冬虫夏草(Cordyceps sinensis)的随机扩增多态DNA及其遗传分化

本文对来自青藏高原3个区域5个具有代表性地方的13个冬虫夏草(Cordyceps sinensis[Berk.] Sacc.)样本进行随机扩增多态DNA(RAPD)分析。19个随机引物获得的RAPD谱带清晰并呈现多态,单个引物获得的RAPD片段数在3～10个之间。该19个引物在每个样本中扩增的RAPD片段总数平均约为65个。基于遗传距离分析,受试的13个冬虫夏草样本中,来自同一地方的样本间遗传差异甚微,同一区域不同地方的样本间遗传差异较大,不同区域的样本间遗传差异最大。这说明冬虫夏草地理群体间存在着遗传分化。应用UPGMA和NJ方法构建的分子系统树显示,来自5个地方的冬虫夏草实际上可以归并为显著不同的3个组,对应于样本来源的3个区域,提示RAPD标记在冬虫夏草群体中有显著的地区特异性。我们的结果还表明,冬虫夏草地理群体间的遗传差异度与地理距离呈正相关。因此,RAPD作为有效的遗传标记,可用于研究冬虫夏草的遗传多样性、起源以及系统演化等。

北冬虫夏草(Cordyceps militaris)的研究应用概况(综述)

主要综述了近二十年来国内外对北冬虫夏草的研究应用概况，详细地介绍了北冬虫夏草及其代谢物质“虫草素”的来源，及在功能、药化、药理、临床应用方面的研究进展，北冬虫夏草的生物学特性和工厂化生产研究情况，以及影响北冬虫夏草人工高产栽培与工厂化生产的关键问题，同时也展示了北冬虫夏草的开发利用前景。

冬虫夏草(Cordyceps sinensis)菌丝体固体发酵粉化学成分的分析

本研究对一种冬虫夏草(Cordycepssinensis)菌丝体固体发酵粉的化学成份进行了分析,包括粗成份,生物活性成份,脂肪酸,氨基酸,金属元素等。冬虫夏草菌丝体固体发酵粉中3′-脱氧腺苷含量40.81μg/g、腺苷含量745.4μg/g;甘露醇的含量为165.8mg/g,多糖含量为157.3mg/g;谷氨酸,天门冬氨酸,苯丙氨酸是三大类主要氨基酸;不饱和脂肪酸是优势脂肪酸,以亚油酸,油酸为主。和文献记录的结果相比,虫草发酵粉中3′-脱氧腺苷,甘露醇的含量明显高于冬虫夏草子实体中相应成份的含量;各种氨基酸的含量和水平与冬虫夏草子实体中相应氨基酸的含量和水平相当;虫草发酵粉中的其它化学成份和冬虫夏草子实体中相应成份基本一致。

北冬虫夏草(Cordyceps militaris)单孢菌株配对后对子实体形成的影响与无性型产孢结构关系

由野生子实体分离的低代菌株“ Ｃ．ｍ．Ｈ９５－１”和“ Ｃ．ｍ．Ｈ９７－Ｇ６”的子囊孢子单孢，配对后产生了较大变异，３１％和５０％的配对菌株具有与亲本菌株相同的遗传特性，而且子实体形成能力及生物产量明显增加。配对菌株“ Ｃ．ｍ．Ｈ９７－２６９３”和“ Ｃ．ｍ．Ｈ９７－２６２７”的子囊孢子再配对后，几乎所有的再配对菌株不能回复到亲本菌株的生长型，其子实体的形成能力及生物产量也低于亲本菌株。实验的结果还表明，在ＰＤＡ组合培养基１上，单孢及配对菌株的无性型产孢结构，对子实体形成有着一定的相关性。

北冬虫夏草(Cordyceps militaris)室内栽培技术研究

2003年从北京北冬虫夏草(Cordyceps militaris)子实体的子座部分经单孢分离出Ⅱ号菌株.2004年从北京、上海北冬虫夏草新鲜子实体中采用组织分离法分离出Ⅰ号、Ⅲ号和Ⅳ号菌株,同时收集到开封试管菌株Ⅴ号.Ⅱ号菌株在不同培养基(5,6,7号)进行瓶栽试验,并与4个菌株(Ⅰ号、Ⅲ号、Ⅳ号、Ⅴ号)在同一培养基进行瓶栽比较试验.经过50d的观察表明,Ⅱ号菌株在5号和6号培养基上所产生子实体及每瓶平均数量,平均长度,平均鲜重和干重都比在7号培养基上良好;Ⅰ号、Ⅲ号、Ⅳ号菌株在5号培养基上生的子实体无论每瓶平均数量、平均长度、平均鲜重和干重都明显比Ⅴ号菌株子实体情况优良.

