人工培养冬虫夏草菌丝的毒性及其抗疲劳、降血脂作用的研究

[目的]研究人工培养冬虫夏草菌丝的毒性及其有无抗疲劳、降血脂的作用,为寻找天然冬虫夏草替代品提供科学依据。[方法]急性毒性试验、30d喂养试验,均用GB15193.1-2003中规定方法;抗疲劳作用用小鼠负重游泳试验;降血脂作用用辅助降血脂试验法:先建立高血脂动物模型,再给予动物受试样品,按期称体重,30d后检测血清中血清总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇含量。[结果]游泳试验:高、中剂量组与对照组相比P﹤0.05、天然冬虫夏草组与正常对照组相比有统计学意义(P﹤0.01)。小鼠游泳耐力天然冬虫夏草组﹥人工培养冬虫夏草菌丝组﹥正常对照组;降血脂试验:大鼠血清总胆固醇(TC)测定为阳性,甘油三酯(TG)测定为阳性,血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)为阴性。人工培养冬虫夏草菌丝无毒,并有一定的降低γ-GT、胆固醇及抗疲劳、降血脂的作用。[结论]人工培养冬虫夏草菌丝可以作为一种天然冬虫夏草替代品来开发利用。

冬虫夏草菌丝提取物降低二甲基亚硝胺大鼠肝硬化门静脉高压效应的组织学基础

目的:探讨冬虫夏草菌丝提取物(Cordyceps myceliaextract,CME)对二甲基亚硝胺(di methylnitrosamine,DMN)大鼠肝硬化门静脉高压的防治效应及其作用机制。方法:50只Wistar大鼠采用10μg/kg DMN腹腔注射持续4周的方法制备大鼠肝硬化模型,并取15只大鼠作为正常对照组。造模即日起CME预防组大鼠(n=15)予0.74g/(kg.d)CME灌胃(按冬虫夏草菌丝生药质量计算),1次/d,预防用药持续4周;CME治疗组大鼠(n=10)于造模成功后开始给药,用药4周。分别于造模后3d、2周、4周和造膜终止后2周、4周进行动态效应观察,肠系膜前静脉分支插管法检测门静脉压力(pressure of portal vein,Ppv);放射免疫法测定血清透明质酸(hyaluronic acid,HA)含量,免疫组织化学法检测肝窦壁CD44、第Ⅷ因子相关抗原血管假性血友病因子(von Willebrand factor,v WF)、α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)、层黏连蛋白(laminin,LM)、Ⅳ型胶原(collagen typeⅣ,ColⅣ)和Ⅰ型胶原(collagen typeⅠ,ColⅠ)表达。结果:预防用药4周后,与模型组比较,CME组大鼠门静脉管径显著缩小,门静脉压力显著降低(P<0.05),血清HA含量显著下降(P<0.05),v WF、α-SMA、ColⅣ、LM、ColⅠ染色减弱(P<0.05),CD44染色增强(P<0.05)。治疗用药2周时,与模型组比较,CME组大鼠门静脉直径显著缩小,门静脉压力显著降低(P<0.05),血清HA含量显著下降(P<0.05)。治疗用药4周时CME组大鼠门静脉管径与门静脉压力恢复至同期正常对照组大鼠水平。治疗用药2、4周时,与模型组比较,CME组大鼠肝窦壁CD44染色面积增加(P<0.05),LM、α-SMA、v WF和ColⅠ染色减弱(P<0.05),肝窦壁ColⅣ染色无显著变化。结论:CME对DMN致大鼠肝硬化门静脉高压具有良好的干预和治疗作用。CME抗肝窦壁损伤、保护肝窦内皮细胞、抑制肝星状细胞活化,抑制肝窦毛细血管化形成与促进其逆转是其效应的组织学基础。

