红王子锦带花药诱导再生植株的研究

以红王子锦带花药作为试材,采用离体培养技术,通过对红王子锦带花粉发育的细胞学观测与统计分析,对诱导红王子锦带花粉胚分裂基本培养基、诱导愈伤组织培养基及诱导再生植株培养基等的多种因素进行筛选,建立红王子锦带花药再生植株繁殖体系。结果表明:单核期花药愈伤组织诱导率较高;筛选出最优愈伤组织诱导培养基(MS+2,4-D 0.5 mg·L^(-1)+KT 2.0 mg·L^(-1)+蔗糖2%),愈伤组织芽分化诱导培养基(MS+ZT 0.2 mg·L^(-1)+BA 1.0 mg·L^(-1)),愈伤组织诱导再生植株诱导培养基(MS+BA 0.5 mg·L^(-1)+ZT 0.5 mg·L^(-1)+NAA 0.5 mg·L^(-1)+蔗糖2%),再生植株继代增殖培养基(WPM+BA 0.5 mg·L^(-1)+NAA 0.1 mg·L^(-1)+蔗糖2%)。通过花粉再生植株的诱导实验研究为锦带花育种及新品种选育奠定基础。

转基因棉花再生植株育性影响因素研究

【目的】探究影响农杆菌介导棉花体细胞转化体系产生的再生植株育性的影响因素。【方法】从载体大小、目的基因大小、不同阶段组织培养时间等因素对6个载体的转基因再生植株当代(T0)育性影响进行分析。【结果】不同载体/目的基因的转基因植株不育率呈现显著差异,但是转基因植株育性与载体大小、目的基因大小之间没有明显关系。进一步研究发现转基因再生植株不育率与胚性愈伤组织分化-植株再生的培养时间呈显著正相关,分化-植株再生培养时间少于110 d、110~130 d、130~150 d、150~170 d、超过170 d的植株不育率分别为19.6%、45.5%、63.8%、72.3%、94.5%;而与诱导愈伤组织形成-胚性愈伤组织分化的持续培养时间没有相关性。【结论】转基因棉花再生植株育性受到胚性愈伤组织持续培养时间的显著影响,缩短胚性愈伤组织到植株再生的培养时间能够提高转基因再生植株的育性。

桃离体组织分化再生植株的研究

以奉化‘玉露’桃叶片、幼茎、下胚轴、子房、胚珠、胚乳及花后 4 5～ 5 0d和75d的未成熟胚、完全成熟的种胚为外植体 ,进行离体培养再分化试验。结果表明只有花后4 5～ 5 0d和 75d的未成熟胚产生白色致密节球状的愈伤组织 ,并可诱导出不定芽 ,不定芽分化率分别为 73.8%和 15 .5 % ;6 BA诱导愈伤组织不定芽的效果优于KT。不定梢转移生根成苗获得了完整的再生植株。

从大豆幼胚诱导胚胎发生再生植株

采用MS基本培养基附加高浓度的生长素(2,4—D或NAA)成功地诱导了大豆(G.max)未成熟胚的体细胞胚胎发生。2,4—D的诱导效果明显优于NAA。细胞分裂素对体细胞胚胎发生有抑制作用。适宜的维生素B1浓度为0.4ppm。体细胞胚胎发生频率随蔗糖浓度(1.5—9％)的提高而降低。体细胞胚胎经历诱导、成熟和发芽三个阶段成功地发育成完整植株。再生植株移入土壤已经获得种子。

甘蓝型油菜带柄子叶高频率再生植株的研究

以甘蓝型油菜(Brassicanapus)912品系带柄子叶为外植体,不同浓度6-BA与NAA激素组合的分化培养基诱导芽苗的分化,开展提高甘蓝型油菜带柄子叶再生频率的因素研究。发现甘蓝型油菜912品系带柄子叶在不同激素及浓度的6-BA与NAA组合中的再生频率、分化率存在显著差异。通过无菌苗苗龄、诱导分化前2,4-D的预培养以及添加AgNO3等因素的系统分析,结果表明甘蓝型油菜912品系带柄子叶在诱导分化前经过1.0mg/L2,4-D的MS培养基中预培养3d,在最适培养基MS0+6-BA4.0mg/L+NAA0.02mg/L+3.5mg/LAgNO3中,可较大程度地提高植株再生频率,再生频率和分化频率分别为70%和269.5%,初步建立了甘蓝型油菜912品系的高频率再生植株体系。

