利用同源菌株融合改良农抗5102产生菌Ⅱ.融合子的检出、筛选和鉴别

以农抗５１０２产生菌同源菌株９０－１１（ＳｔｒＲ、ＴｅｔＲ）和ＦＲ－００８（ＲｉｆＲ、ＡｍｐＲ）为亲本的原生质体融合，采用“后涂直接法”在各含５０ｍｇ／Ｌ链霉素和利福平的双抗平板上检出融合子，经抗药性和抗菌活性筛选，获得１株产生２株亲本均不具备的抗细菌活性的融合子ＳＲ－７和１株各种抗菌活性均高于亲本的融合子ＳＲ－Ｔ１９。经抗药稳定性、培养和形态特征、抗菌谱、代谢产物、紫外光谱和ＲＡＰＤ分析等鉴别，证实２株融合子均系双亲融合重组的后代。

利用同源菌株融合改良农抗5102产生菌Ⅰ.原生质体的制备、再生和融合

报道了农抗５１０２产生菌同源菌株９０－１１、ＦＲ－００８及ＷＨ－１相互之间融合研究的前期结果。３菌株原生质体制备的适宜酶解温度和时间均为３２℃和１．０～１．５ｈ，但所需溶菌酶量则有异：９０－１１为２～４ｍｇ／ｍｌ，ＦＲ－００８为６ｍｇ／ｍｌ，ＷＨ－１为２ｍｇ／ｍｌ。将各菌株的原生质体在－２０℃下冻存１个月内的相对再生率可维持在７０％以上，２个月以内仍可达６０％以上。以５０％ＰＥＧ１０００诱导融合各组合的融合频率是，９０－１１×ＷＨ－１为１０－２，ＦＲ－００８×－９０－１１以及ＦＲ－００８×ＷＨ－１均为１０－３。

农抗5102产生菌与泾阳链霉菌5406融合的初步研究

本文报道农抗5102产生蓖衍生菌株90－11和WH－1与泾阳链霉菌5406之间融合研究的前期结果。研究表明，二级生长培养基中蔗糖浓度增加至17％及匀浆打散菌丝团，均能提高5406菌株的原生质体释放量。农抗5102产生菌与泾阳链霉菌原生质体制备的适宜条件差异较大。菌株90-11和WH-1较易酶解，适宜条件为：32℃，溶菌酶量2－4mg／ml，1－1．5h；而5406菌株需相对较高的酶量和校长的酶解时间：32℃，溶菌酶量6－8mg／ml；1．5－2h。各菌株原生质体在-20℃下冻存，一个月内可维持70％以上相对再生率。以50％PEG1000诱导融合，利用抗性标记检出融合子，固定农抗5102产生曾与泾阳链霉菌5406的种间融合频率为10-4。

利用同源菌株融合改良农抗5102产生菌 Ⅲ.融合子产生新活性物质的分离、精制和初步鉴别

农抗５１０２产生菌同源菌株９０１１和ＦＲ００８的原生质体融合重组子ＳＲ７能产生１种两亲本所没有的抗细菌活性物质。该物质可用７２４弱酸性阳离子树脂从发酵滤液中吸附，以７％硫酸解吸后，经７１７强碱性阳离子树脂柱层析精制。经热稳定性、酸碱稳定性、纸电泳、纸层析谱、紫外吸收光谱和呈色反应等多项试验检测，初步判定为１种强碱性水溶性氨基糖苷类抗生素。它具有广谱抗Ｇ＋、Ｇ－细菌的活性，对各种真菌和酵母无活性。

利用同源菌株融合改良农抗5102产生菌——吸水链霉菌应城变种的研究

利用同源菌株融合改良农抗５１０２产生菌——吸水链霉菌应城变种的研究ＳＴＲＡＩＮＩＭＰＲＯＶＥＭＥＮＴＯＦＡＮＴＩＢＩＯＴＩＣ５１０２ＰＲＯＤＵＣＩＮＧＳＴＲＥＰＴＯＭＹＣＥＳＨＹＧＲＯＳＣＯＰＩＣＵＳＶＡＲ．ＹＩＮＧＣＨＥＮＧＥＮＳＩＳＢＹＰＲＯＴＯ...

农抗5102产生菌工程菌株WH─1的稳定性

无论是在连续传代的过程中，还是在不同温度条件下保存的过程中，工程菌株ＷＨ－１均不稳定，其不稳定性主要表现在培养特征的变化和产生抗生素性能的衰退两个方面，且都是一个由量变逐渐转化为质变的过程。采用连续多次单孢子分离筛选的方法可以获得比较稳定的高产菌株。本实验主要通过５次单孢子分离筛选，得到了ＷＨ－１－１、ＷＨ－１－２、ＷＨ－１－３。

农抗5102产生菌工程菌株WH－1的生物学特性

通过重组ＤＮＡ技术，从农抗５１０２产生菌１０－２２菌株中得到１株工程菌株ＷＨ－１，它的培养特征与出发菌株１０－２２有明显差别，前者气生菌丝白色，不吸水，基内菌丝浅黄色，可溶性色素淡黄；后者气生菌丝深灰，在大多数培养基均能吸水，基内菌丝暗柠檬色，可溶性色素淡褐。两者在２８℃和３７℃均可良好生长。菌株ＷＨ－１能产生菌株１０－２２所产生的３种５１０２抗生素，而且活性均更强，尤其是５１０２－Ⅰ几乎要高出１０倍。菌株ＷＨ－１尚能产生菌株１０－２２不产生的１种活性物质（５１０２－Ⅳ）。该活性物质只能在琼脂培养基上产生。