献浆员中新型冠状病毒SARS-CoV-2中和抗体检测分析

目的:静注人免疫球蛋白(IVIG)和新冠肺炎恢复者的血浆已被推荐用于重症新冠肺炎患者的治疗。因此,血浆中新型冠状病毒(SARS-CoV-2)中和抗体水平需要得以及时评价。本研究利用不需要在生物安全三级实验室操作的SARS-CoV-2假病毒中和抗体检测方法,建立了快速检测中和抗体的策略。方法:采用新型冠状病毒SARS-CoV-2假病毒,对1080份健康献血员血浆及26批次IVIG的SARSCoV-2中和抗体进行检测。初筛采用1∶30倍稀释检测;对初筛阳性(抑制率≥50%为阳性)的样本进行复试,复试采用1∶30、1∶90和1∶270三个梯度;对于复试阳性的样本进行中和特异性分析,进一步检测针对水疱性口炎病毒(VSV)、严重急性呼吸道综合征冠状病毒(SARS-CoV)和中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)的中和活性。结果与结论:在1∶30倍稀释时,26批次IVIG的SARS-CoV-2中和抗体均为阴性,1080份献血员血浆中SARS-CoV-2中和抗体阳性率为0.6%(6/1180);对6份阳性血浆的特异性分析显示均为对VSV、SRAS-CoV或MESR-CoV假病毒的非特异中和作用。本研究表明该假病毒中和抗体检测方法和快速检测策略可以用于IVIG、健康献血员和感染者恢复期血浆中的中和抗体检测,发现IVIG针对SARS-CoV-2无特异的中和抗体活性,IVIG在临床重症治疗中发挥的是非病毒特异的辅助治疗作用。

一种吡唑并吡啶酮类衍生物对新型冠状病毒SARS-CoV-2的抑制作用研究

目的探究3-(4-氯苯基)-1,4-二苯基-1,4,5,7-四氢-6H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-酮(以下简称为J1)体外抑制新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的作用及潜在作用机制。方法采用MTT法评价化合物J1对Vero-E6、ACE2/293T和HRT18细胞的毒性。利用感染性SARS-CoV-2和人冠状病毒OC43(HCoV-OC43)检测化合物J1的抗冠状病毒活性。采用SARS-CoV-2假病毒体外细胞感染模型和时间点加药实验检测J1抑制SARS-CoV-2病毒感染靶细胞的作用阶段。通过S蛋白介导的细胞融合抑制实验检测J1是否通过阻止病毒膜融合而抑制SARS-CoV-2的进入。采用SPR实验和分子对接技术阐明J1与SARS-CoV-2 S蛋白的作用。结果J1对Vero-E6、ACE2/293T和HRT18细胞的毒性较小,半数细胞毒性浓度CC50均大于100μmol·L^(-1)。J1能显著抑制SARS-CoV-2原始株和Delta变异株的活性,半数有效浓度EC50分别为607μmol·L^(-1)和221μmol·L^(-1)。此外,J1可抑制HCoV-OC43病毒的感染,显著减少NP蛋白和mRNA的表达。分子对接结果显示,J1通过氢键作用和疏水作用力与SARS-CoV-2 S蛋白活性位点稳定结合。机制研究结果表明,J1可抑制SARS-CoV-2病毒进入靶细胞,半数抑制浓度IC50为157μmol·L^(-1)。J1浓度依赖性抑制SARS-CoV-2 S蛋白介导的细胞-细胞膜融合,SPR实验证实J1与S蛋白具有较强结合能力。结论吡唑并吡啶酮类衍生物J1通过靶向S蛋白抑制SARS-CoV-2进入靶细胞。

新型冠状病毒SARS-CoV-2的病原学特征及检测技术研究进展

新型冠状病毒(SARS-CoV-2)是一种使人呼吸道系统急性严重感染的单链RNA冠状病毒,通过对新型冠状病毒前沿研究进行总结,对新型冠状病毒的发现、分类、基因组和流行病学作了简单介绍,同时回顾了目前该病毒的检测技术。通过对该病毒的综述希望有助于深入了解该病毒的致病机制和免疫机理,促进抗病毒药物和疫苗的研发。

