半夏愈伤组织诱导和分化再生植株的研究

研究半夏外植体愈伤组织诱导、放置方式、外植体的苗龄对分化再生植株的影响,结果表明:块茎的愈伤组织诱导效果最佳,叶片次之,叶柄最差。当MS+6-BA2mg/L+2,4-D2mg/L激素组配时,愈伤组织分化率达100%。外植体的放置方式对分化出苗有很大影响,块茎垂直放置出芽率最高,而叶柄和叶片平放于培养基效果较好。无菌苗苗龄对分化率有较大的影响,最适无菌苗苗龄为10～25d。当6-BA为3mg/L时芽增殖倍数达4倍左右,而当6-BA0.2mg/L+2,4-D0.2mg/L组配时,生根效果最好。

苜蓿不同品种愈伤组织诱导、分化和再生能力的比较研究

以新疆大叶、甘农1号、甘农3号和陇东4个苜蓿品种的下胚轴、子叶和子叶节为外植体,比较了不同苜蓿品种及外植体愈伤组织诱导、分化及再生能力的差异,研究了不同浓度及配比的植物生长调节物质对愈伤组织诱导和芽分化再生的影响。结果表明,4个苜蓿品种再生能力依次为新疆大叶>甘农3号>甘农1号>陇东苜蓿,下胚轴外植体在愈伤诱导培养基(MS+2mg/L2,4-D+0.2mg/LZT)上出愈率分别为94%,83%,71%和58%,胚性愈伤组织在分化培养基(MS+0.2mg/LZT+50mg/L谷氨酰胺)上分化率分别为15.8%,9.2%,7.1%和4.5%;下胚轴再生能力优于子叶节和子叶;丛生芽在生根培养基(1/2MS)上生成完整的根;各品种的再生苜蓿植株均成功移栽到土壤中,成活率100%。上述4个苜蓿品种分化再生能力的阶段性研究结果为今后通过基因工程方法改良苜蓿奠定了基础。

旱柳体外培养与直接分化再生系统的建立

给出了旱柳体外培养的方法：9月份至12月份采集1～2a生枝条上带腋芽的茎段，经过筛选确定MS＋0．5mg／L6-BA＋0．1mg／LNAA为最佳诱导培养基，平均每个芽点产生的不定芽数量为3．5个，20d后苗高为1．8cm；不定芽在MS＋0．1mg／L6-BA＋0．2mg／LNAA培养基中继代增殖及生长较好，为适宜的增殖培养基；在形成的不定芽中有些不定芽起源于单株苗的切口基部，因此，初步建立了旱柳的直接分化再生系统，可为旱柳的遗传转化等研究奠定基础．经过壮苗处理的幼苗在MS＋0．2mg／LNAA培养基上的生根率达100％，且生根量多，幼苗生长健壮．生根苗移栽至V（草炭土）：V（河沙）为3：1的混合基质中，60d后成活率为90％左右．

亚麻直接分化再生系统的初步建立

在亚麻愈伤分化再生系统基础上对诱导培养基和生根培养基加以改良。创立了一套新的亚麻再生系统———直接分化再生系统。该系统使外植体不经过愈伤组织阶段直接获得分化芽,且在个别品种上绿苗诱导率最高达242.11%,移栽成活率达60%以上,这为纤维亚麻遗传转化提供了良好的受体系统。

Shh信号参与神经退行性疾病神经元分化与再生的研究进展

神经元进行性丢失和退化,以及神经前体细胞产生新神经元不足是多种神经退行性疾病的共同病理特征。Sonic hedgehog(Shh)信号可调控神经干细胞增殖分化,促进神经前体细胞分化、神经元再生,引导神经元自我修复。该文通过综述Shh信号在阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)、帕金森病(Parkinson’s disease, PD)、亨廷顿病(Huntington’s disease, HD)中参与神经元分化与再生的作用机制,探讨有效激活Shh信号促进神经元分化与再生的可能途径,提出防治神经退行性疾病的新思路。

