缬沙坦对人冠脉内皮细胞氧化应激过程中gp91^(Phox)的影响

目的研究缬沙坦对人冠脉内皮细胞(HCAEC)氧化应激过程中gp91Phox的影响。方法对照组:体外贴壁培养HCAEC,不进行其他干预;实验组:相同培养条件下加入缬沙坦(10μmol/L)培养24 h。应用Western blot法和细胞免疫荧光法测定两组细胞中gp91Phox的水平,对两组结果进行统计分析并比较。结果实验组HCAEC中gp91Phox的水平明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论缬沙坦可以显著减少HCAEC中尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶亚基gp91Phox的表达,从而降低氧化应激水平。

冠脉内皮细胞与心肌缺血再灌注损伤

缺血再灌注损伤在心肌缺血再灌中表现很明显。由于冠脉内皮细胞(CE)所处的特殊解剖位置及生理特点,缺血再灌注的哪对钙稳态、血凝稳定以及缺血再灌注稳态的维持都有重要作用。CE不仅是缺血再灌注损伤的靶器官,而且是活性氧产生的主要部位,同时又具有抗氧化作用。在体、离体心肌缺血再灌注损伤模型及缺氧处理分离培养的CE研究均表明,心肌缺血再灌注可引起CE损伤,甚至死亡。

TGF-β/miRNA/c-Ski在人冠脉内皮细胞中调控内皮-间充质转化的作用机制研究

目的分析TGF-β、miRNA以及c-Ski于人冠脉内皮细胞调控内皮-间充质转化(End-MT)的作用机制。方法以人冠状动脉内皮细胞为研究对象,构建基心肌纤维化细胞模型,设置空白对照组,采取0 ng/mL、1 ng/mL、2.5 g/mL及5 ng/mL几种浓度梯度TGF-β1诱导冠脉内皮细胞,经慢病毒c-SKI载体传染细胞与动物,经免疫印迹法对c-SKI于End-MT细胞内的表达情况开展检测,分析过表达C-SKI对于End-MT有关分子标志物影响,结合在线软件及生物信息学分析,筛选可靶向结合c-SKI3′-UTR的microRNA,使用双荧光素酶报告验证其结合及调控关系。结果不同浓度TGF-β1组作用48 h之后,c-SKI表达呈现剂量依赖性降低,和空白对照组比较,5μg/L组c-SKI表达降低最明显(P<0.05)。和对照病毒感染+TGF-β1组比较,C-SKI基因感染+TGF-β1组冠脉内皮细胞内vimentin与a-SMA蛋白表达明显下降,E-ead蛋白表达升高(P<0.05)。和对照病毒感染+TGF-β1组比较,C-SKI基因感染+TGF-β1组p-Smad2与p-Smad3蛋白水平明显下降(P<0.05)。MiR-200a mimics转染后和对照组比较miR-200a表达明显上升(P<0.05)。1 ng/mL、2.5 g/mL及5 ng/mL浓度TGF-β1组与0 ng/mL浓度TGF-β1组对比,CD31与FSP1蛋白表达显著上升;于1 ng/mL、2.5 g/mL浓度TGF-β1组和0 ng/mL浓度TGF-β1组中,miR-200组和对照组比较,其CD31及VEcadherin蛋白表达显著上升(P<0.05),a-SMA与FSP1蛋白表达显著下降(P<0.05)。结论于End-MT时C-SKI表达下调,C-SKI过表达可抑制冠脉内皮End-MT,机制可能和对TGF-β1/Smad信号通路的活性调控相关。miR-200a能抑制End-MT过程,作用机制可能和靶向抑制HMGB1对TGF-β1产生调控作用有关。

盐酸法舒地尔对脂多糖诱导人冠状内皮细胞缝隙连接蛋白43表达的影响

目的:探讨盐酸法舒地尔(HF)对脂多糖(LPS)诱导人冠脉内皮细胞(HCAEC)中缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的影响。方法:用不同浓度的LPS(0.01 mg/L、0.1 mg/L、1 mg/L、10 mg/L)及不同浓度的HF(10μmol/L、30μmol/L、50μmol/L、80μmol/L)分别刺激HCAEC,采用MTT法检测细胞活力。将HCAEC随机分为空白对照组、LPS组、HF组和LPS+HF组,分别采用Western blotting和免疫组化法检测HCAEC Cx43蛋白的表达。结果:LPS浓度≥1mg/L时,HCAEC活力显著降低(P<0.05);HF浓度≥50μmol/L时,HCAEC活力显著降低(P<0.05)。与空白对照组相比,LPS组HCAEC Cx43蛋白表达上调(P<0.05),HF组HCAEC Cx43蛋白表达下调(P<0.05);LPS预处理细胞1h后与HF共培养,与LPS组相比,LPS+HF组HCAEC中Cx43的表达下调(P<0.05)。结论:HF能抑制LPS诱导的HCAEC中Cx43蛋白表达的增加,保护内皮间缝隙连接,从而发挥抗动脉粥样硬化的作用。