西洋杜鹃花蕾离体培养再生植株与工厂化育苗

以西洋杜鹃带梗小花蕾为外植体,研究了离体培养再生植株与工厂化育苗技术,试验结果表明:在ER+ZT6mg·L-1+IAA1mg·L-1固体培养基中诱导不定芽,诱导率高达94%;增殖与壮苗用诱导培养基和ER+ZT1mg·L-1+IAA1mg·L-1固体培养基交替进行,每1代增殖16倍以上;幼苗采用光、暗交替培养提高生长率120%以上;无根苗移植在泥炭土中成活率达94%以上.

紫花苜蓿组织培养及其再生植株

以ＳＨ为基本培养基，分别添加ＮＡＡ０．５～３ｍｇ／ｌ；ＫＴ０．１～１．０ｍｇ／ｌ的激素，对紫花苜蓿无菌苗子叶和下胚轴进行离体培养，所产生的愈伤组织可在原诱导培养基上直接分化出芽，其中下胚轴愈伤组织的平均诱导频率，分化频率均高于子叶。

君迁子叶片培养再生植株的研究

【目的】建立君迁子叶片离体再生体系,为转基因操作奠定基础。【方法】以君迁子幼叶为外植体,研究适合其再生植株的叶片部位、放置方式、基础培养基、植物生长调节剂以及暗培养时间等条件。【结果】叶片基部上表面朝下接种于1/2MS+ZT5.0mg·L-1+IBA0.01mg·L-1的培养基,先期暗培养5周后转移至正常光照下培养效果最好,愈伤组织形成率、不定芽再生率和外植体平均不定芽数分别为100.0%、85.3%和2.8±0.6个。再生芽接种于不含植物生长调节剂的1/2MS培养基上,30d时生根率达100%,平均根数和平均根长分别达5.4条和3.7cm。再生植株炼苗后移栽,30d时成活率达98.5%。【结论】成功地建立了君迁子叶片的离体再生体系。

甜瓜组织培养再生植株中的四倍体变异

甜瓜未成熟子叶、幼苗子叶和真叶离体培养的再生植株中存在着明显的四倍体变异，比率分别为３０％、１６．２％和４２．９％。四倍体植株在花冠、气孔、花粉、种子和果实的形态和大小方面均与二倍体植株表现出明显的差异。再生植株叶片气孔大小和气孔保卫细胞内叶绿体数目可以作为从再生植株中早期鉴别四倍体植株的可靠指标。组织培养可以成为获得四倍体甜瓜的有效途径。

从大豆幼胚诱导器官发生再生植株

采用MSO培养基诱导了大豆(G.max L.)幼胚的器官(不定芽)发生,最高诱导频率达90％。再生植株移入土壤巳经获得种子。诱导器官发生的适宜幼胚长度为5～6mm。提高培养基中微量元素的浓度能大幅度地提高诱导频率,但并非所有微量元素都需要高浓度。被试的所有基因型表现了基本相似的反应。再生培养物可保持一年以上而不丧失植株再生能力。

水稻原生质体再生植株及后代的性状表现

获得了粳型水稻77-170品系原生质体再生植株(R_2)6个株系的206棵后代植株。对其中96株进行性状观察和细胞学染色体鉴定,发现再生植株子代在株高、剑叶和主穗长、单株有效穗数、每穗粒数、育性、生育期等性状上都产生了变异,除株高外其他性状在第2代遗传上不稳定,染色体倍性稳定(2_n=24)。对56株再生植株子代作酯酶、过氧化物酶同工酶测定,其酶谱谱带与对照实生株相似。

PEG胁迫下小麦再生植株根系特性与抗旱性的关系

为了解PEG胁迫下小麦再生植株根系特性与抗旱性的关系,以抗旱性强的小麦品种河农花84、晋麦33号和抗旱性差的小麦品种温麦6号、周麦17的花药和幼胚愈伤组织分化植株为材料,以PEG为水分胁迫剂,对不同小麦品种在水分胁迫下的根系特性进行了比较研究。结果表明,同一小麦品种在不同PEG浓度胁迫下,根长和根数存在显著差异;在相同PEG浓度胁迫下,抗旱品种与不抗旱品种根长和根数差异显著。PEG浓度值为80g/L时,抗旱品种根系表现出较强的生长势,不抗旱品种根系生长势很弱,甚至发根停滞,因此可在PEG浓度值为80g/L的处理下,通过观察再生植株根系的生长状况来判别供试品种抗旱性的强弱。