褪黑素治疗创伤性脑损伤的研究进展

创伤性脑损伤(traumatic brain injury, TBI)是由外力引起的大脑结构和生理功能破坏的损伤性疾病,包括原发性和继发性脑损伤。原发性脑损伤现阶段无法通过临床治疗手段干预其发生、发展和预后。现有证据表明,继发性脑损伤的致病机制包括氧化应激、炎症反应、神经兴奋性毒性、钙离子超载、细胞凋亡和线粒体自噬等一系列应激调控反应。褪黑素有抗炎、抗氧化、抗凋亡以及提高自噬水平的治疗作用,具有透过血脑屏障和细胞膜的能力。本文对褪黑素在TBI中的保护作用机制做一综述。

不同小麦品种愈伤组织诱导和再生体系建立

为了筛选适合组织培养的小麦基因型,建立一套有效的小麦诱导再生体系,以24个小麦品种的幼胚为研究材料,选用4种诱导培养基和3种分化培养基,研究了影响小麦组织培养的各种因素。结果表明:1培养基之间存在显著差异,MM2培养基的诱导效果最好,平均诱导率为98.5%;M5B培养基的分化效果最佳,平均分化率为39.8%。2不同品种在诱导愈伤和分化再生上都有显著的基因型差异。3愈伤组织诱导率和分化率之间无显著相关性。

NGF和PTEN双基因诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化效果观察

目的探讨神经生长因子(NGF)的过表达(NGFhigh)与10号染色体上的磷酸酶和张力蛋白同源物丢失(PTEN)的下调(PTENlow)相结合对大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)提升周围神经再生能力的影响。方法将绿色荧光蛋白(GFP)标记的OriCellTM SD大鼠MSC(MSC/GFP)分为两组,实验组通过NGF基因稳定转染和PTEN基因的小干扰RNA干扰瞬时沉默构建双基因修饰的NGFhigh/PTENlow大鼠MSC/GFP,对照组为未经基因修饰的大鼠MSC/GFP。采用细胞增殖/毒性检测试剂盒(CCK-8)和氧-葡萄糖剥夺实验检测两组细胞的增殖和凋亡情况;实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测两组细胞NGF、PTEN和巢蛋白-1(Nestin-1)mRNA和蛋白表达情况。结果CCK-8检测结果显示双基因修饰的NGFhigh/PTENlow大鼠MSC/GFP具有更强的增殖能力;氧-葡萄糖剥夺模型中NGFhigh/PTENlow大鼠MSC/GFP具有更强的生存能力;qRT-PCR和Western blot结果显示,双基因修饰上调了NGF、Nestin-1的表达和下调了PTEN的表达。结论双基因修饰的NGFhigh/PTENlow大鼠MSC/GFP具有更强分化为神经元样细胞的能力,因此,双基因定向诱导大鼠MSC分化有利于神经元再生,从而提升周围神经再生能力。

甜瓜子叶组织培养的研究

以厚皮甜瓜状元、伊丽沙白 ,薄皮甜瓜新玉、白玉种子的子叶为材料 ,设置 15种激素组合的诱导芽分化培养基 ,进行甜瓜子叶组织培养试验 ,结果表明 ,BA是甜瓜再生分化的关键物质 ,以BA浓度为 2 0mg/L时最有利于子叶外植体的再分化。在MS +BA2 0 和MS +BA2 0 +IAA0 2 两种培养基中 ,薄皮甜瓜的子叶组培再生能力高达 10 0 %。

优良大麦品种花30幼胚遗传转化体系的优化

以大麦花培基因型花30的幼胚为外植体,设置不同的培养基类型、不同激素配比及碳源,研究其对幼胚愈伤组织诱导及绿苗分化的影响,以此建立和优化一个适于优良大麦品种遗传转化的高效组织培养体系。结果表明:在N6、MS和B5的组合改良培养基下,以蔗糖为碳源,附加2mg/L 2,4-D、1mg/L ABA时,有最高的愈伤组织诱导率,且愈伤质量最好。Cu2+的添加具有抑制幼胚直接发芽成苗和改善愈伤组织质量的双重功效。添加2mg/L 6-BA对愈伤组织的分化效果比较理想。为了提高农杆菌介导转化大麦外源基因的瞬时表达率和优化遗传转化体系,利用花30幼胚产生的愈伤组织为受体材料,通过检测GUS基因的瞬时表达情况,研究了农杆菌介导的大麦遗传转化中菌液的浓度、侵染时间以及共培养天数对遗传转化的影响,结果表明:当菌液浓度OD600=0.5的条件下,侵染15min,共培养2d表现出最佳的GUS瞬时表达率。

