茄子再生体系的优化

为了建立茄子(Solanum melongena L.)高效再生体系,本试验选用11种不同类型茄子为试验材料,重点研究了基因型、外植体类型和激素种类与浓度配比对茄子再生效率的影响,优化了茄子的再生体系。结果表明:在11种不同基因型的茄子中,07-1043的再生能力最强,其次为16-562和14-345,其平均再生率分别为72.22%、48.33%、38.42%。我们对07-1043、16-562和14-345的子叶进行了形态和组织学分析发现,茄子再生能力的高低与子叶大小无明显相关性。ZRI(2 mg/L ZR+0.5 mg/L IAA)培养基对11种基因型茄子的再生苗诱导率最高。IAA浓度为0.1 mg/L时,对不定根的诱导效果最好。本研究优化了07-1043、16-562和14-345的离体再生体系,为茄子的基础理论研究和利用分子育种技术进行茄子种质创新助力。

以甘蓝下胚轴为外植体的再生体系优化

针对甘蓝组织培养过程中再生体系难度大,培养效率低的问题,本研究以白花芥蓝下胚轴为外植体,对离体培养关键影响因素——无菌苗光/暗培养时间、NaClO消毒时间、激素配比对甘蓝种子、不定芽分化及再生的影响进行了比较分析。结果表明, 75%无水乙醇40 s+5%NaClO 15 min消毒后,将种子暗培养3 d,再光培养3 d,无菌苗生长最好;预培养时培养基最佳激素组合是0.05 mg L^(–1) NAA (α-萘乙酸)+4 mg L^(–1) 6-BA (6-苄氨基嘌呤);筛选培养基的最佳激素组合为0.05 mg L^(–1) NAA+4 mg L^(–1) 6-BA+250 mg L^(–1) Cb (羧苄青霉素),愈伤发生率91.1%,不定芽分化率57.3%;生根培养基MS+30 g L^(–1)蔗糖+7 g L^(–1)琼脂+0.1 mg L^(–1) NAA+0.1%活性炭,不定根产生数量多,获得植株根系发达、生长势强。本研究建立的甘蓝组织培养优化体系能快速获得再生植株,有助于加速甘蓝良种的繁育与评价。

红线茄品种‘皖茄15’离体再生体系建立

目的:建立红线茄高效、稳定离体再生体系,为后期遗传转化、基因功能验证及离体诱变育种等提供材料和技术。方法:将红线茄品种‘皖茄15’无菌发芽的种苗的子叶、真叶、下胚轴和茎段4种外植体接入15种激素组合的MS培养基中,筛选合适外植体,继而研究真叶愈伤组织诱导、再分化、生根等环节的激素配比。结果:真叶为合适外植体,6-BA诱导外植体分化能力弱,IAA容易诱导根的形成,而NAA诱导愈伤组织效果较好;真叶愈伤组织诱导最优培养基为MS+0.1 mg/L TDZ+0.2 mg/L NAA,诱导率为100%,生长状态好;愈伤再分化最优培养基为MS+0.1 mg/L TDZ,芽分化率为100%,平均每块愈伤组织产生5.30个健壮芽;芽苗在不加激素MS培养基上生根率达100%,平均根数为4.60;再生植株经过驯化、移栽,成活率达90%以上。结论:本研究以真叶为外植体,经过愈伤组织诱导、再分化、生根、驯化、移栽等过程,建立了红线茄品种‘皖茄15’高效稳定的再生体系。

印度南瓜高效再生体系的优化

以10个基因型印度南瓜子叶节为外植体,研究了不同激素浓度配比、外植体处理方式、抑菌抗生素种类和浓度等对印度南瓜离体诱导再生的影响。结果表明:印度南瓜离体培养再生率受外源激素浓度配比和基因型的影响较大,较适宜的激素浓度配比为1.0~2.0mg·L^(-1)6-BA+0.5mg·L^(-1)ABA。外植体的切取时间、切割方式、接种方式等也是影响再生率的重要因素,播种后24~48h,切取1/2或1/4子叶节,采用斜插法接种的外植体再生率较高。外源添加100mg·L^(-1)头孢噻肟钠(Cef)能够有效抑制细菌污染。

满天星离体再生体系的建立

以满天星茎尖为试验材料,建立满天星茎尖离体再生体系。试验结果表明:将冲洗净的满天星茎尖放入75%的酒精中消毒5min,0.1%的升汞浸泡茎尖9min,再利用无菌蒸馏水冲洗7次,然后将嫩茎切成lcm左右的带芽茎段,腋芽切取0.8cm左右的茎尖,接种到适宜的不定芽诱导培养基上:MS+6-BA1.0mg/L+IAA0.1mg/L,适宜的生根培养基为MS+NAA0.01mg/L+PP3330.1mg/L,生根培养25天后,可从培养基移至消毒后的基质中进行炼苗,一个月后可移栽定植。

