北冬虫夏草(Cordyceps militaris)单孢菌株配对后对子实体形成的影响与无性型产孢结构关系

由野生子实体分离的低代菌株“ Ｃ．ｍ．Ｈ９５－１”和“ Ｃ．ｍ．Ｈ９７－Ｇ６”的子囊孢子单孢，配对后产生了较大变异，３１％和５０％的配对菌株具有与亲本菌株相同的遗传特性，而且子实体形成能力及生物产量明显增加。配对菌株“ Ｃ．ｍ．Ｈ９７－２６９３”和“ Ｃ．ｍ．Ｈ９７－２６２７”的子囊孢子再配对后，几乎所有的再配对菌株不能回复到亲本菌株的生长型，其子实体的形成能力及生物产量也低于亲本菌株。实验的结果还表明，在ＰＤＡ组合培养基１上，单孢及配对菌株的无性型产孢结构，对子实体形成有着一定的相关性。

北冬虫夏草(Cordyceps militaris)主要菌株的超微结构

对北冬虫夏草主要菌株的超微结构研究表明，子实体形成能力不同的菌株，其体细胞结构和无性繁殖结构没有很大的差别；分生孢子的形成方式为芽生式分生孢子，菌丝体的每个细胞里通常仅含１个单倍体的细胞核。而在有子实体形成能力的野生菌株的有性繁殖结构内．主要是子囊和子囊孢子。它们性过程仅发生在子实体外层的双核细胞里，其子囊孢子的形成方式为细胞游离形成方式。文中选用了４６张显微镜照片并组合为１０个图版，首次系统地介绍了我国北冬虫夏草的超微结构特征。

糖类对冬虫夏草菌Ophiocordyceps sinensis芽生孢子产量及毒力的影响

冬虫夏草(Chinese cordyceps)是食药两用的传统名贵资源。其人工培养需要冬虫夏草菌Ophiocordyceps sinensis的优质芽生孢子。为获得高产量及高感染力芽生孢子,本研究测定不同糖类培养基对冬虫夏草菌芽生孢子产量及毒力(对小金蝠蛾Thitarodes xiaojinensis幼虫的存活率、携菌率和僵虫率)的影响。两个冬虫夏草菌株于含6种糖(葡萄糖、果糖、阿拉伯糖、麦芽糖、蔗糖和海藻糖)的液体培养基中分别培养30 d、45 d和60 d,计数芽生孢子产量并将收集的孢子注射感染两个品系的小金蝠蛾6龄幼虫,置于不同温度下观察幼虫的存活率、携菌率及僵虫率。结果显示:不同糖源培养基中芽生孢子的产量差异显著,其中含麦芽糖培养基中芽生孢子产量最高;注射菌株和幼虫品系对被注射幼虫的存活率无显著差异;不同糖源培养基获得的芽生孢子对蝠蛾幼虫的存活率无显著差异,对携菌率和僵虫率产生影响;以含麦芽糖为糖源的培养基、芽生孢子培养时间显著影响被注射幼虫的存活率与僵虫率,其中培养30 d的冬虫夏草菌所注射的幼虫的存活率、僵虫率显著高于60 d的;温度也显著影响被注射幼虫的存活率、僵虫率,10℃的幼虫存活率和僵虫率显著高于14℃、18℃的。研究结果为培养优质冬虫夏草芽生孢子,提高被侵染蝙蝠蛾幼虫僵虫率提供了参考。

