利用同源菌株融合改良农抗5102产生菌Ⅱ.融合子的检出、筛选和鉴别

以农抗５１０２产生菌同源菌株９０－１１（ＳｔｒＲ、ＴｅｔＲ）和ＦＲ－００８（ＲｉｆＲ、ＡｍｐＲ）为亲本的原生质体融合，采用“后涂直接法”在各含５０ｍｇ／Ｌ链霉素和利福平的双抗平板上检出融合子，经抗药性和抗菌活性筛选，获得１株产生２株亲本均不具备的抗细菌活性的融合子ＳＲ－７和１株各种抗菌活性均高于亲本的融合子ＳＲ－Ｔ１９。经抗药稳定性、培养和形态特征、抗菌谱、代谢产物、紫外光谱和ＲＡＰＤ分析等鉴别，证实２株融合子均系双亲融合重组的后代。

利用同源菌株融合改良农抗5102产生菌Ⅰ.原生质体的制备、再生和融合

报道了农抗５１０２产生菌同源菌株９０－１１、ＦＲ－００８及ＷＨ－１相互之间融合研究的前期结果。３菌株原生质体制备的适宜酶解温度和时间均为３２℃和１．０～１．５ｈ，但所需溶菌酶量则有异：９０－１１为２～４ｍｇ／ｍｌ，ＦＲ－００８为６ｍｇ／ｍｌ，ＷＨ－１为２ｍｇ／ｍｌ。将各菌株的原生质体在－２０℃下冻存１个月内的相对再生率可维持在７０％以上，２个月以内仍可达６０％以上。以５０％ＰＥＧ１０００诱导融合各组合的融合频率是，９０－１１×ＷＨ－１为１０－２，ＦＲ－００８×－９０－１１以及ＦＲ－００８×ＷＨ－１均为１０－３。

农抗5102产生菌与泾阳链霉菌5406融合的初步研究

本文报道农抗5102产生蓖衍生菌株90－11和WH－1与泾阳链霉菌5406之间融合研究的前期结果。研究表明，二级生长培养基中蔗糖浓度增加至17％及匀浆打散菌丝团，均能提高5406菌株的原生质体释放量。农抗5102产生菌与泾阳链霉菌原生质体制备的适宜条件差异较大。菌株90-11和WH-1较易酶解，适宜条件为：32℃，溶菌酶量2－4mg／ml，1－1．5h；而5406菌株需相对较高的酶量和校长的酶解时间：32℃，溶菌酶量6－8mg／ml；1．5－2h。各菌株原生质体在-20℃下冻存，一个月内可维持70％以上相对再生率。以50％PEG1000诱导融合，利用抗性标记检出融合子，固定农抗5102产生曾与泾阳链霉菌5406的种间融合频率为10-4。

利用同源菌株融合改良农抗5102产生菌 Ⅲ.融合子产生新活性物质的分离、精制和初步鉴别

农抗５１０２产生菌同源菌株９０１１和ＦＲ００８的原生质体融合重组子ＳＲ７能产生１种两亲本所没有的抗细菌活性物质。该物质可用７２４弱酸性阳离子树脂从发酵滤液中吸附，以７％硫酸解吸后，经７１７强碱性阳离子树脂柱层析精制。经热稳定性、酸碱稳定性、纸电泳、纸层析谱、紫外吸收光谱和呈色反应等多项试验检测，初步判定为１种强碱性水溶性氨基糖苷类抗生素。它具有广谱抗Ｇ＋、Ｇ－细菌的活性，对各种真菌和酵母无活性。