冬虫夏草菌丝体改善肺免疫功能的研究

本文主要对冬虫夏草菌丝体改善肺部免疫功能进行研究。以Wistar大鼠为研究对象,将大鼠分为空白对照组、低剂量组(1.42g/kg.bw)和高剂量组(2.83g/kg.bw)。连续灌胃冬虫夏草菌丝体28d后,与空白对照组相比,低、高剂量组的肺巨噬细胞吞噬率分别提高54.9% (P<0.05)和79.0% (P<0.01);吞噬指数分别提高52.2%(P<0.05)和93.8%(P<0.01);肺巨噬细胞内酸性磷酸酶(ACPase)活性分别提高80.8% (P<0.05),96.6% (P<0.05),精氨酸酶(Arginase)活性分别提高94.0% (P<0.05)和44.8%(P<0.05)。本文还以昆明种小鼠为研究对象对冬虫夏草菌丝体的全身非特异性免疫功能进行研究。将小鼠分为空白对照组、低剂量组(2.83g/kg.bw)和高剂量组(5.66g/kg.bw)。与空白对照组相比,低、高剂量组的腹腔巨噬细胞吞噬率分别提高21.9% (P<0.05)和52.4%(P<0.001);腹腔巨噬细胞吞噬指数分别提高29.6%(P<0.001)和60.1%(P<0.001);小鼠廓清指数分别提高10.6%(P<0.05)和15.5% (P<0.05),碳廓清吞噬指数分别提高了8.2%(P>0.05)和10.5%(P<0.01)。结果提示:冬虫夏草菌丝体具有提高肺巨噬细胞及全身非特异性免疫的功能。

冬虫夏草菌丝体提取物通过抑制炎性因子及Treg细胞功能缓解肺纤维化

目的:观察冬虫夏草菌丝体(Hirsutella sinensis mycelium,HSM)提取物对盲肠穿孔结扎(CLP)小鼠的炎症反应和肺纤维化程度的影响。方法:建立CLP诱导脓毒症5 d和10 d小鼠模型,分别分为假术组(sham,n=5)、模型组(CLP,n=11)、治疗组(HSM,n=11)。冬虫夏草菌丝体组在术前2 h和术后给予HSM提取物200 mg/(kg·d)(低于人体用量0.27 g/kg),假术组和模型组给予等量的生理盐水。利用Q-PCR检测了肺组织中炎性因子TNF-α和IL-1β及纤维化因子TGF-β1、TIMP1和MMP9的表达;利用流式细胞术分析了小鼠外周血和脾脏中Th1细胞以及脾脏组织中Treg细胞的数量;另外,还对肺组织切片进行了HE染色以及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和纤连蛋白(fibronection)免疫组化染色。结果:模型组外周血和脾脏中Th1细胞以及脾脏组织中Treg细胞的数量较假术组显著降低,而HSM提取物治疗能上调上述细胞的数量。5 d时,模型组肺组织中IL-1β及纤维化因子TGF-β1、MMP9和TIMP1表达显著上调,到第10天时有所降低但仍高于sham组,而治疗组上述因子表达明显降低;各组肺组织TNF-α表达无显著差异;HE染色显示模型组肺部炎性样变明显,到第10天时炎性样变比5 d时减轻,而治疗组均有改善;免疫组化显示与假术组比,模型组肺内间质α-SMA和fibronection表达明显增多,而治疗组肺内间质表达低于模型组。结论:HSM提取物具有抑制炎症、平衡免疫及缓解肺纤维化的功能。

冬虫夏草菌丝体的抗疲劳作用研究

目的研究冬虫夏草菌丝体的抗疲劳作用。方法采用雄性ICR小鼠每天灌胃给予冬虫夏草菌丝体,剂量分别为125,250,750 mg/kg,30 d后测定负重游泳时间、运动后血乳酸、肝糖原和尿素氮含量。结果冬虫夏草菌丝体能显著延长小鼠负重游泳时间(P<0.05),增加小鼠肝糖原储备量(P<0.01),降低运动后小鼠血乳酸含量(P<0.01)。结论冬虫夏草菌丝体具有抗疲劳作用。