“晶瑶”草莓叶片再生体系的建立

以草莓"晶瑶"为试材,研究了暗培养时间、培养温度、激素配比、硝酸银浓度、不同植物凝胶等对不定芽再生的影响,建立了"晶瑶"草莓叶片的离体再生体系。结果表明:硝酸银对"晶瑶"草莓叶片再生有抑制作用;暗培养15 d、28℃的培养温度、以Phytagel为凝固剂有利于"晶瑶"草莓叶片再生;TDZ 1.5 mg/L+IBA 0.3 mg/L是较好的诱导培养基激素配比,此时不定芽的再生率达到76.77%,平均再生芽数达到4.3个。

草莓高频离体再生体系的研究

以6个草莓品种为试材,研究了影响草莓不定芽再生的各种因素,建立离体叶片高效再生系统。结果表明,外植体基因型、激素种类及配比、叶龄等是影响草莓再生的主要因子,其中‘鬼露甘’叶片最佳芽诱导培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA,‘嫜姬’叶片愈伤组织的诱导以MS+3 mg/L 6-BA+0.2 mg/L 2,4-D较好,而且1周左右的暗培养可以防止外植体的褐化。芽伸长的最适培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L IBA,生根的最适培养基为MS+0.2 mg/L IBA,试管苗移栽后成活率为87%。

青菜子叶离体再生体系的建立

以子叶为外植体 ,研究了苗龄、培养基中 Agar浓度、BA与 NAA的组配和添加 Ag NO3、GA3对子叶产生不定芽的影响 .结果表明 ,5～ 9d苗龄的外植体最易诱导出不定芽 ;培养基中 BA浓度是影响不定芽形成的关键 ,BA浓度低于 2 mg/ L,不定芽难以发生 ,BA6mg/ L与 NAA0 .0 5mg/ L的搭配有利于不定芽形成 ;在一定范围内不定芽发生频率随着 Agar浓度的提高而提高 ;培养基中添加 5mg/ LAg NO3,2～ 3mg/ L GA3可以提高不定芽的发生频率 ;在此基础上建立了青菜离体再生体系 ,利用该体系能够获得较高的芽苗再生频率 。

黄瓜子叶节离体再生体系的研究

以6个品系的欧洲温室型全雌系黄瓜子叶节为材料,比较了不同激素组合,苗龄,切割方式和基因型,从而建立了简单快速高效的黄瓜离体再生体系。结果表明:在MS+BA1.5mg·L-1+IAA0.2mg·L-1上启动培养3d为最佳芽启动培养方式,再转入最佳芽诱导培养基MS+TDZ0.02mg·L-1。10d苗龄的子叶节出芽率最高,保留两片子叶各切除1/3为最佳切割处理方式,六种基因型均能生芽,且每外植体出芽数均较高达1.93～3.15。整个过程从种子萌发到驯化移栽,仅需8周。

益智离体再生体系建立

为建立益智高效再生体系,以益智笋芽为外植体,研究无菌外植体的获得,及不同培养基组分对丛生芽增殖、生根苗试管姜培养效果的影响。结果表明:无菌外植体获取以饱和漂白粉溶液处理30min+0.1%升汞溶液处理15min最佳;最佳增殖培养基为MS+6-BA 1.0mg/L+TDZ 0.1mg/L,添加蔗糖45g/L,增殖倍数达6.85;最利于生根苗试管姜诱导的培养基为MS+NAA 1.5mg/L+IBA 0.5mg/L+甲派鎓1.0mg/L,添加蔗糖90g/L,生根率99.20%,试管姜发生率97.29%,移栽成活率95.93%。

香石竹叶片离体再生体系的建立

以香石竹(DianthuscaryophyllusLinn. )无菌苗叶片为外植体,从不同细胞分裂素及其他激素配合使用等方面进行筛选,建立香石竹叶片离体再生体系。结果表明,不同的细胞分裂素影响叶片不定芽分化频率,其中较低浓度的 6 BA(0. 5mg·L-1 )和TDZ(0. 001mg·L-1 )配合使用能有效诱导香石竹叶片不定芽分化;添加一定浓度的PP333 (4mg·L-1 )可提高叶片不定芽分化频率和平均芽数。香石竹叶片不定芽分化的适宜培养基为:MS+0. 002mg·L-1 TDZ+0. 5mg·L-1 6 BA+0. 2mg·L-1 IAA+4mg·L-1 PP333;壮苗培养基为:MS+0. 2mg·L-1 6 BA+0. 2mg·L-1 IAA;生根培养基为: 1 /2MS。不定芽诱导频率达到 42. 61%,平均芽数为 4. 53个。