薏苡附子散对小鼠心肌缺血和血管内皮功能损伤的保护作用及其机制

目的:探讨薏苡附子散对小鼠心肌缺血和血管内皮功能损伤的保护作用,阐明其可能的作用机制。方法:60只雄性SPF级C57BL/6J小鼠,随机分为空白组、假手术组、急性心肌缺血(AMI)组、低剂量薏苡附子散组、中剂量薏苡附子散组和高剂量薏苡附子散组,每组10只;另取40只C57BL/6J小鼠随机分为生理盐水组、低剂量薏苡附子散组、中剂量薏苡附子散组和高剂量薏苡附子散组,每组10只。采用冠脉左前降支(LAD)结扎法建立AMI小鼠模型后进行相应的药物干预处理28 d。采用Western blotting法检测小鼠心肌组织中一氧化氮合酶(eNOS)蛋白表达水平,动脉张力检测法检测各组小鼠离体胸主动脉血管张力和舒张率,总一氧化氮(NO)检测试剂盒检测各组小鼠血清中NO水平,氯化三苯基四氮唑(TTC)染色观察各组小鼠心肌组织缺血面积,HE染色观察各组小鼠心肌组织病理形态表现,观察各组小鼠术后存活率。人冠脉内皮细胞(HCAECs)随机分为空白组、缺氧组、缺氧+低剂量薏苡附子散组、缺氧+中剂量薏苡附子散组和缺氧+高剂量薏苡附子散组,除空白组外,其余各组细胞采用三气培养箱培养24 h建立缺氧模型。Griess实验检测各组HCAECs中NO水平,荧光染色法检测各组HCAECs中线粒体膜电位(MMP)和活性氧(ROS)水平。结果:与建立AMI模型前比较,建立AMI模型后小鼠心电图ST段明显抬高。Western blotting法检测,与空白组比较,注射N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)后假手术组、AMI组和低、中及高剂量薏苡附子散组小鼠心肌组织中eNOS蛋白表达水平降低(P<0.05)。与生理盐水组比较,低、中和高剂量薏苡附子散组小鼠胸主动脉舒张率升高(P<0.05)。与空白组和假手术组比较,AMI组小鼠血清中NO水平降低(P<0.05),高剂量薏苡附子散组小鼠血清中NO水平升高(P<0.05);与AMI组比较,低、中和高剂量薏苡附子散组小鼠血清中NO水平升高(P<0.05)。TTC染色观察,与空白组和假手术组比较,AMI组和低、中及高剂量薏苡附子散组小鼠心肌组织均有不同程度心肌缺血;与AMI组比较,低、中和高剂量薏苡附子散组小鼠心肌组织缺血面积减少,心肌组织缺血面积百分率降低(P<0.05)。HE染色,空白组和假手术组小鼠心肌细胞排列整齐,胞核清晰完整,大小均匀,未见炎性细胞浸润;AMI组小鼠可见明显的心肌组织损伤,心肌细胞排列紊乱、破裂坏死,有炎性细胞浸润;低、中和高剂量薏苡附子散组小鼠可见心肌组织病理性损伤恢复。药物干预第28天,空白组和假手术组小鼠生存率为100%;与AMI组比较,低、中和高剂量薏苡附子散组小鼠生存率升高(χ2=15.03,P=0.0102)。Griess实验检测,与空白组比较,缺氧组和缺氧+低剂量组薏苡附子散组HCAECs中NO水平降低(P<0.05);与缺氧组比较,缺氧+中剂量薏苡附子散组和缺氧+高剂量薏苡附子散组HCAECs中NO水平升高(P<0.05)。荧光染色法检测,与空白组比较,缺氧组、缺氧+低剂量薏苡附子散组和缺氧+中剂量薏苡附子散组HCAECs中MMP水平降低(P<0.05),ROS水平升高(P<0.05);与缺氧组比较,缺氧+中剂量薏苡附子散组和缺氧+高剂量薏苡附子散组HCAECs中MMP水平升高(P<0.05),缺氧+低剂量薏苡附子散组、缺氧+中剂量薏苡附子散组和缺氧+高剂量薏苡附子散组HCAECs中ROS水平降低(P<0.05)。结论:薏苡附子散可通过增强NO生物活性,增加主动脉血管活性,改善心肌缺血病理状态,恢复MMP,减少ROS的生成,改善线粒体及血管内皮细胞功能障碍。

基于荧光差异双向电泳的雷帕霉素损伤人冠状动脉内皮细胞的蛋白质组学研究

目的利用蛋白质组学的方法系统探索洗脱支架药物雷帕霉素损伤人冠状动脉内皮细胞的蛋白质谱的变化。方法雷帕霉素处理人冠状动脉内皮细胞HCAECs,进行荧光差异双向电泳(2D-DIGE)差异表达蛋白的研究分析,MALDI-ToF-ToF质谱对蛋白质进行鉴定。结果共发现差异蛋白斑点85个,其中上调49个,下调36个。MALDI-ToF-ToF质谱鉴定出其中的26种,包括内质网蛋白、线粒体蛋白、分子伴侣、结构蛋白和抗氧化蛋白等。结论通过蛋白质组学方法的研究,探索了雷帕霉素损伤人冠状动脉内皮细胞的一些特定蛋白质变化。

西地那非是一种强有力的前血管源性因子

Vidavalur R等进行了一项实验，研究5-磷酸二酯酶抑制剂西地那非，对人类冠脉内皮细胞血管源性反应的影响。暴露于（1～20）muM西地那非的细胞表现出明显的管状形态发生，并且诱导硫氧还蛋白-1、血红素加氧酶-1和VEGF的产生。西地那非诱导产生VEGF和angiopoietin特异性受体，如KDR、Tie-1和Tie-2。这种血管源性反应可以被血红素加氧酶-1抑制剂（tinprotoporphyrin IX，SnPP）所抑制。1muM浓度以下的西地那非没有血管源性反应，尽管被证实能降低微管形成。西地那非和SnPP一起能抑制VEGF和Angiopoietin-1（Ang—-1）的表达。因此，本实验结果第一次证实西地那非是一种强有力的前血管源性因子。