新型冠状病毒SARS-CoV-2的实验室检测技术

2019年12月起由新型冠状病毒(SARS-CoV-2)导致的新型冠状病毒肺炎对全球公共卫生造成了重大和急迫威胁。该病毒传染性强,主要通过飞沫和接触传播,感染者出现肺炎几率较高,少数患者会出现急性呼吸窘迫综合征合并严重呼吸道并发症,甚至导致死亡。因此,选择合适的检测技术和方法对病原学做出准确、快速的鉴定,对提高疾病的诊断和治疗效率,遏制传染病爆发流行起关键作用。本文将对该病毒实验室检测技术,包括病毒分离培养、实时荧光RT-PCR、基因测序、血清学抗体检测及基于CRISPR/Cas13系统的基因编辑技术等进行概述,以期为临床医生及科研工作者提供更好地防治策略和研究思路。

新型冠状病毒SARS-CoV-2基因检测及其影像学对照

目的研究新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸基因检测及其影像学对照。方法实时荧光RT-PCR方法检测SARS-CoV-2 ORF1a/b和N基因,分析23例SARS-CoV-2核酸阳性患者临床及影像学资料。结果①无症状感染者3例,COVID-19确诊20例,潜伏期2~24天,成人轻型5例,儿童轻型1例,青年轻型1例,成年普通型13例。②23例SARS-CoV-2基因阳性患者,痰标本的病毒含量和检测效果高于鼻咽拭子标本,N基因粪便比痰和鼻咽拭子阳性持续时间长。③20例COVID-19中,30.0%(6/20)CT扫描未见异常。病毒载量与影像学无正比对应关系。④发病部位以外周带(13/14)和下叶后基底段(11/14)多见,两个或多个肺叶受累(11/14),双侧病变(11/14)。⑤14例CT异常COVID-19中,影像学主要表现为毛玻璃影(10/14)、双肺斑片状阴影(10/14)、晕征(8/14)、细网格征(5/14),以及伴发小叶间隔增厚(5/14)、支气管充气征(5/14)和小血管增粗影(5/14)。结论病毒载量与影像学无正比对应关系,SARS-CoV-2核酸检测联合CT扫描、流行病学史可以提高COVID-19的检出率,不能孤立仅仅依靠核酸PCR检查或CT检查。

新型冠状病毒SARS-CoV-2的变异和进化分析

目的分析新型冠状病毒SARS-CoV-2的进化、变异情况。方法从GISAID、NCBI中下载相关病毒全基因组序列,运用生物信息学软件MEGA-X、BEAST、TempEst等软件,构建基因组进化树,推测病毒的时间进化信号,计算病毒出现的tMRCA时间,分析病毒进化的选择压力。结果基因组进化树显示SARS-CoV-2与蝙蝠冠状病毒Beta CoV/bat/Yunnan/RaTG13/2013、bat-SL-CoVZC45、bat-SL-CoVZXC21和SARS-CoV等病毒共同构成冠状病毒β属的Sarbecovirus亚属。现在的病毒序列有微弱的时间进化信号,tMRCA平均时间为73 d,95%可信区间(38.9~119.3 d),与BetaCoV/bat/Yunnan/RaTG13/2013病毒不具正性时间进化信号,与bat-SL-CoVZC45和SARS-CoV具有强的正性时间进化关系。病毒在流行期间存在变异,主要是净化选择压力。结论病毒SARS-CoV-2可能出现在2019年11月左右,来源于蝙蝠相关冠状病毒。结果将有助于研究病毒SARS-CoV-2的溯源、进化,对疾病进行正确防控具有指导意义。

新型冠状病毒SARS-CoV-2感染治疗中的“老药新用”

近期,新型冠状病毒(SARS-CoV-2)引发的肺炎在中国武汉暴发,给人类的生命健康带来了威胁,并给中国人民的生活带来了极大影响。但是目前临床上尚无疗效明确的针对SARS-CoV-2的特效药物,一些在体外细胞水平上初步证明对该病毒有一定抑制活性或之前文献报道的对冠状病毒感染有抑制效果的临床药物,目前正在开展SARS-CoV-2感染患者治疗的临床试验研究或已用于试用性治疗。本综述主要从老药新用的角度来简要介绍这些药物的作用机制、体外抗病毒效果、副作用等特征及研究现状,希望能为SARS-CoV-2感染患者的治疗提供思路。

