冬凌草甲素固体脂质纳米粒干预食管癌细胞的增殖

背景:越来越多的研究显示由中药制成的固体脂质纳米粒有抑制癌细胞增殖、诱导细胞凋亡的作用。目的:探讨冬凌草甲素固体脂质纳米粒对食管癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:①0,2.5,5,10,20μmol/L冬凌草甲素固体脂质纳米粒作用于人食管癌Eca-109细胞24,48,72 h后,CCK8检测细胞抑制率,计算IC50;②0,14μmol/L冬凌草甲素固体脂质纳米粒作用人食管癌Eca-109细胞48 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡率;③Western blot检测Cleaved caspase3、β-catenin、C-myc、Cyclin D1蛋白表达;④Wnt/β-catenin信号通路激活剂氯化锂及氯化锂+冬凌草甲素固体脂质纳米粒作用于人食管癌Eca-109细胞48 h后,再检测上述相关指标,对照组细胞不做任何处理。结果与结论:①不同浓度的冬凌草甲素固体脂质纳米粒作用于食管癌细胞24,48,72 h后的细胞抑制率均显著高于0 h时的细胞抑制率,且随着时间延长及浓度增加细胞抑制率增加(P<0.01);②14μmol/L组细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达均显著高于0μmol/L组,β-catenin、C-myc、Cyclin D1蛋白表达均显低于0μmol/L组(P<0.01);③激活剂组及激活剂+冬凌草甲素固体脂质纳米粒组细胞抑制率、凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达均显著高于对照组,β-catenin、C-myc、Cyclin D1蛋白表达均显著低于对照组(P<0.01);④激活剂+冬凌草甲素固体脂质纳米粒组细胞抑制率、凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著低于激活剂组,β-catenin、C-myc、Cyclin D1蛋白表达显著高于激活剂组(P<0.01);⑤结果表明,冬凌草甲素固体脂质纳米粒可抑制人食管癌Eca-109细胞增殖并促进细胞凋亡,其机制与Wnt/β-catenin信号通路的调控有关。

冬凌草甲素抗结核病理损伤的作用机制研究

目的:通过冬凌草甲素对结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)感染巨噬细胞NOD样受体家族蛋白3(NOD-like receptor protein 3,NLRP3)炎症小体及内质网应激的影响,探讨冬凌草甲素抗结核病理损伤的作用机制。方法:利用MTB标准株H37Ra建立小鼠巨噬细胞Raw264.7感染模型,设置空白对照组、MTB感染模型组、冬凌草甲素作用不同浓度(0.5、1.0、2.0、4.0μmol/L)及作用不同时间点(6、12、24 h)干预组。应用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测冬凌草甲素的可用药物浓度。应用蛋白免疫印迹法检测NLRP3、硫氧还蛋白互作蛋白(thioredoxin-interacting protein,TXNIP)表达情况;检测内质网应激相关蛋白免疫球蛋白结合蛋白(Bip)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、真核生物翻译起始因子2α(peIF2α)、磷酸化肌醇需要酶1α(pIRE1α)、肌醇需要酶1α(IRE1α)的表达情况;检测内质网应激下游核因子κB/磷酸化应激活化蛋白激酶/p38(NF-κB/pJNK/pp38)通路的变化,并采用Image J软件做蛋白定量分析。结果:冬凌草甲素在4.0μmol/L浓度以下细胞生存率在90%左右,对细胞毒性较小。在不同时间点(12、24 h),与MTB感染模型组相比,冬凌草甲素可明显降低NLRP3蛋白表达(4.35±0.13 vs.5.95±0.15;1.90±0.05 vs.3.93±0.09),明显降低TXNIP蛋白表达(1.14±0.05 vs.1.73±0.04;0.78±0.05 vs.1.33±0.02),差异均有统计学意义(F值分别为508.308和166.278,P值均为0.000)。在不同时间点(6、12 h),与MTB感染模型组相比,冬凌草甲素可明显降低Bip蛋白表达(1.85±0.07 vs.2.27±0.07;0.97±0.03 vs.2.28±0.17),明显降低peIF2α蛋白表达(1.75±0.42 vs.1.75±0.03;1.31±0.04 vs.2.45±0.17),明显降低IRE1α蛋白表达(10.48±0.40 vs.14.19±0.45;6.15±0.15 vs.15.76±1.27),明显降低pp65蛋白表达(0.69±0.01 vs.1.07±0.03;0.28±0.01 vs.0.39±0.02),差异均有统计学意义(F值分别为149.510、10.489、10.294、288.194,P值均<0.01)。结论:MTB感染小鼠巨噬细胞Raw264.7模型中,冬凌草甲素可通过调控内质网应激,抑制NLRP3炎症小体活化,发挥抗结核病理损伤的作用。

冬凌草对非酒精性脂肪肝大鼠模型的治疗作用

目的探讨冬凌草对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠血清生化指标和肝组织过氧化物酶体增殖剂激活受体(PPAR)α和PPARγ表达的影响。方法采用高脂饲料喂养的SD雄性大鼠构建NAFLD模型,随机分正常组、模型组、多烯磷脂酰胆碱组、冬凌草低、中和高剂量组,每组6只。HE染色观察大鼠肝组织脂肪变性程度;采用全自动生化仪测定生物化学指标;采用硫代巴比妥酸(TBA)法测定丙二醛(MDA)含量;采用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活力;采用分光光度法测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力;提取肝组织采用免疫组织化学和RT-PCR测定各组大鼠肝组织PPARα、PPARγ蛋白和mRNA的表达。结果与模型组比较,冬凌草能降低ALT、AST活性和减少血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-H)的含量,升高高密度脂蛋白(HDL-C)的含量,调节血脂,显著增加肝组织SOD和GSH-Px活性,降低MDA含量(P均<0.05)。与正常组相比,模型组PPARα和PPARγ蛋白表达(6.95±4.45和2.73±1.07)及mRNA(0.36±0.02和0.21±0.02)明显减少(P<0.05),冬凌草低、中和高剂量组与模型组相比,PPARα、PPARγ蛋白及mRNA表达增多,并且呈剂量依赖性(P<0.05)。结论冬凌草对大鼠血清的生化指标和肝组织有良好的改善作用,这可能与其抗氧化、上调PPARα和PPARγ的表达有关。