草莓离体再生体系的研究

目前植物转基因技术已成为植物定向遗传改良的主要手段,而建立稳定高频离体再生体系是实现遗传转化的基础和前提。笔者以3个主栽草莓品种丰香、弗吉尼亚、全明星为试材,综合研究影响草莓不定芽再生的各种因素,建立离体叶片高效再生系统。试验结果表明,对某一特定的品种来说,外植体基因型和外源激素种类及其合适浓度是决定再生的主要因子。建立草莓高频再生体系,TDZ是首选激素;某种激素随其组合激素不同而发挥功效不同;自然光照条件下培养不易发生玻璃化苗,而且苗分化好;AgNO3对弗吉尼亚叶片再生起抑制作用,但用含7 5mg/LAgNO3的继代培养基扩繁组培苗,却产生了大量的匍匐茎。

草莓高效离体再生体系的研究

以丰香和章姬叶片为试材,研究影响不定芽再生的诸多因素,以建立简单、快速、高效的叶片离体再生体系,为草莓的遗传转化研究与应用奠定基础。结果表明,对某一特定的基因型来说,外植体类型和外源激素种类对其再生芽发生频率和数量都有明显的影响。丰香叶片在MS+TDZ2 0mg/L+2,4-D0 1mg/L+IBA0 2mg/L分化培养基上再生频率达83 2%,平均每叶片再生芽数为1 4个;章姬叶片在MS+TDZ4 0mg/L+NAA0 1mg/L+IBA0 2mg/L分化培养基上再生频率达65 7%,平均每叶片再生芽数为1 3个。10～30d叶龄的叶片再生能力较强。另外,8 0mg/LAgNO3能有效地控制外植体的褐化,促进芽的分化。

两个茄子品种高效再生体系的建立

【目的】建立茄子高效再生体系,为遗传转化、种质创新研究奠定基础.【方法】以‘兰杂一号’和‘兰杂二号’两个茄子品种为试材,通过对不同质量浓度外源激素组合的筛选,研究基因型、外植体类型、苗龄、外源生长调节剂组合对不定芽分化与伸长的影响.【结果】‘兰杂二号’的不定芽分化率显著高于‘兰杂一号’;子叶的不定芽分化能力强于下胚轴和茎段;11-13d苗龄的外植体不定芽分化频率较高;‘兰杂一号’和‘兰杂二号’分别在6-BA/IBA为10∶1和30∶1的配比下,分化率达最高,分别为89.58%、94.97%;在6-BA/IBA为1∶2配比下有利于两个品种不定芽伸长,伸长率分别高达91.67%、96.88%.【结论】适宜‘兰杂一号’和‘兰杂二号’不定芽分化的培养基分别为MS＋2.0mg/L 6-BA＋0.2mg/L IAA和MS＋3.0mg/L 6-BA＋0.1mg/L IAA;适宜不定芽伸长的培养基为MS＋0.1mg/L 6-BA＋0.2mg/L IAA;最佳生根培养基为1/2 MS培养基.

非洲菊花托离体再生体系的建立

以非洲菊花托为外植体,研究了6-BA、KT与IAA、NAA组配对不同基因型品种花托产生不定芽及继代增殖与生根的影响。结果表明,不定芽的诱导采用6-BA比采用KT效果好,10 mg/L 6-BA与0.5 mg/L IAA组配有利于不定芽形成;0.5mg/L 6-BA与0.02 mg/LNAA或1.0 mg/L KT与0.1 mg/L NAA的组配有利于不定芽的增殖;0.2 mg/L NAA或0.5 mg/L IAA的培养基都有利于试管苗生根。非洲菊在快繁过程中,应通过调整激素的种类和配比,控制增殖倍数,降低变异率,提高芽苗质量。

长寿花叶片再生体系的研究

以长寿花红色品种"Rako"为试材,研究建立叶片的离体再生体系。结果表明:激素配比影响叶片的再生能力;叶片背面接触培养基比正面接触培养基更有利于分化再生;用新生幼叶作外植体,再生频率为70%以上,瓶苗生根率为95%,移栽成活率为98%。

尤溪金柑离体再生体系优化及试管苗保存

以尤溪金柑试管苗为材料,采用双因素试验设计,筛选出适合尤溪金柑试管苗增殖和生根的培养基;采用L3(34)正交表设计,研究CaCl2、甘露醇和多效唑对尤溪金柑试管苗保存的影响.结果表明:芽增殖的最优培养基为:MS+1.2 mg·L-16-BA+0.05 mg·L-1NAA,增殖系数最高,达10.60;生根最优培养基为:MS+0.3 mg·L-1NAA+0.2 mg·L-1IBA,生根率最高达到了83.33%.保存12个月时处理C4(MS+0.44 g·L-1CaCl2+0 g·L-1甘露醇+1.0 mg·L-1多效唑)中尤溪金柑试管苗的存活率均为最高,达97.8%.