北冬虫夏草(Cordyceps militaris)主要菌株的超微结构

对北冬虫夏草主要菌株的超微结构研究表明，子实体形成能力不同的菌株，其体细胞结构和无性繁殖结构没有很大的差别；分生孢子的形成方式为芽生式分生孢子，菌丝体的每个细胞里通常仅含１个单倍体的细胞核。而在有子实体形成能力的野生菌株的有性繁殖结构内．主要是子囊和子囊孢子。它们性过程仅发生在子实体外层的双核细胞里，其子囊孢子的形成方式为细胞游离形成方式。文中选用了４６张显微镜照片并组合为１０个图版，首次系统地介绍了我国北冬虫夏草的超微结构特征。

从考古与典籍中看冬虫夏草的传播与知识流变

冬虫夏草是产自我国西部高寒山区、具有极高药用价值的珍贵物种。考古资料证明,早在两千多年前,中国古人已开始食用虫草,而最早描述冬虫夏草的文献出现在公元4世纪。通过梳理藏医药文献与汉家典籍,寻找冬虫夏草的传播痕迹与人们对其认知的变化。文章聚焦于清代本草文献与文人笔记,结合著者身份经历、编撰方式、撰写内容等追索古人对冬虫夏草的认知随文本流变的脉络;同时经过各类典籍在内容侧重点与行文特点上的比较,揭示出医家与文人对于冬虫夏草认知上的异同,探索冬虫夏草在清代的传播情况。

仿生提取ICP-MS法测定冬虫夏草8种重金属含量及健康风险评价

目的:建立冬虫夏草中铅(Pb)、镉(Cd)、汞(Hg)、砷(As)、铜(Cu)、银(Ag)、锡(Sn)和锑(Sb)8种重金属的仿生提取含量测定方法,并对其健康风险进行评价。方法:采用人工胃液、人工肠液仿生提取冬虫夏草中可溶性重金属,ICP-MS法测定重金属含量,靶标危害系数(THQ)法评价健康风险。结果:8种重金属在各自质量浓度范围内线性关系良好(R2> 0.997 0),平均回收率84.05%~114.71%(RSD 2.9%~4.9%)。冬虫夏草中As、Hg、Cu、Cd、Sb、Pb、Ag总量均值依次为12.122、0.644、15.828、0.095、0.027、0.636、0.075 mg·kg-1,未检出Sn。As、Hg、Cu、Cd、Pb、Ag在人工胃液溶出率大于人工肠液,其在人工胃液中的溶出率均值为19.69%~52.62%,在人工肠液中的溶出率均值为0%~16.05%;Sb在人工肠液的溶出率25.54%大于人工胃液的溶出率14.68%。健康风险评价结果显示,As、Hg、Cu、Cd、Pb、Ag、Sb的THQ均<1,表明冬虫夏草中上述8种重金属不会对人体造成明显的健康危害。结论:建立的方法简便、准确、可靠,适用于冬虫夏草中上述8种重金属的测定和健康风险评价,仿生提取测定冬虫夏草8种重金属的含量数据及基于该数据的健康评价结果可为冬虫夏草重金属安全性深入研究提供参考。