冬虫夏草菌丝体提取物调控免疫改善肾纤维化的实验研究

目的:观察冬虫夏草菌丝体(Hirsutella sinensis mycelium,HSM)提取物对盲肠穿孔结扎(CLP)小鼠的免疫反应和肾纤维化程度的影响。方法:建立CLP诱导脓毒症小鼠模型,分为假术组(sham,n=5)、模型组(CLP,n=11)、治疗组(HSM,n=11)。冬虫夏草菌丝体组在术前2小时和术后10天给予HSM提取物200 mg/(kg·d),假术组和模型组给予等量的生理盐水。利用流式细胞术分析了小鼠外周血中巨噬细胞、中性粒细胞和Treg细胞数量以及腹水中巨噬细胞数量;利用QPCR检测了肾脏组织中炎性因子TNF-α和IL-1β及纤维化因子TGF-β1、TIMP1和MMP9的表达;另外,还对肾脏组织切片进行了HE染色以及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和纤连蛋白(fibronection)免疫组化染色。结果:模型组外周血中巨噬细胞、中性粒细胞和腹水中巨噬细胞数量较假术组显著升高,而HSM提取物治疗能下降上述细胞的数量;与正常组相比,模型组和治疗组外周血中Treg细胞数量均无明显差异;模型组肾脏组织中炎性因子TNF-α和IL-1β及纤维化因子TGF-β1、TIMP1和MMP9表达均上调,而治疗组肾脏上述细胞因子表达都有显著降低;HE染色显示模型组肾脏组织炎性样变明显,而治疗组有较好改善;与假术组比,模型组肾小管及间质α-SMA和fibronection表达明显增多,而治疗组肾小管及间质表达低于模型组。结论:HSM提取物具有调控免疫及改善肾纤维化的功能。

不同培养条件对冬虫夏草菌丝体甘露醇的影响

目的:探讨不同培养条件对冬虫夏草菌丝重量和甘露醇含量的影响。方法:甘露醇的测定采用比色方法,菌丝干燥后直接称重。结果对于菌丝的产量,摇菌时间不应超过16d,最佳氮源为硝酸铵。对培养液和菌丝中甘露醇的总量,摇菌时间不应超过8d,最佳氮源为氯化铵。结论:氮源和摇菌时间不同,对冬虫夏草菌的菌丝重量和甘露醇含量有影响。

天然冬虫夏草 冬虫夏草菌丝及发酵液游离氨基酸的种类及含量测定

目的对天然冬虫夏草、冬虫夏草菌丝及发酵液样品进行24种游离氨基酸的分析;进一步了解三者游离氨基酸的种类和含量,为它们的应用研究提供可用的信息及参考。方法采用安捷伦1200 HPLC,C18反相柱梯度分离,邻苯二甲醛-芴甲酯(OPA-FMOC)柱前自动衍生化,利用已知浓度氨基酸标准品进行外标法定量,根据已知浓度氨基酸标准品的峰面积与样品峰面积之比计算出游离氨基酸的含量。结果分析结果表明在24种游离氨基酸的测定中,天然冬虫夏草含有19种,冬虫夏草菌丝含22种,发酵液含23种,三者所缺少的游离氨基酸种类互不相同。三者游离氨基酸的含量有着明显差别和变化,其原因是由于天然冬虫夏草是在野外天然生长,冬虫夏草菌丝和发酵液是人工发酵培养,处于不同的温度和环境条件的原故。结论天然冬虫夏草,冬虫夏草菌丝及发酵液的游离氨基酸的种类和含量并不等同,建议临床配合使用。