紫花苜蓿下胚轴高频离体再生体系的建立

【目的】以北极星、阿尔刚金、皇后2000及国产紫花苜蓿4个苜蓿品种下胚轴为外植体,建立其稳定、高效的离体培养再生体系,为基因转化改良苜蓿性状奠定基础。【方法】研究了种子预处理方法、培养基、基因型以及蔗糖质量浓度对苜蓿下胚轴分化特性的影响。【结果】低温4℃预处理有利于提高苜蓿下胚轴愈伤组织的出愈率和绿苗分化率;其最佳诱导激素组合为"MS+1.0 mg/L 2,4-D+2.0 mg/L 6-BA+5.5 g/L琼脂+30 g/L蔗糖"和"MS+2.0 mg/L 2,4-D+2.0 mg/L 6-BA+5.5 g/L琼脂+30 g/L蔗糖";愈伤组织分化的最佳培养基为"MS+0.3 mg/L6-BA+3.0 mg/L KT+0.1 mg/L NAA+5.5 g/L琼脂+50 g/L蔗糖";最佳蔗糖质量浓度为50 g/L;4个紫花苜蓿品种愈伤组织诱导率的差异不大,但分化特性有较大差异,分化率由高到低依次为北极星、阿尔刚金、皇后2000和国产紫花。【结论】不同的种子预处理方法对4种紫花苜蓿品种的分化率均有一定影响,3种处理中以4℃下浸泡2 h处理的分化率最高,与其他处理间的差异达显著水平(P<0.05)。不同激素组合是影响紫花苜蓿下胚轴愈伤组织诱导率和分化率的主要原因,不同激素组合处理间的差异均达到显著水平(P<0.05),2,4-D与6-BA配合对紫花苜蓿下胚轴愈伤组织的诱导效果较好,分化培养基中高质量浓度的NAA,不利于愈伤组织的分化;不同基因型对分化率有显著影响(P<0.05),而不同蔗糖质量浓度对分化率的影响不显著(P>0.05)。说明其对离体培养再生体系的影响作用与处理方法、培养基、基因型相比是次要的。

黄花蒿离体再生体系优化研究

为优化黄花蒿(Artemisia annua Linn)离体再生体系,并建立黄花蒿遗传转化途径,选用黄花蒿常规品种428-A为材料,以子叶、幼嫩叶片、顶芽作为外植体,设计不同植物生长调节剂组合的培养基配方。结果表明,黄花蒿子叶适宜作为组织培养的外植体,MS+1.5 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA培养基有利于诱导愈伤组织形成和分化,其出愈率及出芽率分别高达89.0%、85.7%,1/2MS+0.05 mg/L NAA+0.05mg/L IAA培养基有利于再生植株不定根的诱导,生根诱导率达94.0%。

千里香离体再生体系的建立

【目的】千里香自然播种的繁殖方式无法满足大面积生产种植需求,通过建立高效的离体再生体系为千里香组培种苗工厂化繁育奠定基础。【方法】以千里香成熟种子为外植体材料,研究不同激素浓度与配比和不同有机物对千里香种子萌发、增殖培养、壮苗培养和生根培养阶段的影响,获得无菌组培苗,进行炼苗移栽。【结果】千里香种子经75%酒精与0.1%升汞预处理后,最适萌发培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L,萌发率为62.5%;丛生芽继代增殖最适基本培养基为MS培养基;增殖培养最适培养基配方为MS+6-BA 0.50 mg/L+NAA 0.15 mg/L,增殖系数达2.37;壮苗培养适宜培养基配方为MS+马铃薯汁30 g/L,40 d株高增长2.0 cm;生根培养最适培养基配方为1/2MS+IBA 0.6 mg/L+马铃薯汁30 g/L+香蕉汁30 g/L+活性炭0.1 mg/L,生根率为55.6%。驯化后将生根苗移栽于泥炭土∶黄心土∶珍珠岩∶钙镁磷肥(3∶2∶1∶0.2)的混合基质中,成活率85%。【结论】不同激素及浓度对千里香种子萌发和丛芽增殖过程影响显著,添加马铃薯汁和香蕉汁利于壮苗和生根培养。