再生基因4蛋白、特异性蛋白1在卵巢癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨再生基因4(REG4)蛋白、特异性蛋白1(SP1)在卵巢癌组织中的表达及临床意义。方法:选取2019年7月~2022年7月期间收治的卵巢癌(OC)患者60例,术后提取卵巢癌变组织和癌旁组织。采用免疫组织化学染色法检测REG4和SP1蛋白的表达情况,对比卵巢癌变组织和癌旁组织中REG4蛋白和SP1蛋白阳性情况,分析REG4蛋白和SP1蛋白在卵巢癌组织中表达与临床病理参数的相关性。结果:卵巢癌变组织REG4蛋白、SP1蛋白的阳性表达率为86.67%、71.67%高于癌旁正常组织的31.67%、16.67%(P<0.05)。不同年龄的OC患者的REG4和SP1阳性表达率无明显差异(P>0.05);病理分类中REG4阳性表达率从高到低依次为浆液性腺癌、子宫内膜样腺癌、粘液性腺癌、透明细胞癌(P<0.05),SP1阳性表达率从高到低依次为浆液性腺癌、粘液性腺癌、子宫内膜样腺癌、透明细胞癌(P<0.05);FIGOⅢ-Ⅳ期患者REG4和SP1阳性表达率高于FIGOⅠ-Ⅱ期患者阳性表达率(P<0.05);分化程度中REG4和SP1阳性表达率从高到低依次为低分化、中分化、高分化(P<0.05);淋巴转移患者REG4和SP1阳性表达率高于未淋巴转移患者阳性表达率(P<0.05)。结论:OC肿瘤组织中的REG4蛋白、SP1蛋白的阳性表达率均高于正常卵巢组织,并与病理分类、FIGO分期、分化程度、淋巴转移密切相关,对于OC的临床诊断及预后改善具有重要意义。

再生基因4(REG4)真核表达载体的构建及其蛋白在HEK293T细胞中的表达、纯化

目的构建再生基因4(regenerating gene 4,REG4)的真核表达载体,转染人胚肾细胞293T(human embryonic kidney 293T cells,HEK 293T),获得重组人再生胰岛衍生蛋白IV(regenerating islet-derived protein IV,Reg IV)。方法根据NCBI数据库REG4基因序列进行基因优化、合成,将其克隆至pCDNA3.4载体并进行双酶切和测序鉴定,通过转染试剂聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)将pCDNA3.4-REG4质粒瞬时转染至HEK 293T细胞(实验组),同时以pEGFP-C1质粒作为转染对照组,未转染重组质粒的HEK 293T细胞作为空白对照组。荧光显微镜观察转染对照组转染效率,分别收集实验组及空白对照组细胞和细胞培养液上清,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)与免疫印迹试验(Western-Blot,WB)检测Reg IV蛋白表达水平。通过镍柱及丙烯葡聚糖凝胶S-400(Sephacryl S-400)柱进行蛋白纯化,SDS-PAGE及WB对纯化后重组蛋白进行鉴定。结果经测序和双酶切鉴定,重组质粒pCDNA3.4-REG4构建成功。转染对照组(pEGFP-C1质粒)荧光显微镜观察结果显示转染效率约50%,表明转染成功。WB结果显示仅在实验组(pCDNA3.4-REG4质粒)的细胞中检测到RegIV蛋白。镍柱纯化时目的蛋白无法与镍柱填料有效结合,SephacrylS-400凝胶柱层析纯化获得了此重组蛋白。结论成功构建了REG4基因真核表达载体并在HEK 293T细胞中成功表达,为深入研究Reg IV蛋白的作用机理及开发潜在的抗癌靶向药物奠定了基础。

再生基因4(RegⅣ)的原核表达、蛋白结构复性及纯化

目的:构建再生基因4(Reg Ⅳ)的原核表达载体,获得重组人Reg Ⅳ蛋白。方法:将已构建好的pEGFP-C1-Reg Ⅳ质粒进行酶切纯化获得目的基因,并构建到pET-30a原核表达载体上,经测序鉴定后将序列正确的重组质粒转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE凝胶电泳鉴定,并用凝胶层析对表达产物进行复性纯化。结果:构建了pET-30a-Reg Ⅳ原核表达重组质粒,IPTG诱导表达出约22KD的重组蛋白,表达产物经复性纯化后获得纯度较高的目的蛋白。结论:成功构建了Reg Ⅳ原核表达载体,并成功表达了重组人Reg Ⅳ蛋白。