冬虫夏草及其近缘品中铅、镉、砷污染评价及人体健康累积风险评估方法探索

目的:对冬虫夏草及其近缘品中铅(Pb)、镉(Cd)、砷(As)的残留量进行测定,探索符合冬虫夏草及相关产品使用特点的污染评价及人体健康风险评估方法。方法:基于冬虫夏草及其近缘品中Pb、Cd、As的残留量监测数据,综合运用单因子污染指数法、尼梅罗综合指数法、金属污染指数法对冬虫夏草及其近缘品进行重金属污染评价,计算重金属日暴露量,分别采用危害指数法和更加精确的靶器官毒性剂量法对Pb、Cd、As联合暴露产生的健康风险进行累积风险评估。结果:污染评价结果说明,冬虫夏草及其近缘品中As的污染应引起关注,不同品种污染程度为冬虫夏草(繁育品)=蛹虫草<冬虫夏草(野生品)<香棒虫草<亚香棒虫草;人体健康风险评估结果表明,对于心血管和神经系统,1批冬虫夏草(野生品)全草中Pb、Cd、As联合暴露产生的累积健康风险需被进一步关注。结论:冬虫夏草及其近缘品重金属污染评价,以及人体健康风险评估方法,可为中药安全性评价及相关限量标准的制修订提供参考。

冬虫夏草多糖的结构表征及改善胞葬功能障碍的作用与机制研究

基于过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPAR-γ)探究冬虫夏草多糖(Cordyceps polysaccharides,CSP)对改善巨噬细胞胞葬功能的作用及机制。采用水提醇沉法提取CSP;利用高效液相凝胶色谱法、PMP柱前衍生高效液相色谱法、甲基化法分析CSP的分子量分布、单糖组成及糖苷键连接类型。通过CCK-8法、实时荧光定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)和流式细胞术分别测定CSP对巨噬细胞细胞活力、胞葬相关基因及胞葬功能的影响;采用间接免疫荧光法观察CSP对PPAR-γ的表达量和核定位的影响;利用小干扰RNA转染技术验证PPAR-γ在CSP改善胞葬功能中的作用。结果显示,CSP的总糖含量为72.9%,分子量分布为21.9、2100 kDa及大于50000 kDa;主要由葡萄糖、半乳糖和甘露糖三种单糖组成,含6种主要糖苷键。与模型组相比,CSP处理提高了胞葬相关基因TAM酪氨酸激酶受体(Tyro3/Axl/Mer receptor tyrosine kinase,TAM)和乳脂球表皮生长因子8(Milk fat globule-epidermal growth factor 8,Mfge8)的表达(P<0.05)以及巨噬细胞对凋亡细胞的胞葬能力(P<0.05)。免疫荧光结果表明CSP促进了PPAR-γ的蛋白表达(P<0.001)与核转位。敲低PPAR-γ后,逆转了CSP对巨噬细胞胞葬相关基因表达的促进作用。本研究表明CSP可能通过激活PPAR-γ信号通路增强氧化型低密度脂蛋白(Oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导的小鼠巨噬细胞胞葬作用。

青海冬虫夏草不同产区土壤理化性质对微生物多样性的影响

[目的]探究青海省冬虫夏草产区土壤理化因子和微生物之间的关系,以期为人工冬虫夏草培养基质的进一步完善提供参考。[方法]以海东市化隆回族自治县(HL)、黄南藏族自治州河南蒙古族自治县(HN)、海南藏族自治州兴海县(XH)、果洛藏族自治州达日县(DR)、果洛藏族自治州玛沁县(MQ)、玉树藏族自治州杂多县(ZD)和玉树藏族自治州果青牧场(GQ)7个具有代表性的青海省冬虫夏草主产区为试验样地。分别采用重铬酸钾-外加热法、凯氏定氮法、碱熔法、酸溶法、邻菲啰啉比色法、火焰原子吸收分光光度法、火焰光度法及高碘酸钾比色法对土壤相应理化性质进行测定;微生物含量及种类采用Illumina测序技术进行测定,研究产区土壤理化性质对微生物多样性的影响。[结果]大多数土壤理化因子在各产区差异不大。微生物在各产区组成相似,其中真菌优势群落的多样性和丰富度在不同产区间存在一定差异。细菌群落中,变形菌门(Proteobacteria)、放线菌门(Actinobacteria)和酸杆菌门(Acidobacteria)为细菌优势门,Subgroup_6、假单胞菌属(Pseudomonas)和RB41等为细菌优势属;真菌群落中,担子菌门(Basidiomycota)、子囊菌门(Ascomycota)和被孢霉门(Mortierellomycota)为真菌优势门,湿伞属(Hygrocybe)、蜡壳耳属(Sebacina)和被孢霉属(Mortierella)等为真菌优势属。产区土壤理化性质与微生物群落冗余分析结果显示,细菌放线菌门(Actinobacteria)与土壤pH、铁(Fe)元素呈极显著正相关(P<0.01),RB41、Nitrospira和Subgroup_6与全钾(TK)、全磷(TP)、有机质(OM)、锰(Mn)和钠(Na)均呈显著负相关(P<0.05);真菌被孢霉门(Mortierellomycota)与TP呈正相关,子囊菌门(Ascomycota)与TK、全氮(TN)、OM呈负相关,土壤pH与多数真菌优势属均呈正相关。[结论]进一步证实土壤理化因子和微生物之间存在明显的相关性。其中,土壤pH、OM、Na和Fe与冬虫夏草产区的多数微生物群落存在显著相关性(P<0.05),可能是影响微生物群落结构的关键驱动因子。