冬虫夏草菌菌丝体中的氨基酸及其衍生物的代谢组学分析

为探究冬虫夏草菌(Ophiocordyceps sinensis)菌丝体氨基酸及其衍生物的差异性,采用超高效液相色谱串联质谱(Ultra performance liquid chromatography,tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)技术对3株冬虫夏草菌(玉树菌株XSH、达日菌株DR、贵德菌株LJ)菌丝体的氨基酸及其衍生物进行靶向定量检测,利用主成分分析(Principal component analysis,PCA)和正交偏最小二乘判别分析(Orthogonal signal correction and partial least squares-discriminant analysis,OPLS-DA)考察样品分类情况、筛选差异代谢物。结果表明,3株菌株菌丝体中均检测到72种氨基酸及其衍生物,发现除组氨酸外可合成蛋白质的19种氨基酸,菌株XSH的总氨基酸及必需氨基酸绝对含量均高于其他菌株。菌株XSH相比菌株DR和菌株LJ分别含有29种和28种差异氨基酸及其衍生物,菌株DR相比菌株LJ含有10种差异氨基酸及其衍生物,此外,3株菌株菌丝体含有3个共有的差异氨基酸及其衍生物,分别为高精氨酸、N-乙酰-L-谷氨酰胺、肌氨酸。京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析显示,差异氨基酸及其衍生物在精氨酸和脯氨酸代谢通路中更活跃,不同产区冬虫夏草菌株的氨基酸含量可能受精氨酸和脯氨酸代谢通路的影响。基于研究结果发现不同产区的冬虫夏草菌株的氨基酸及其衍生物存在较大的差异。

继代培养对冬虫夏草菌品质及抗氧化活性的影响

为探究继代培养对冬虫夏草菌品质及抗氧化活性的影响,对冬虫夏草CS17菌株进行继代培养,并测定其在不同继代培养过程中菌丝生物量、核苷类物质组成及含量、抗氧化活性的变化差异。结果表明:冬虫夏草CS17菌株连续培养6代所得菌丝生物量为0.47~0.79 g,在第3代积累量最高,为0.79 g;冬虫夏草CS17菌株连续培养6代所得菌丝体中腺苷、肌苷、鸟苷、胞苷、尿苷总含量为1.005~6.516 mg/g,在第2代样品积累量最高,为6.516 mg/g。不同继代培养代数培养过程中,冬虫夏草菌丝体DPPH自由基、ABTS+自由基清除能力及总还原力均表现为先上升后下降趋势,第2代样品DPPH自由基、ABTS+自由基清除能力及总还原力最强,第3代至第6代逐渐降低。冬虫夏草CS17菌株连续培养6代所得菌丝体中,菌丝生物量在第3代达到最高,5种核苷类总含量在第2代样品中积累量最高,抗氧化活性在第2代样品中表现较好。

冬虫夏草菌对砷耐受和富集特性的研究

本研究旨在探讨冬虫夏草菌对砷(As)的耐受性及富集特性,为评估和解决冬虫夏草含As量的安全性问题提供参考依据。以冬虫夏草菌为试验材料,将不同浓度的As添加到固液培养基中培养一段时间后,检测冬虫夏草菌生长特性及As富集特性相关指标,同时应用Logistic回归法构建As富集回归模型。结果表明:低浓度(1~2 mg/L)As对冬虫夏草菌落、菌丝形态、菌丝生长速度及干重几乎没有影响,而高浓度(高于3 mg/L)As会严重影响菌落形态及菌丝的生长。随着不同As浓度处理时间的延长,液体培养基中As含量呈持续下降的趋势,而菌丝体中As含量呈持续增加的趋势,富集系数呈现出持续降低的趋势,富集系数浮动区间为43.92%~128.22%,这说明冬虫夏草菌以主动吸收的方式富集低浓度的As。不同浓度As处理冬虫夏草菌40 d后,菌丝对As的富集均达到稳定状态。Logistic回归模型结果显示,冬虫夏草菌对As的富集饱和点为1.68 mg/kg DW。冬虫夏草能够主动吸收低浓度的As,其富集饱和点为1.68 mg/kg DW。