巨噬细胞抑制因子1、再生基因4、糖类抗原19-9对胰腺癌的诊断价值比较

目的通过与糖类抗原19-9(CA19-9)比较,探讨巨噬细胞抑制因子1(MIC-1)、再生基因4(REG-4)对胰腺癌的诊断价值。方法选择2013年7月至2015年7月南华大学附属第二医院收治的疑似胰腺癌患者70例。采用电化学发光仪检测标本中的CA19-9含量、酶联免疫吸附测定法分别测定MIC-1和REG-4含量,比较三者检测诊断胰腺癌的灵敏度、特异度、准确度、阳性预测值及阴性预测值。结果以病理检测为金标准,实际胰腺癌患者35例,胰腺良性肿瘤患者35例,CA19-9灵敏度为68.6%、特异度为54.3%、准确度为61.4%,阳性预测值为60.0%,阴性预测值为78.9%,MIC-1灵敏度为88.6%、特异度为77.1%、准确度为77.3%,阳性预测值为79.5%,阴性预测值为87.1%,REG-4灵敏度为91.4%、特异度为75.0%、准确度为80.0%,阳性预测值为78.0%,阴性预测值为90.0%。MIC-1、REG-4准确度均大于CA19-9。结论 MIC-1及REG-4胰腺癌患者诊断效力高于CA19-9。

再生基因蛋白4对早期胃癌辅助诊断价值的临床研究

胃癌是消化系统常见的恶性肿瘤[1-2]。胃镜下直视取检是诊断胃癌的可靠方法,但这属于有创检测,无明显症状的患者往往依从性较低[3]。再生基因蛋白4（Reg4）与胃癌的发生发展相关,且作为外分泌蛋白可在外周血中检测到[4]。本研究分析Reg4对早期胃癌的诊断价值,现报告如下。1资料与方法1.1一般资料选取2013年1月—2015年1月在本院接受诊疗的55例早期胃癌患者为观察组。

血清REG4、CA199水平与胃癌患者化疗预后的相关性

目的:观察胃癌患者化疗预后与血清再生基因4(Human regenerating geneⅣ,REG4)、糖类抗原199(Carbohydrate antigen199,CA199)水平的关系.方法:选取2018年6月至2019年9月医院收治98例胃癌患者作为研究对象,患者完成3个周期化疗且至少观察1个月后,分析血清REG4、CA199水平与胃癌患者化疗预后的关系.结果:预后不良组化疗前血清REG4、CA199水平高于预后良好组(P<0.05),胃癌患者化疗前血清REG4、CA199、癌胚抗原(Carcinoembryonic antigen,CEA)异常表达与化疗预后有关,是胃癌患者化疗预后不良的风险因子;化疗前血清REG4、CA199水平联合预测胃癌患者化疗预后不良风险的价值较高.结论:胃癌患者化疗前血清REG4、CA199水平异常高表达可能提示化疗预后不良高风险.

慢病毒shRNA靶向干扰RegⅣ基因胰腺癌细胞株的构建

目的构建并鉴定再生基因4(regenerating islet-derived family member 4,RegⅣ)短发夹干扰RNA(short hairpin RNA,shRNA)慢病毒载体,继而建立稳定干扰RegⅣ基因表达的胰腺癌细胞株PANC-1。方法使用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测RegⅣ基因在胰腺癌细胞株中的表达情况。构建重组靶向干扰RegⅣ基因的shRNA慢病毒表达质粒pGC-shRNA-RegⅣ,用脂质体转染的方法将载体导入胰腺癌细胞,建立稳定表达shRNA的细胞株。使用荧光定量PCR检测干扰效率。RegⅣ基因过表达载体的构建方法为:将获取的目的基因与pEGFP-RegⅣ-3FLAG过表达质粒载体分别进行双酶切,利用电泳回收双酶切产物,转化感受态细胞并进行测序验证,验证成功后,使用Western blot检测其在293T细胞中的表达强度。结果 PCR结果显示RegⅣ在PANC-1中表达最高,在BxPC-3中表达最低。测序验证pGC-shRNA-RegⅣ重组质粒构建成功。将重组质粒稳定转染入胰腺癌细胞株PANC-1后能明显抑制RegⅣmRNA表达水平。过表达载体pEGFP-N1-3FLAG-RegⅣ合成成功后进行Western blot鉴定,验证pEGFP-N1-3FLAG-RegⅣ过表达载体构建成功。过表达RegⅣ基因转染BxPC-3后,与空质粒组相比,RegⅣ表达量明显提高。结论成功建立了靶向稳定干扰RegⅣ基因表达的shRNA胰腺癌细胞株PANC-1。