新型冠状病毒SARS-CoV-2的研究进展

截至2020年3月30日,全球新型冠状病毒(SARS-CoV-2)感染者超70万例,死亡人数35 020例。世界卫生组织(WHO)于2020年3月12日宣布此次由SARS-CoV-2病毒引起的COVID-19已具有全球大流行特征。目前,尚无针对该病毒的疫苗或特效药,针对SARS-CoV-2的最有效措施还是早期发现,隔离新的感染源及对确诊患者的诊断和治疗。为应对此次疫情,详细了解病毒的性质及其临床特征至关重要,主要对新型冠状病毒的结构与基因组、流行病学、疾病诊断及治疗等方面的研究进展进行了综述。

新型冠状病毒SARS-CoV-2研究进展

在武汉发生的由新型冠状病毒SARS-CoV-2引发的人类冠状病毒病COVID-19,仅仅2个多月时间在我国及国际上70多个国家出现迅速传播,致病和死亡率高,人类生命受到了极大威胁。一些科学家火速投入研究,对SARS-CoV-2的来源和进化、形态特征和基因结构、感染和致病分子机制开展深入研究,取得了重大进展,为科学防控COVID-19提供了重要依据。根据上述研究的基础,文中对COVID-19病毒疫苗、抗体和抑制剂研发提出了设想,在研究防控COVID-19核心技术上具有一定的参考价值。

BD-77抑制新型冠状病毒SARS-CoV-2药效及机制探讨

目的:利用人血管紧张素转化酶2(hACE2)转基因小鼠模型,进行BD-77抗新型冠状病毒SARS-CoV-2药效学研究,并初步探讨BD-77抗SARS-CoV-2的作用机制。方法:建立SARS-CoV-2奥密克戎(Omicron)和德尔塔(Delta)变异株感染VeroE6细胞模型并给予BD-77,观察BD-77体外抗病毒作用效果;通过试剂盒体外检测BD-77对SARS-CoV-2病毒(Delta/Omicron)刺突S蛋白与血管紧张素转化酶2(ACE2)结合的影响;采用色谱法检测BD-77对新冠病毒S蛋白和N蛋白的结合作;hACE2转基因C57BL/6小鼠分为空白组、SARS-CoV-2感染组、BD-77给药37.5、75 mg·kg^(-1)组,每组各8只,建立SARS-CoV-2感染hACE2转基因小鼠致肺炎模型,观察小鼠生存情况,检测小鼠肺组织病毒滴度并观察肺组织病变情况。结果:BD-77在体外对Omicron和Delta变异株有一定的抑制作用,半数抑制浓度(IC50)分别为526.3、653.0 mg·L^(-1);BD-77对SARS-CoV-2病毒的WT、Omicron和Delta变异株S蛋白与ACE2的结合无明显抑制作用;BD-77与新冠病毒S蛋白、N蛋白无结合作用;空白组小鼠无死亡,SARS-CoV-2感染小鼠死亡率为75%、小鼠肺组织中有大量病毒复制、且肺组织、间质有大面积炎症渗出;与模型组比较,BD-77给药37.5 mg·kg^(-1)组和75 mg·kg^(-1)组能够降低小鼠死亡率、明显降低小鼠肺组织中病毒滴度(P<0.05)并改善肺部病变情况。结论:BD-77显示出在体内外对SARS-CoV-2病毒的显著抑制效果。然而,其作用机制并非直接抑制病毒或干预病毒与宿主的结合过程。这一发现提示了对BD-77的作用机制需要通过进一步的实验来深入研究和阐明。