冬虫夏草菌株发酵槐花香料的制备及其卷烟加香应用研究

为开发新型天然槐花香料,以槐花为底物,接种冬虫夏草菌株SCT-1后进行发酵,通过因子筛选试验优化发酵培养基配方,将最优条件下所得香料进行嗅香评价、卷烟加香感官评吸和挥发性致香成分分析。结果表明:发酵培养基最优配方为槐花粉100 g/L、玉米粉2 g/L、麸皮2 g/L和蔗糖2 g/L,该配方下所得香料以坚果香为主,奶香、青香为辅,由其制得的卷烟坚果香气、甜味和烟气细腻感增加,刺激性降低;挥发性致香成分苯乙烯、(2Z)-2-辛烯-1-醇、萘、苯并噻唑和甲基丁香酚对该香料香气具有贡献,(E)-2-庚烯醛、苯甲醛、芳樟醇、松油烯-4-醇和α-松油醇对该香料香气具有显著贡献。

一株河鲈源致病性虫草菌Cordyceps confragosa CHL02菌株的全基因组测序及比较基因组分析

致病性虫草菌Cordyceps confragosa CHL02菌株是从患病河鲈(Perca fluviavilis)鱼体分离鉴定的一株昆虫致病菌,其无性阶段蜡蚧轮枝菌(Lecanicillium lecanii)广泛用于农业中昆虫防治。本研究基于Illumina PE150测序平台进行CHL02菌株的全基因组测序,对测序数据进行组装和组分分析,进行基因预测与功能注释,预测次级代谢产物合成基因簇,并进行病原宿主互作以及比较基因组分析。测序结果显示,CHL02基因组大小为36.17 Mb,GC含量为53.09%;预测包含8093个编码基因、1618个转座因子(TEs)、4572个串联重复序列及114个t RNA;共注释7724个基因,其中,1985个基因获得KOG注释,GO聚类分析中,2687个基因参与代谢过程,预测到22个次级代谢产物合成基因簇,1162个基因参与病原宿主互作机制中。基因聚类分析和系统发育树均显示,CHL02菌株与参考菌株昆虫源粗糙虫草菌(C.confragosa)RCEF 1005具有较高的同源性。本研究首次报道了河鲈源致病性虫草菌C.confragosa CHL02菌株的全基因组序列并分析其基本特征,与参考菌株进行比较基因组分析,为后续深入开展该病菌侵染河鲈的作用机制等相关研究奠定理论基础。

冬虫夏草液态发酵菌丝体中化学成分分析

对冬虫夏草(Cordyceps sinensis)液态发酵菌丝体的主要化学成分进行了分析。冬虫夏草液体发酵菌丝体中粗蛋白和粗脂肪的含量分别为24.53%和6.69%;腺苷含量为0.3755mg/g,D-甘露醇含量为88.80mg/g,胞内多糖含量为133.9mg/g,麦角甾醇含量为1.80mg/g。冬虫夏草液态发酵菌丝体主要成分含量与天然虫草相似。

冬虫夏草与青海冬虫夏草菌的药理比较(Ⅰ)

比较了冬虫夏草与人工发酵培养的青海冬虫夏草菌的药理作用。证明二者均有镇静、抗炎、激素样作用、降低血清胆固醇、提高血糖、扩张离体气管、兴奋离体回肠等作用;而无抗缺氧、抗疲劳、耐高温低温能力以及解毒保肝作用。毒性近似。