秋水仙素诱导樱桃矮化砧木‘吉塞拉6号’获得六倍体再生植株

以三倍体樱桃矮化砧木‘吉塞拉6号’(Prunusceransus×P.canescens)的离体叶片为外植体,采用秋水仙素诱导处理再生出六倍体植株。将外植体首先在加有秋水仙素(50mg·L-1)、生长素(IBA0·5mg·L-1)和细胞分裂素(BA5·0mg·L-1)的改良WPM液体培养基中培养5d,再转移到不含秋水仙素(其它成分相同)的固体培养基上继续培养56d,再生出形态变异明显的新梢。采用流式细胞仪鉴定染色体倍性,确定其为六倍体新梢。六倍体植株与三倍体的‘吉塞拉6号’植株形态学上有明显差异。六倍体的试管苗已在大田移栽成活,并已成功高接在甜樱桃大树上。

西葫芦胚囊再生植株倍性鉴定方法研究

利用根尖细胞染色体压片和叶片保卫细胞叶绿体压片方法对西葫芦胚囊再生植株进行了倍性鉴定,结果表明,单倍体、二倍体和四倍体植株叶片表皮保卫细胞叶绿体数的均值分别为(4.15±0.37),(8.05±0.76)和(16.05±0.69),其比例约为1:2:4,说明叶片保卫细胞叶绿体压片方法能有效用于倍性鉴定;单倍体、双单倍体和四倍体叶片表皮保卫细胞的长度分别为(20.31±3.38)μm、(30.80±2.19)μm和(41.78±1.03)μm,其比例约为1:1.5:2,在胚囊再生植株倍性鉴定时也可以参照。

不结球白菜游离小孢子培养及再生植株的倍性鉴定

对影响不结球白菜小孢子培养和植株再生的几个因素及再生植株的倍性进行分析。结果表明：基因型是影响小孢子胚诱导率的最重要因子，正反交材料的胚诱导率无显著差异；供体植株开花后6～10d培养可获得高的胚诱导率；琼脂在8～12g·L^-1范围内，随着质量浓度的提高可显著提高小孢子胚再生率。结合流式细胞仪和植株形态鉴定，不结球白菜小孢子再生植株自然加倍率总体水平较高，有的高达90％，但不同基因型间有明显差异。

小麦未熟胚离体培养的研究——再生植株后代籽粒醇溶蛋白和谷蛋白亚基及蛋白质含量变化

采用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳法和半微量凯氏定氮法,对在形态学特征和穗部产量构成因子已稳定的小麦胚培无性系IE_5代醇溶蛋白、谷蛋白亚基和蛋白质含量进行测定和分析的研究。结果表明,小麦籽粒胚乳醇溶蛋白和谷蛋白电泳谱带发生较大变化,出现三种变异类型:1)、增加新谱带;2)、亲本原有特异性谱带缺失;3)、亲本原有特异性谱带强度改变,高分子量和低分子量蛋白亚基发生变化。籽粒蛋白质含量出现范围较广(9.75％～16.20％)的变异,有7.69％的株系蛋白质含量明显超过对照,并与早熟大粒结合。表明胚培无性系变异的诱导和筛选,可以作为小麦品种品质改良的一种手段。

白花泡桐叶柄愈伤组织再生植株的诱导与培养

为提高白花泡桐繁殖效率,防止丛枝病的传播,保持优良种性,利用愈伤组织再生技术对其增殖.研究表明:叶柄产生愈伤组织最适培养基为MS+2.0 mg/L BA+0.2 mg/L NAA+0.05 mg/L2,4-D;诱导芽分化最适培养基为1/2MS+2 000 mg/L脯氨酸,可使诱导分化率达27%;增殖继代最适培养基为B5+1.0 mg/L BA+0.1 mg/L NAA,增殖系数达6.79;生根最适培养基为1/2MS+0.1 mg/L IBA+0.1 mg/L NAA,生根率达100%.