农杆菌渗入法介导的基因瞬时表达技术及应用

农杆菌渗入法是在植物中瞬时表达外源基因的一种方法,该方法通过在植物叶片上注射农杆菌,使目的基因转入植物细胞中进行快速表达。本文综述了农杆菌渗入法的原理、技术流程、影响因素及其应用,其应用主要涉及外源基因的表达、检测转基因的表达、启动子分析、转录后基因沉默、抑制子功能鉴定、细胞定位以及基因相互作用等方面。随着技术的进一步完善,我们相信该技术将成为转基因育种领域的重要的手段。

影响农杆菌渗入法瞬间表达重组蛋白系统的若干因素

利用农杆菌渗入法(Agroinfiltration)在植物中瞬间表达重组蛋白的系统,具有高效、安全、简便的特点,是一种重要的生产重组蛋白的方法。概述了Agroinfiltration系统的建立、发展及在生产重组蛋白领域的应用进展;并对影响该系统的技术因素作了深入探讨。

马铃薯Y病毒CP基因RNAi载体构建与干涉效果测定

RNA沉默(RNAi)介导的植物抗病毒研究是近年来引起广泛关注的一项植物抗病毒基因工程策略。马铃薯Y病毒(PVY)在世界范围内引起马铃薯、烟草等重要经济作物的病害,并且造成严重的经济损失。本文以PVY的外壳蛋白(CP)基因为模板扩增300bp和354bp两个片段,正向和反向分别插入植物表达载体pROKⅡ的35S启动子下游,从而构建了以PVY的CP基因为靶标的RNAi植物表达载体pROKY300,转入农杆菌EHA105中,以农杆菌渗入法在本氏烟中瞬时表达与PVYCP同源的hairpin RNA。结果表明,瞬时表达的hairpinRNA有效干涉了PVY侵染。

马铃薯半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因(PCPI)在马铃薯晚疫病抗性中的功能表征研究

由于马铃薯半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因(PCPI)构造载体双链RNA在疫霉抗性马铃薯品种中薯5号中瞬时表达,PCPI转录减少了93.94%。PCPI的沉默导致了病变尺寸和水浸的显著增长,表明半胱氨酸蛋白酶抑制剂能在限制病变扩张中发挥作用。本研究通过农杆菌渗入法生产了针对PCPI用于测试在马铃薯中获得瞬态基因沉默可能性的dsRNA构造,结果显示:在马铃薯植株叶片上的构造导致PCPI的下调和相应转录积累的降低;沉默的马铃薯基因编码了马铃薯晚疫病的半胱氨酸蛋白酶抑制剂,用以抵抗中薯5号品种破裂的阻力。该研究可用于生产稳定的敏感基因型的抗性转基因植物。