冬虫夏草菌丝体水提物抗氧化和保护氧化损伤活性研究

[目的]研究冬虫夏草(Cordyceps sinesis)菌丝体热水提物(CS-HWE)抗氧化活性及体外氧化损伤保护作用。[方法]采用铁离子还原法(FRAP)和H2O2氧化损伤的PC12细胞模型对CS-HWE抗氧化活性及对氧化损伤保护活性分别进行了测定。[结果]样品抗氧化活性为(158.03±5.39)μmolFe2+·g-1,相当于天然虫草提取物活性的75%。CS-HWE在50￣100mg·L-1时可明显提高PC12细胞对H2O2氧化损伤的保护作用,活性与天然虫草提取物相当。[结论]虫草菌丝体热水提物具有一定的抗氧化作用,可作为开发天然抗氧化药物的潜在资源。

冬虫夏草菌丝多糖分离提取特性研究

研究以冬虫夏草菌丝体为原料分离提取冬虫夏草多糖的最佳条件和生产工艺。结果证明 :冬虫夏草多糖的最佳提取条件是 :原料粒度为 30 0目 ,菌粉和水分的比例为 1∶2 .5 ,浸提时间为 2 4h ,pH值为7.5～ 8.0。研究结果为冬虫夏草多糖特性分析和临床检测提供了基本理论数据。

冬虫夏草菌丝体水提物的抗新城疫病毒作用

通过低温水浸提取方法,获取冬虫夏草菌丝体水提物。采用MTT的方法和观察细胞病变(CPE)的方法分别研究了水提物毒性和抗病毒作用。结果显示水提物浓度≤0.5mg/mL时,对Vero细胞无毒性,0.5mg/mL水提物与新城疫病毒作用,或预处理Vero细胞,均能抑制新城疫病毒在细胞上病变的形成。提示水提物具有直接抗新城疫病毒和预防新城疫病毒感染的作用。

冬虫夏草菌丝体发酵大豆多肽的研究

[目的]考察冬虫夏草菌丝体发酵大豆蛋白的情况。[方法]采用冬虫夏草菌丝体发酵大豆生产大豆多肽,对不同时间发酵液的pH值、游离-NH2含量、大豆多肽含量等进行检测。[结果]发酵液的pH值随发酵时间的延长呈下降趋势,发酵72 h时pH值达到稳定状态;游离-NH2的含量随发酵时间的延长呈增加趋势,发酵60 h时游离-NH2含量最高,为0.437 0 mg/100 ml;大豆多肽含量随发酵时间的延长呈先升后降趋势;发酵60 h时大豆多肽含量最高,为4.958 mg/100 ml。[结论]冬虫夏草菌丝体发酵大豆生产大豆多肽的最佳时间为60 h。

冬虫夏草菌丝体水提液对SP2/0细胞周期的作用

用四唑篮比色法试验,琼脂糖凝胶电泳方法及流式细胞仪研究了冬虫夏草菌丝体水提液对小鼠骨髓瘤细胞生长、凋亡及细胞周期的影响。结果发现浓度为100mg/ml水提液抑制瘤细胞的增殖,抑制率为70%,使细胞周期阻滞,在DNA电泳出现明显凋亡带,这提示水提液对瘤细胞抑制作用可能是由于细胞周期阻滞诱导细胞凋亡的结果。

冬虫夏草菌丝体干粉制剂在肾移植后的疗效观察

目的:观察冬虫夏草菌丝体干粉制剂在肾移植后的疗效,并探讨其作用机制。方法:100例肾移植6个月内的患者,按是否应用冬虫夏草菌丝体干粉制剂分为对照组和治疗组,每组各50例,分析肺部感染的发生率和外周血T细胞亚群的变化。结果:治疗组肺部感染发生7例(14%),其中重症肺炎2例,发生率为4%。对照组肺部感染发生16例(38%),其中重症肺炎5例,发生率为10%。但两组感染发生率差异无统计学意义(P>0.05)。对照组CD4^+、CD4^+/CD8^+均明显低于治疗组,CD8^+则高于治疗组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:应用免疫抑制药的基础上加用冬虫夏草菌丝体干粉制剂可减少肺部感染发生率,并且可调节T细胞亚群,提高机体细胞免疫功能,增强抗感染能力。