奶浆菌共生体系建立的初步探索

本文采用自然生成法,对奶浆菌建立实验室共生体系进行探索,即接种菌种于实验室的青冈栎苗盘内(青冈栎的种植采用种子浸泡发芽种植,土壤采用野外奶浆菌生长地的原土),调节空气温湿度、土壤湿度、光照度(模仿野生奶浆菌的生长条件),促使菌种在青冈栎树苗特定营养素的激活下,菌种细胞分化再生出菇,探索实验室共生体系的建立。同时采用子实体风干粉碎激活法育种做对照试验,以期为奶浆菌种植方法的完善提供理论依据。

北细辛叶柄愈伤组织的增殖培养及器官分化研究

目的研究北细辛Asarum heterotropoides叶柄愈伤组织增殖培养、再生芽分化及不定根诱导的最适条件,建立高效的愈伤组织培养和再生体系。方法以北细辛幼嫩叶柄诱导出愈伤组织,于含不同质量浓度6-苄基腺嘌呤(6-BA)和萘乙酸(NAA)的增殖培养基中扩大培养,选取嫩绿致密的愈伤组织接种在不同激素浓度配比的分化培养基上诱导再生芽及不定根,经驯化后移栽。结果愈伤组织增殖较适培养基为1/2 MS+0.40 mg/L 6-BA+0.10 mg/L NAA,在含0.40 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA的1/2 MS培养基中再生芽分化率最高,无激素添加的1/2 MS培养基适于壮苗培养,不定根诱导最适培养基为1/4 MS+0.25 mg/L IBA。结论确定北细辛愈伤组织增殖及分化的最适培养基及激素水平,建立了完善的北细辛再生体系,成功获得再生植株。

簸箕柳组培再生体系的建立

【目的】建立簸箕柳组培再生体系,为在簸箕柳中开展功能基因组研究奠定基础。【方法】分别以簸箕柳带腋芽茎段和种子为外植体,比较不同消毒方法、基本培养基类型、光照条件及植物生长调节剂等因素对不同外植体脱分化和再分化能力的影响。【结果】簸箕柳组培基本培养基成分以MS+蔗糖(30 g/L)+Phytagel (植物凝胶)(4.4 g/L)为宜。以幼嫩茎段为外植体,最佳消毒方法为70%(体积分数)酒精处理30 s+20%(质量分数)的次氯酸钠处理10 min,适宜诱导腋芽的生长调节剂组合为6-BA(1 mg/L)+NAA (0.01 mg/L),丛生芽继代增殖的适宜生长调节剂配比为6-BA (0.5 mg/L)+NAA (0.05 mg/L),适宜腋芽生根的生长调节剂组合为IBA (0.2 mg/L)+NAA (0.03 mg/L)。以种子为外植体,最佳消毒方法为70%(体积分数)酒精处理10 s+20%(质量分数)的次氯酸钠处理2 min,光照条件下诱导愈伤组织的生长调节剂配比为6-BA (0.5 mg/L)+NAA (0.3 mg/L),并利用6-BA (0.5 mg/L)+NAA (0.5 mg/L)和6-BA (0.5 mg/L)+NAA (0.8 mg/L)两种组合方式交替使用进行愈伤组织的继代培养;愈伤组织分化成芽的生长调节剂配比为6-BA (0.5 mg/L)+TDZ (0.2 mg/L),生根培养基只需添加NAA (0.01 mg/L)。【结论】以茎段和种子作为外植体,通过不同的再生途径,均可以建立簸箕柳组织培养再生体系。