糖类对冬虫夏草菌Ophiocordyceps sinensis芽生孢子产量及毒力的影响

冬虫夏草(Chinese cordyceps)是食药两用的传统名贵资源。其人工培养需要冬虫夏草菌Ophiocordyceps sinensis的优质芽生孢子。为获得高产量及高感染力芽生孢子,本研究测定不同糖类培养基对冬虫夏草菌芽生孢子产量及毒力(对小金蝠蛾Thitarodes xiaojinensis幼虫的存活率、携菌率和僵虫率)的影响。两个冬虫夏草菌株于含6种糖(葡萄糖、果糖、阿拉伯糖、麦芽糖、蔗糖和海藻糖)的液体培养基中分别培养30 d、45 d和60 d,计数芽生孢子产量并将收集的孢子注射感染两个品系的小金蝠蛾6龄幼虫,置于不同温度下观察幼虫的存活率、携菌率及僵虫率。结果显示:不同糖源培养基中芽生孢子的产量差异显著,其中含麦芽糖培养基中芽生孢子产量最高;注射菌株和幼虫品系对被注射幼虫的存活率无显著差异;不同糖源培养基获得的芽生孢子对蝠蛾幼虫的存活率无显著差异,对携菌率和僵虫率产生影响;以含麦芽糖为糖源的培养基、芽生孢子培养时间显著影响被注射幼虫的存活率与僵虫率,其中培养30 d的冬虫夏草菌所注射的幼虫的存活率、僵虫率显著高于60 d的;温度也显著影响被注射幼虫的存活率、僵虫率,10℃的幼虫存活率和僵虫率显著高于14℃、18℃的。研究结果为培养优质冬虫夏草芽生孢子,提高被侵染蝙蝠蛾幼虫僵虫率提供了参考。

冬虫夏草及其成分在生殖功能中的研究进展

冬虫夏草(cordyceps sinensis, CS)是东方社会历史悠久的强壮滋补类草药,可以增强生殖活动并恢复受损的生殖功能。CS成分复杂,其主要提取成分包括虫草素、异黄酮(isoflavones obtained from Cordyceps sinensis, CSIF),以及CS水提取成分F1(水溶性多糖)、F2(水溶性蛋白质)和F3(水溶性较差的多糖和蛋白质)。截至目前,关于CS及其成分在生殖功能中的作用、具体机制及临床应用尚无系统阐述。首次综述CS及其成分对雌性及雄性生殖类固醇激素生成的体内外作用及机制。在雌性生殖系统中,CS通过上调类固醇合成急性调节蛋白(steroidogenesis acute regulator protein, StAR)和芳香化酶(aromatase, AROM)的表达促进人颗粒黄体细胞(granulosa luteal cell, GLC)中雌二醇(estradiol, E2)的生成,此外,口服从CS中提取的CSIF对去卵巢(ovariectomized, OVX)大鼠具有显著的雌激素作用;在雄性生殖系统中,CS及其不同成分不仅对原代小鼠睾丸间质细胞中睾酮及小鼠睾丸间质肿瘤细胞(MA-10细胞)中孕酮生成有积极作用,还可显著提高小鼠血浆睾酮水平。不仅为研究CS调节生殖功能及在辅助生殖技术中的应用提供新的研究方向,同时提供新的临床治疗策略。