基于hACE2转导建立SARS-CoV-2 spike假病毒感染病证结合的小鼠病毒肺炎模型

目的建立与评价一种安全、经济、有效的病证结合小鼠新冠病毒感染肺炎模型。方法30只KM种小鼠随机分为空白组、对照组及实验1组、实验2组、实验3组,每组各6只。每天把KM小鼠置于模拟寒湿环境中4 h,将表达hACE2的重组腺相关病毒(pAAV-hACE2)采用改良悬挂法气管内给药转导至肺组织,继以新型冠状病毒(SARS-CoV-2)spike假病毒采用相同的气管内给药方式造模。观察各组小鼠一般情况,检测体重变化、肺指数、血清炎性因子及肺部病理变化。结果免疫组化法显示h ACE2在小鼠肺组织中有效表达;在寒湿环境中给予SARS-CoV-2 spike假病毒后,实验组小鼠表现出类似疫毒犯肺证候的体征;且同样喂养条件和时间下,与空白组和对照组小鼠比较,实验组小鼠出现体重下降;实验1、2、3组小鼠出现肺指数显著增大(P<0.05或P<0.01),血清炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)显著升高(P<0.01),肺组织病理改变明显。结论本研究成功建立了一种安全、经济、有效的病证结合小鼠新冠病毒感染肺炎模型。

新型冠状病毒肺炎与2型糖尿病炎性风暴特质的交互影响

目的 通过比较新型冠状病毒肺炎(COVID-19)患者伴或不伴2型并糖尿病(T2DM)的炎症指标、凝血功能及疾病转归的差异,讨论COVID-19合并2型糖尿病患者的炎性特质及其相互影响。方法 回顾性纳入2022年12月至2023年4月于太原市人民医院住院治疗确诊为COVID-19的轻型或普通型患者311例,其中T2DM组115例,选取同时段就诊的与之匹配的非糖尿病患者(对照组)196例。比较2组患者血细胞分析、炎症指标、凝血功能等实验室指标及核酸转阴时间、住院时间、是否使用激素等临床资料的差异。结果 T2DM组淋巴细胞计数水平低于对照组,中性粒细胞计数、C反应蛋白高于对照组(P<0.05);T2DM组D-二聚体显著升高(P<0.05);T2DM组核酸转阴时间及住院时间更长,使用激素者更多。结论 糖尿病是COVID-19发生的高危因素,新型冠状病毒感染增加了糖尿病患者的血糖调控难度。糖尿病合并COVID-19更容易发生“炎性风暴”,对患者的预后有严重的影响,住院时间更长,死亡风险大。

新型冠状病毒肺炎患者多类型样本SARS-CoV-2核酸检测在临床诊疗中的意义

目的探讨不同类型样本新冠核酸检测结果在新型冠状病毒肺炎(COVID-19)临床诊治和疫情防控中的意义。方法选取2020年1月23日~2月22日延安大学附属医院确诊的5例COVID-19患者,采集不同部位标本进行核酸检测,并进行统计学分析。结果采集的123例标本严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)核酸检测结果表明,咽拭子25例,阳性率44.0%(11/25);鼻拭子40例,阳性率25.0%(10/40);肛拭子40例,阳性率70.0%(28/40);18例血标本核酸检测均阴性,5例患者符合出院标准时粪便核酸检测均阳性。截止3月5日对5例患者出院后追踪发现,出院2周或更长时间粪便SARS-CoV-2核酸仍阳性。结论多样本新冠核酸检测对于新冠感染患者的确诊有重要价值;患者治愈出院后应加强随访、教育和复查,做好排泄物的管理,有利于巩固疫情防控效果,减少接触感染的发生。