冬虫夏草菌丝体对小鼠体液免疫的影响

本文采用血清溶血素测定新方法,对兰州三爱堂解放军第一医院人工发酵培养的冬虫夏草菌丝体进行实验分析。结果表明,对正常小鼠的体液免疫功能无影响,但对由环磷酰胺引起的体液免疫功能低下有明显的恢复,说明该菌丝体与天然虫草有一致的功能。

冬虫夏草菌丝的实验研究

１９８４年从四川省文川县采集的新鲜冬虫夏草上，分离得一新种，经中科院微生物所陈庆涛先生鉴定为被孢霉属的一种，并且进行了培养基配比，ｐＨ值及培养温度的试验研究。

冬虫夏草菌丝体提取物抑制顺铂诱导的肾小管上皮细胞损伤

目的:探讨冬虫夏草菌丝体(Hirsutella sinensis mycelium,HSM)提取物对顺铂(CDDP)诱导的小鼠肾小管上皮细胞(RTEC)损伤的影响及可能的调控机制。方法:体外实验分5组:正常对照组、顺铂诱导的损伤模型组及低、中、高剂量的HSM干预组。RTEC经HSM预处理2 h后加CDDP刺激,24 h后收取细胞,分别采用Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡、Real-time PCR检测凋亡相关基因、炎性因子及模式识别受体的相对表达量。体内实验分3组:对照组、CDDP诱导的小鼠急性肾损伤模型组及HSM治疗组,分别取肾组织进行HE染色及提取RNA和相关基因mRNA水平的检测。结果:HSM预处理可缓解CDDP诱导的凋亡,促进抗凋亡基因Bcl-2的表达,并抑制BAX与Caspase-9;同时降低TNF-α和TLR4的表达。体内实验则显示HSM可有效缓解CDDP诱导的小鼠肾小管损伤。结论:HSM可以降低RTEC凋亡、减轻炎症以改善CDDP诱导的RTEC损伤。

冬虫夏草菌丝体发酵液中多糖的分离纯化与含量测定

[目的]从冬虫夏草菌丝体发酵液中提取,分离虫草多糖,并建立样品中多糖的含量测定方法。[方法]采用D101大孔树脂分离冬虫夏草菌丝体发酵液中的多糖;采用苯酚-硫酸法测定样品中多糖含量。[结果]虫草多糖的得率为14·2g/L;样品中虫草多糖的含量为70·6%。[结论]方法简便,准确,重现性好,可用于冬虫夏草菌丝体发酵液中虫草多糖的提取纯化和含量测定。

冬虫夏草菌丝体多酚提取及对3种癌细胞抑制作用研究

以冬虫夏草的菌丝体为原料,提取溶剂为乙醇,采用Folin-Ciocalteu法测定冬虫夏草菌丝体中多酚的含量,目的在于研究乙醇浓度、料液比、提取温度和提取时间对多酚提取率的影响。以单因素试验为前提,以正交试验来指导优化提取参数,测定了所得多酚含量及其对Caco-2结肠癌细胞、Hep G-2肝癌细胞、MCF-7乳腺癌细胞的抑制作用。研究结果表明,在冬虫夏草菌丝体的提取工艺中,最佳的提取工艺条件为:温度为70℃,提取时间60 min,乙醇的浓度70%,料液比(g∶mL)1∶35;冬虫夏草菌丝体中提取的粗多酚对试验中3种癌细胞都表现出一定的抑制作用,当菌丝体粗多酚的浓度为100μg·mL^(-1)时,对3种癌细胞抑制率达到最高,分别为72.12%(Caco-2结肠癌细胞)、83.67%(HepG-2肝癌细胞)和58.78%(MCF-7乳腺癌细胞)。