冬虫夏草治疗糖尿病肾病药理机制研究进展

糖尿病肾病是糖尿病最常见的并发症之一,是导致终末期肾病的常见原因,严重影响患者的生活质量及寿命。目前临床上主要通过药物控制原发病,延缓肾脏进展,当患者进入终末期肾病时仅能依靠肾脏替代治疗。而中医药在治疗糖尿病肾病时确有疗效,可延缓疾病进展,以冬虫夏草为主要活性成分的中成药在治疗糖尿病肾病的方面取得显著优势,具有补肾益肺、止血化痰的功效,其药用历史悠久且作用广泛。多项网络药理学研究表明,冬虫夏草中通过虫草多糖、核苷、麦角甾醇等活性成分治疗糖尿病肾病。文章通过查阅相关文献,归纳总结冬虫夏草治疗糖尿病肾病的作用机制,从抗氧化应激、降低血糖、抗炎、抗纤维化、调节巨噬细胞活性、调节自噬作用等方面展开综述,明确冬虫夏草治疗该病的主要成分及相关信号通路,为糖尿病肾病的相关治疗及研究提供参考。

冬虫夏草调节大鼠运动能力的机制研究

冬虫夏草作为一种传统的名贵中药材,具有抑制肿瘤生长、延缓衰老、提升运动能力、消除运动性疲劳、提高机体免疫力、提高人体机能等功效,药用价值极高。已有的研究发现,冬虫夏草具有抗氧化、抗自由基生成和降低机体氧化应激水平的功效,但作用机制不清楚。本实验发现,冬虫夏草降低氧化应激水平,提高运动能力主要是通过调节实验大鼠血清谷草转氨酶、谷丙转氨酶和肌酸激酶活性,以及与血液血红蛋白和血糖含量有关。本研究进一步阐释了冬虫夏草提高运动能力,提高氧化应激能力的机制。

甘肃祁连山冬虫夏草内生真菌的分离及其代谢产物活性评价

目的分离甘肃祁连山冬虫夏草内生真菌,并探讨其代谢产物的生物活性。方法采用3种不同培养基,用组织匀浆法和组织切块法对冬虫夏草不同部位内生真菌进行分离纯化。分别对其代谢产物的酶抑制活性、抗菌和抗氧化活性进行评价。利用形态学和分子生物学方法进行高活性菌株分类鉴定,利用现代色谱分离技术对高活性化学成分进行跟踪分离。结果分离得到42株内生真菌,发酵得到84个待测样品,对腺苷脱氨酶(ADA)抑制活性>40%者占比52%。其中高活性菌株Aspergillus sp.C-1乙酸乙酯相样品ADA抑制活性>90%,对5种供试菌均有抑菌活性,二苯基苦基苯肼(DPPH)和羟自由基清除率均>85%,总还原力为(0.039±0.002)mg的L-抗坏血酸(VC)当量,分子鉴定与Aspergillus fumigatus有99%同源性。追踪分离出2个具有ADA抑制活性的化合物,其中C1被鉴定为大黄素甲醚(physcion),IC_(50)为3.58 mmol/L。结论甘肃祁连山冬虫夏草内生真菌资源丰富且次级代谢产物具有良好的生物活性,是活性物质发现的良好来源。

冬虫夏草成分分析技术进展

综述了冬虫夏草成分分析技术进展。冬虫夏草成分分析技术主要包括色谱及其联用技术、光谱技术、核磁共振波谱技术等。色谱及其联用技术操作简单、分离效果好、效率高、易于自动化,广泛用于冬虫夏草核苷类、多糖类和甾醇类等成分的分离分析中;光谱技术分析速度快,检出限低、灵敏度高,能够精准实现冬虫夏草多糖类、氨基酸和重金属的定性定量分析;核磁共振波谱技术常用于辨别复杂混合物的化学性质,具有高重现性、非选择性、非破坏性等特点,能对冬虫夏草多种成分进行同步分析。提高冬虫夏草成分分析灵敏度与精确度,降低其检出限,研发出更多的新型分析技术与多技术联用将会是未来发展的重点方向。