布地奈德/福莫特罗粉吸入剂联合复方甲氧那明治疗急性呼吸综合征冠状病毒-2感染亚急性咳嗽的临床疗效分析

目的回顾性分析信必可都保[布地奈德/福莫特罗粉吸入剂(Ⅰ)=320μg/9.0μg]联合阿斯美(复方甲氧那明)治疗急性呼吸综合征冠状病毒-2(SARS-COV-2)感染后亚急性咳嗽的临床疗效。方法收集2022年12月—2023年6月确诊的SARS-COV-2(Omicron BA.5.2、BF.7感染)亚急性咳嗽患者220例,分为观察组和对照组,每组各110例。观察组给予信必可都保吸入(1吸/次,2次/日),阿斯美口服(2粒/次,3次/日);对照组给予咳必清、酮替芬和孟鲁司特钠三联药物常规止咳、平喘对症治疗。采用咳嗽程度评分表(CET)观察并记录治疗后第3、5、7天咳嗽缓解情况,检测呼出气一氧化氮(FeNO),并进行疗效评价。结果治疗后第3、5、7天患者的CET评分、FeNO值均较前下降。观察组临床控制86例,显效11例,有效9例,无效4例,总有效率96%;对照组临床控制68例,显效17例,有效13例,无效12例,总有效率89%。2组的总有效率比较,差别有统计学意义(P<0.05)。结论信必可都保和阿斯美联合治疗SARS-COV-2(Omicron BA.5.2、BF.7感染)亚急性咳嗽,可明显改善患者的咳嗽症状。

SARS-CoV-2重组痘苗病毒疫苗rVTT△TK-RBD的构建、筛选及免疫原性研究

目的 构建重组痘苗病毒载体疫苗rVTT△TK-RBD,并评价其安全性和免疫原性。方法 参考严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)基因序列合成受体结合域(RBD)基因,并将其插入自主构建的重组质粒pSTKE的多克隆位点上,构建重组痘苗病毒穿梭载体pSTKE-RBD,并转染到预先感染天坛株痘苗病毒(VTT)的BHK-21细胞内,经多轮的荧光噬斑筛选成功获得重组痘苗病毒rVTT△TK-RBD;通过滴鼻方式免疫小鼠后,检测rVTT△TK-RBD对BALB/c小鼠体质量的影响;通过肌肉免疫小鼠后,分析rVTT△TK-RBD对BALB/c小鼠产生的特异性抗体和中和抗体的水平;通过流式细胞术检测rVTT△TK-RBD对BALB/c小鼠T细胞亚群的影响。结果 利用同源重组、增强型绿色荧光蛋白(EGFP)筛选标记和多次荧光噬斑筛选,成功筛选获得了表达RBD的胸腺激酶(TK)基因缺失型重组痘苗病毒rVTT△TK-RBD,且PCR验证成功。BALB/c小鼠体内实验表明rVTT△TK-RBD具有较好的抗SARS-CoV-2的免疫原性且相比于亲本株VTT明显降低了对机体的毒性作用。结论 成功构建并获得SARS-CoV-2重组痘苗病毒疫苗rVTT△TK-RBD并通过各项试验证明其安全性和免疫原性。

自然杀伤(NK)细胞与2019冠状病毒病(COVID-19)发生发展的研究进展

自然杀伤(NK)细胞在清除病毒,执行免疫调节方面发挥着重要的作用,它通过分泌趋化因子以及与其他天然免疫细胞协同作用,被赋予天然免疫调节功能和获得性免疫反应。随着对严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)感染的2019冠状病毒病(COVID-19)的研究深入,发现NK细胞在其中发挥着重要作用。SARS-CoV-2感染会影响NK细胞的分布和效应功能,NK细胞的免疫应答或可影响新冠肺炎患者的预后。本文总结了近年来NK细胞在COVID-19感染中作用的研究现状,并且讨论了以NK细胞作为治疗剂的可能性,以期为防治SARS-CoV-2的免疫损害提供潜在思路。

新型冠状病毒肺炎病例尿液SARS-CoV-2特异性IgM、IgG抗体结果分析

目的:探讨尿液严重急性呼吸综合征冠状病毒2特异性抗体免疫球蛋白M(IgM)和免疫球蛋白G(IgG)的临床应用价值。方法:选取30例新型冠状病毒肺炎康复期患者,于出院后第14日采集研究对象的血清及尿液标本,分别用磁微粒全自动化学发光免疫分析系统化学发光免疫分析仪(Axceed 260)和新型冠状病毒(2019-nCOV)IgM/IgG检测试剂盒(磁微粒化学发光法)检测SARS-CoV-2特异性IgM/IgG抗体,并选取10例无SARS-CoV-2接触史健康体检者作为对照。应用线性回归分析血清IgM与尿液IgM、血清IgG与尿液IgG抗体水平的相关性,并通过Logistic回归形成联合预测因子绘制ROC曲线并计算曲线下面积评估其诊断价值。结果:COVID-19康复期患者血清IgM与尿液IgM、血清IgG与尿液IgG抗体水平分别呈正相关性(均P<0.001);与健康对照组相比,COVID-19组尿液特异性IgM、IgG抗体水平高,其中尿液特异性IgM抗体差异有统计学意义(P=0.043)。通过Logistic回归形成联合预测因子绘制ROC曲线,结果显示尿液IgM、IgG抗体联合检测AUC为0.713。结论:尿液SARS-CoV-2 IgM、IgG抗体检测作为一种无创快速简便的新型检测方法,为COVID-19诊断提供了新思路。