冬虫夏草菌世代交替的初步研究

研究了冬虫夏草菌寄主蝠蛾幼虫的昆虫病理。观察了冬虫夏草菌对蝠蛾幼虫的侵染，虫菌体在幼虫体内血淋巴中的生长繁殖及分化。冬虫夏草子座的成熟及子囊孢子的弹射与萌发。

人工冬虫夏草菌液对大鼠肺纤维化早期抗氧化作用的研究

目的探讨人工冬虫夏草菌液(虫草菌液)对博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化早期抗氧化的作用。方法 48只SD大鼠,随机分为6组:正常对照组,模型组,强的松治疗组,虫草菌液低剂量[1.5 g/(kg.d)]、中剂量[5 g/(kg.d)]、高剂量[10 g/(kg.d)]治疗组。采用气管内注射博莱霉素建立模型,次日起分别给予生理盐水、生理盐水、强的松、虫草菌液(低、中、高剂量)灌胃治疗,第14天处死动物,肺组织标本进行病理形态学观察及肺泡炎评分,肺组织免疫组化检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS),肺泡灌洗液(BALF)检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量。结果虫草菌液和强的松能够减轻肺组织肺泡炎,降低BLAF中TNF-α、MDA含量,提高GSH、SOD含量,下调肺组织iNOS蛋白表达水平。结论虫草菌液对博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化早期肺泡炎有治疗作用,可能是通过下调TNF-α、iNOS等细胞因子的表达、减少脂质过氧化物的释放而达到抗氧化作用。

冬虫夏草与青海冬虫夏草菌的药理研究——Ⅱ.对免疫功能的影响

冬虫夏草与青海冬虫夏草菌经免疫药理实验表明:两者均有提高机体单核巨噬细胞系统吞噬功能的作用;对体液免疫有调节作用,可提高氢化可的松所致免疫抑制状态小鼠的血清溶血素及脾细胞免疫溶血活性,而对正常小鼠的体液免疫功能无影响;对T淋巴细胞转化有促进作用,对DNCB所致小鼠迟发型超敏反应有抑制作用。

发酵冬虫夏草菌粉水分腺苷的近红外光谱定量分析及波段选择

研究发现基于800～2 500nm波段的近红外光谱可对发酵冬虫夏草菌粉中水分和腺苷进行良好的定量分析。选取了4 277.63～4 316.20cm-1,4 887.06～4 941.07cm-1,5 056.78～5 172.50cm-1和5 218.78～5 303.64cm-1四个特征波段;4 902.49～4 817.64cm-1和4 740.49～4 107.91cm-1两个特征波段,分别对水分和腺苷建立了偏最小二乘法(partial least-square,PLS)回归模型。采用全波段建模水分和腺苷的预测相关系数r分别为0.868 3和0.788 2,预测均方根误差RMSEP分别为0.001 999和0.000 134,剩余预测偏差RPD分别为1.974 4和1.640 7。而采用特征波段建模,其对水分和腺苷的预测相关系数r分别为0.869 1和0.829 0,预测均方根误差分别为0.001 934和0.001 250,剩余预测偏差分别为2.040 7和1.847 6。结果表明,采用对这两项指标特征波长建模后,不仅预测效果有不同程度的提高,还提高了建模速度,为检测仪器的开发提供了依据。

HPLC法测定冬虫夏草菌丝体及发酵液中核苷类成分

以百令胶囊及野生冬虫夏草作为对照品,优化了HPLC法测定冬虫夏草菌F4539指纹图谱的色谱条件,并计算其中4种核苷成分的含量。结果表明:采用YMC-Pack Pro C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,甲醇∶水(20∶80,体积比)为流动相,流速0.6 m L/min,检测波长为260 nm时,待测样品得到较好的基线分离;冬虫夏草菌F4539发酵菌丝体及发酵液中含有与野生冬虫夏草及百令胶囊相同的有效成分;4种核苷物质在2、4、6、8、10 mg/L的浓度梯度下,线性关系良好;通过定量计算,冬虫夏草菌F4539菌丝体及发酵液中的腺苷含量分别为0.094 mg/g和2.53 mg/g,百令胶囊中腺苷含量为1.45 mg/g。本研究对于冬虫夏草F4539的功效评价、发酵后处理及产业化开发提供了重要技术参数。

