新疆一号冰川土壤细菌多样性的研究

应用变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术分离PCR扩增的16S rDNA来研究土壤微生物的多样性。直接从新疆一号冰川不同海拔高度的土壤样品中提取总DNA。用两套细菌通用引物分别扩增16S rDNA的V3和V6/V9高变区的特异性片段,PCR产物进行DGGE分析。PCR-DGGE图谱表明,PCR产物经DGGE检测到的条带清晰且分离效果好。结果表明,PCR-DGGE是一种快速研究微生物群落结构的有效方法。

冰川土壤来源Brachybacterium sp. DB5低温脂肪酶基因的克隆与表达

从新疆一号冰川土壤来源的54株低温细菌中筛出11株产脂肪酶菌株,其中一株短状杆菌Brachybac-terium sp. DB5产脂肪酶活力较高。通过同源克隆和TAIL-PCR技术从Brachybacterium sp. DB5基因组DNA中克隆得到一个脂肪酶基因LipDB5。LipDB5基因全长933 bp,编码310个氨基酸和一个终止密码子,理论蛋白分子质量为34.8 kDa,无信号肽序列。将LipDB5基因在大肠杆菌中进行重组表达,重组脂肪酶最适反应温度30℃,在5℃时能保持最高活力的34.7%,对热不稳定,60℃处理30 min剩余17.4%酶活。研究结果表明LipDB5具有低温脂肪酶的性质,在低温生物催化领域具有潜在的应用前景。