应用免疫信息学技术预测严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)的抗原表位

目的运用免疫信息学技术预测严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)的B细胞、细胞毒性T淋巴细胞(CTL)和辅助T(Th)细胞的抗原表位.方法从NCBI数据库检索SARS-CoV-2蛋白序列,根据抗原性≥0.5和氨基酸数≥100进行筛选,最终的蛋白序列用于后续的抗原肽的预测.用蛋白质结构预测软件Phyre2进行三维结构的预测、蛋白质模型结构的细化软件GalaxyRefine优化蛋白的三维结构,最后用蛋白质结构同源建模SWISS-MODEL系统对优化后的结构进行准确性评估.蛋白序列用于CTL、Th细胞和线性B细胞抗原肽预测,三维结构用于结构性B细胞抗原预测.免疫表位数据库和分析资源(IEDB)预测SARS-CoV-2的CTL和Th细胞抗原表位,B细胞线性抗原肽预测软件Bepipred Linear Epitope Prediction 2.0和B细胞结构抗原肽预测软件ElliPro-Epitope prediction based upon structural protrusion分别预测B细胞线性和结构抗原肽.结果从NCBI数据库获得了27个SARS-CoV-2的蛋白序列,去掉抗原性<0.5和氨基酸数<100的蛋白质后,最终选定9个蛋白进行后续抗原肽预测.最终获得了24个CTL、20个Th细胞、12个B细胞线性表位和16个B细胞结构表位.结论获得的抗原表位可用于后续多表位疫苗的设计,相较于只针对单种蛋白靶点的抗原表位而言,多靶点抗原表位具有更强的免疫原性,这些抗原表位对SARS-CoV-2疫苗而言,具有一定的参考价值.

新型冠状病毒(SARS-CoV-2)与严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)研究对比

2019年末我国武汉爆发了自2003年的SARS-CoV和2012年的中东呼吸综合症(MERS)以来又一次冠状病毒大规模爆发流行。截至2020年10月09日20时,世界卫生组织(World Health Organization, WHO)数据显示海外累计确诊病例36,725,069例,死亡病例1,062,153例,中国确诊人数达到了91,264例。此次疫情的严重性自然引起国人联想到2003年爆发的SARS病毒。且最新研究认为SARS-CoV-2是SARS-CoV的姊妹病毒,具有高度的同源性。因此我们将围绕SARS-CoV-2和SARS-CoV之间的联系以及SARS-CoV-2的最新诊疗方案进行简要综述。

基于双核酸适配体的磁珠-SERS标签三明治结构用于SARS-CoV-2病毒表面S蛋白的快速检测

面对新型冠状病毒2019(COVID-19)传播速度极快的情况,发展快速、准确和低成本的诊断方法以检测SARS-CoV-2病毒的特定抗原非常必要。基于逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的COVID-19检测需要特定的实验室,耗时较长。本文针对SARS-CoV-2刺突蛋白,提出了一种基于核酸适配体特异性识别的一步捕获底物和检测探针的表面增强拉曼光谱(SERS)检测平台。利用模拟病毒(PSV)进行实验,不经预处理,在5 min内用便携式拉曼光谱仪检测SARS-CoV-2病毒及其变异株。实验结果表明,针对模拟病毒的检出限为200 TU/mL。此外,该方法可以检测另外5种SARS-CoV-2的变异病毒株,咽拭子体系中的极限检测限可以达到5000 TU/mL。实际大批量咽拭子的实验结果可以达到特异性为100%的效果。因此,该平台在SARS-CoV-2的医护点快速诊断中具有很大的应用潜力。