冬虫夏草抗低氧疲劳作用研究

急性高原低氧环境暴露会损害机体的供氧能力和运动耐力,产生疲劳状态。随着高原旅游和高原作业人群的日益增多,如何提高高原人群的运动机能、缓解疲劳状态成为高原医学需迫切解决的问题之一。本研究模拟6000 m海拔氧浓度(空气氧含量11.35%)环境下给予冬虫夏草(300~900 mg/kg/d剂量,连续7天),以探究冬虫夏草对低氧环境下小鼠运动性疲劳的保护作用。研究结果表明,与模型组低氧疲劳小鼠相比,冬虫夏草组小鼠负重游泳力竭时间显著增加,血清尿素氮(BUN)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、肌酐(CRE)和丙二醛(MDA)含量显著减少,血清总抗氧化能力(T-AOC)、肌糖原和肝糖原含量显著增加,肝脏组织和肌肉组织病理学变化得到明显改善。由此可见,冬虫夏草具有良好的抗低氧疲劳作用,其活性主要是通过提高肌肉强度、增强抗氧化能力、降低机体运动强度、调节能量代谢等途径来实现,特别是冬虫夏草中剂量(600 mg/kg/d)组效果最稳定。

冬虫夏草的本草考证

冬虫夏草(Cordyceps sinensis)作为我国历史悠久的名贵中药材,自公元710年马世林首载于《月王药诊》后,便陆续出现在中国的历史典籍中,其中尤以医药类典籍为甚。本文以冬虫夏草在古文献中的丰富记载为基础,结合前人的诸多研究成果,对冬虫夏草进行详细考证。结果表明,关于冬虫夏草最早的汉文文献记载始见于明代的《寿世保元》,因其“夏为草,冬为虫”或“春生土中”的特征而得名,主要功效是“保肾益肺”。由于受冬虫夏草稀有、价格昂贵及过度采挖等因素影响,市场上出现了许多类似冬虫夏草的混淆品,主要有雪峰虫草、亚香棒虫草和新疆虫草等,可通过对其分布区域、海拔、寄主、子座长度、颜色、菌核环纹数以及对足数等特征进行鉴别。考证有关冬虫夏草的历史文献,加深对这一传统名贵中药材的了解,有利于对传统文化的保护、利用与传承。

基于网络药理学和分子对接技术探讨冬虫夏草治疗特发性肺间质纤维化的作用机制

目的:运用网络药理学和分子对接技术探究冬虫夏草治疗特发性肺间质纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)的作用机制。方法:通过中药系统药理学数据库与分析平台(traditional Chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform,TCMSP)筛选出冬虫夏草的主要活性成分及其对应靶点;通过人类基因数据库(the human gene database,GeneCards)、在线人类孟德尔遗传数据库(online mendelian inheritance in man,OMIM)、DrugBank数据库检索获得IPF疾病相关靶点,取二者交集靶点作为冬虫夏草治疗IPF的关键作用靶点;将交集靶点上传至STRING数据库,构建冬虫夏草活性成分与IPF疾病的共同靶点蛋白-蛋白互作网络(protein-protein interactions,PPI),根据度值筛选出核心靶点;将交集靶点基因导入DAVID分析平台,进行基因本体(gene ontology,GO)、京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析。结果:共获得冬虫夏草活性成分7个,作用于IPF的关键靶点84个;关键活性成分有乙酸亚油酯、花生四烯酸、胆固醇、β-谷甾醇,核心靶点有J原癌基因、过氧化物酶体增殖物激活受体γ、丝裂原活化蛋白激酶14等,GO和KEGG富集分析显示主要通路有TNF、VEGF、p53、cAMP、MARK、鞘脂等信号通路,涉及癌症、细胞凋亡、炎症反应等多个生物进程。冬虫夏草活性成分与靶点蛋白可以形成稳定的复合物。结论:冬虫夏草对IPF的治疗作用具有多成分、多靶点、多通路的特点。