冬虫夏草菌在寄主钩蝠蛾幼虫中的潜伏侵染过程研究

冬虫夏草是青藏高原的特色名贵药材,是冬虫夏草菌Ophiocordyceps sinensis寄生于钩蝠蛾幼虫后形成的虫生子囊真菌,其发生机理和侵染途径至今未知。本文利用real-time q PCR实时定量技术检测了寄主蒲氏钩蝠蛾Thitarodes pui幼虫表皮、脂肪体、血淋巴和肠壁等组织中冬虫夏草菌定殖量,分别建立了起始于表皮的侵染路径(R20.678)和起始于肠道的侵染路径(R20.271)两种Holt数学模型,经比较分析后,推论冬虫夏草菌随口腔摄食侵染寄主幼虫的方式具有一定合理性和可行性,揭示冬虫夏草菌可以通过进食途径实现其对钩蝠蛾幼虫的带菌生长、侵染和寄生,从而为深入阐释冬虫夏草菌与寄主钩蝠蛾幼虫相互作用关系提供重要参考。

冬虫夏草头孢菌菌丝体液体发酵条件研究

通过对冬虫夏草头孢菌（Ｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒｉｕｍｄｏｎｇｃｈｏｎｇｘｉａｃａｅ）改良菌株Ａ１０的菌丝体液体发酵条件的研究，我们掌握了其菌丝生长规律。其生长曲线呈典型的微生物生长曲线特点；其发酵生长适宜温度为２６～２８℃，适宜ｐＨ值在５－７之间，接种量以５％（ｖ／ｖ）为佳；在整个发酵过程中，对发酵通气量要求不高。

北冬虫夏草液体菌种制备工艺研究

以培养液营养成分的不同溶解状态、不同口径及培养容器、不同装液量、不同接种量、不同震荡频率等为研究对象,探索北冬虫夏草液体菌种制备适宜工艺参数。结果表明:培养液中各营养成分呈溶液或均匀分布状态、培养瓶壁倾斜、装液量小于1/2、接种量0.5%、多个接种单位、震荡频率120 r/min最佳。

冬虫夏草菌丝状菌源增殖培养的研究

冬虫夏草菌是珍稀濒危名贵中药材冬虫夏草的无性型菌种,是侵染蝠蛾幼虫的唯一菌种,其侵染后形成名贵中药材冬虫夏草。冬虫夏草菌在不同营养及条件下生长形态不同,主要有丝状体和菌球体两种生长形态。冬虫夏草菌丝状菌体能够侵染蝠蛾幼虫,有可能作为一种新的接种体被广泛应用;但丝状菌体对营养要求苛刻、生长缓慢、菌丝体得率低的特点,阻碍了冬虫夏草菌丝状菌体作为侵染蝠蛾幼虫的接种体的开发及应用,从而阻碍了冬虫夏草人工培殖产业化的进程。为了提高冬虫夏草菌丝状菌体的生物表达量,本文对营养及培养条件进行了优化研究,得出了最佳条件为:葡萄糖质量浓度40 g/L、酵母粉质量浓度65 g/L、培养温度17℃、MgSO_4质量浓度3 g/L、KH_2PO_4质量浓度1.5 g/L、培养时间12 d,按最优培养条件,冬虫夏草菌丝状菌体干重得率15.67 g/L,为下一步新的接种体的制备提供菌源保障。

冬虫夏草菌寄主小金蝠蛾人工饲养成虫生物学特性

小金蝠蛾是冬虫夏草菌的优良寄主之一,人工培育成虫能否正常交尾及产卵直接关系到种源的持续利用,是目前冬虫夏草人工培育产业的制约因子之一。本文通过对人工饲养小金蝠蛾两个世代(R1、R2)成虫的形态、羽化、交尾、产卵、寿命等生物学特征与其野生亲本进行比较,研究人工培育条件下小金蝠蛾成虫的交尾、产卵能力,为人工培育种源及种群的可持续利用提供依据。研究结果表明,人工饲养条件下小金蝠蛾成虫的平均体长、体重、含卵量、产卵量、寿命均为野生亲本>R1>R2,但在羽化、交尾、产卵等行为上野生亲本与R1、R2不存在明显差异;人工饲养两个世代幼虫的种群增长率分别为177.27%和117.56%,表明人工饲养条件下小金蝠蛾种群可实现持续利用。