量与TFR1 mRNA及蛋白表达量升高(P<0.05,P<0.01)、GSH含量及IRP1、FPN mRNA及蛋白表达量减少(P<0.05,P<0.01);而铁死亡抑制剂组与温阳复元方组比较,各观察指标差异均无统计学意义(P>0.05)。结论温阳复元方可改善脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能及病理损伤,其机制可能与调节IRP1蛋白表达,改善脑铁代谢途径抑制铁死亡有关。

硝普钠结合控制性再灌注预防肺缺血再灌注损伤的实验研究

目的 探讨硝普钠结合控制性再灌注在预防肺缺血再灌注损伤中的作用及其机制。方法 将 1 4只猪随机分为对照组 (Ⅰ组 )和实验组 (Ⅱ组 )。对照组在去除肺动脉阻断 ,恢复自体血流前 ,给予控制性再灌注处理 (灌注液 :去白细胞∶改良Buckberg液 =4∶1 ,灌注压 1 8mmHg ,灌注时间 1 0min ,温度 37℃± 1℃ )。实验组在去除肺动脉阻断 ,恢复自体血流前 ,给予控制性再灌注 ,后经肺动脉以每分钟 1 .0 μg kg注入硝普钠 1 0min ,余处置同对照组。 0 .5 ,1和 2h后测血氧分压、肺血管阻力、肺顺应性及肺氧合功能变化 ,实验结束后 ,取肺组织测NO含量、MDA含量及肺含水量。结果 实验组的左肺氧合功能和肺顺应性明显好于对照组 (P <0 .0 5 )。肺循环阻力、丙二醛 (MDA)值及肺含水量均低于对照组 (P <0 .0 1 )。实验组肺中NO含量较对照组明显升高 (P <0 .0 1 )。结论 硝普钠结合控制性再灌注能明显降低肺缺血再灌注损伤 。

参附注射液对家兔急性肾缺血再灌注损伤的预防作用及机理研究

目的 :观察参附注射液 (SF)对急性肾缺血 -再灌注损伤 (I-R)的预防作用及探讨其机理。方法 :采用左肾切除右肾动静脉夹闭 1h再灌注 3h致肾损伤的模型 ,术前连续 4d给予SF 2mL/kg,0 9%NaCl 2mL/kg (iv)。检测SF对肾I-R后血清和肾组织中超氧化物歧化酶 (SOD)、脂质过氧化产物丙二醛 (MDA) ,肾组织中NO、Na+ 、水平、WBC滞留数 ,肾小管计分及肾组织的超微结构的影响。结果 :SF明显降低肾I -R血和肾组织中MDA含量及肾组织中WBC滞留数、肾小管计分和Na+ 浓度 ;明显升高血和肾组织中SOD活性及肾组织中NO含量 ;减轻肾组织学损伤。但SF对肾组织Ca2 + 作用不明显。结论 :SF可能通过激活和保护内源性氧自由基清除剂SOD活性 ,直接灭活氧自由基 ,增加NO含量 ,抑制WBC粘附 ,抑制Na+ 内流等机理 ,发挥其预防急性I-R肾损伤的作用。

左旋卡尼汀对大鼠心脏缺血-再灌注损伤能量代谢的影响

目的:观察左旋卡尼汀对离体大鼠心脏缺血-再灌注损伤的作用及对心肌细胞能量代谢的影响。方法:将制备成功的Langendorff离体心脏模型随机分成3组(各8只)。正常对照组(CON组):K-H液灌注65min;左旋卡尼汀组(L-CAR组):离体心脏用K-H液平衡15min后,K-H液中加入5mmol/L左旋卡尼汀继续灌注20min,然后全心停灌20min,再用相同的液体复灌30min;心肌缺血-再灌注组(MIRI组):整个实验过程同L-CAR组,但灌注液中不含左旋卡尼汀。比色法测定冠脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)含量,高效液相色谱法测定再灌注末心肌组织中腺苷酸的含量。结果:缺血前各组LDH活性差异无统计学意义(P>0.05),再灌注末L-CAR组LDH含量明显低于MIRI组(P<0.01),而心肌组织ATP、ADP、总腺苷酸水平及能荷则高于该组(P<0.05,P<0.01)。结论:左旋卡尼汀对缺血-再灌注心肌有保护作用,其保护机制与改善心肌能量代谢有关。