RegⅣ在胃癌及胃非癌组织中的表达及意义

目的检测再生基因4(RegⅣ)在各种胃癌及胃非癌组织中的表达情况,并探讨其可能临床意义。方法运用免疫组织化学方法检测73例胃癌手术切除标本和90例胃癌及癌旁非癌组织芯片标本中RegⅣ蛋白的表达情况。结果 RegⅣ在胃黏膜肠化生杯状细胞呈强阳性染色。肠型胃癌、胃印戒细胞癌、粘液腺癌的癌细胞中呈频繁免疫反应性[分别为100.0%(3/3)、93.3%(14/15)和90.9%(10/11)]。RegⅣ的表达与胃癌的组织分型相关(P<0.05),与胃癌的侵袭参数(主要包括肿瘤浸润深度、是否转移及TNM分期等)无明显相关性(P>0.05)。RegⅣ在胃印戒细胞癌和粘液腺癌中的表达阳性率分别为40.0%(12/30)和43.3%(13/30)。结论 RegⅣ在胃黏膜肠化生杯状细胞、胃印戒细胞癌及粘液腺癌中显示频繁的免疫反应性,提示RegⅣ可能参与胃腺癌的"肠"途径发生机制。

RegⅣ与消化系肿瘤研究进展

再生基因4(regenerating islet-derived family,member 4,RegⅣ)是再生基因家族的新成员,定位于1p12-13.1,编码为17kDa的分泌性蛋白.RegⅣ选择性表达于正常胰腺和胃肠道上皮,炎症或肿瘤时可见原位或异位高表达.RegⅣ与消化系肿瘤的发生、发展、转移、抗药性及预后密切相关,其可能成为预防、诊断和治疗整个消化系肿瘤的新的重要靶分子.

胰岛β细胞参与急性胰腺炎后胰腺再生过程的研究

目的探讨胰岛β细胞在实验性急性胰腺炎（AP）后胰腺再生过程中的作用。方法SD大鼠87只，按数字表法随机分为对照组（15只）、糖尿病组（24只）、AP组（24只）和糖尿病＋AP组（24只）。采用腹腔注射链脲佐菌素（STZ，60mg／kg体重）或左旋精氨酸（L．Arg，2．5g／kg体重，2次）方法分别建立糖尿病和AP模型。术后1、3、5、7d分批处死大鼠。检测血淀粉酶和血糖水平；计算胰腺湿重比；胰腺组织常规病理学检查，计算胰腺坏死面积百分比和组织转化区域百分比；免疫荧光检测胰岛β细胞的再生基因（Reg4）和胰岛素的表达。结果注射STZ后，大鼠血糖明显升高，注射L—Arg后大鼠胰腺组织水肿、坏死、炎细胞浸润，血淀粉酶明显升高，表明制模成功。制模后第3天糖尿病＋AP组的胰腺坏死面积为（71．6±6．0）％，显著大于AP组的（42．3±4．0）％；第7天的组织转化面积为（45．6±5．4）％，显著小于AP组的（78．5±6．4）％。糖尿病＋AP组胰岛B细胞的Reg4和胰岛素表达均较AP组明显减少。结论STZ破坏了胰岛β细胞，加重精氨酸诱导的AP的损伤，并抑制胰腺的再生过程。

消化道肿瘤诊治的新靶点——REGⅣ

再生基因4(regenerating geneⅣ,RegⅣ或REGⅣ)是再生基因家族的一名新成员,其主要生物学功能包括促进组织再生、增殖,抗凋亡等。研究发现RegⅣ在消化道肿瘤特异性高表达,可能是消化道肿瘤早期诊断和疗效评估的一个新的生物标志物。