尸体皮在-80℃冰箱降温-LN_2冻存活力变化的实验研究

通过对 - 80℃、- 196℃冷冻尸体皮氧耗和SDH活力测定 ,探讨超低温冷冻对皮肤活力的影响程度和抗冻剂的保护作用。方法 :切取中厚尸体皮 12块 ,分成三组 ,一组为对照组 ,两组为不同抗冻剂处理的实验组。三组均经 - 80℃降温和 - 196℃冻存 ,分别检测皮片的氧耗和SDH活力。每组以平均数和标准差表示结果 ,用t检验进行显著性差异的统计学分析。结果 :未经抗冻剂处理的皮片经冷冻贮存后氧耗和SDH活力下降 6 9.8%和 6 9%。而经二种抗冻剂处理的皮片氧耗和SDH活力分别下降 4 2 .1%和 4 5 .1%。与对照组比较有显著差异 (P <0 .0 1) ,两实验组间及各冻存时间段间无显著差异 (P >0 .0 5 ) ,- 80℃与 - 196℃间无明显差异 (P >0 .0 5 )。结论 :冷冻对皮肤活力影响明显 ,抗冻剂对皮片活力具有显著保护作用 ,不同抗冻剂间无明显显著保护作用 ,- 80℃和 -

骨髓细胞液氮保存21-25年后的细胞活力体外研究

为探讨适合临床应用的骨髓细胞保存方法,揭示细胞长期低温保存效果,将20人份骨髓加入DMSO-AuP(10%二甲亚砜、10%自体血浆)或DMSO-HES-HuA(5%DMSO、6%羟乙基淀粉、4%人血白蛋白)保护剂,分装2毫升/管,600-800管/人份,自控程序降温仪或-80℃低温冰箱预冻降温、液氮中保存21-25年。取冷冻骨髓细胞于38℃复温,检测细胞相关指标。结果表明:加保护剂的细胞标本在-80℃低温冰箱中为低速降温,-30℃前,与自控程序降温仪设定1℃/min的低降温速率接近。DMSO-HES-HuA与DMSO-AuP比较,红细胞形态畸形率分别为(3.5±1.5)%和(12.6±4.8)%;溶血率分别为(3.3±1.6)%和(23.1±5.1)%(p<0.05);前者渗透性脆性不变,后者减低;红细胞、血小板、粒单系造血祖细胞、长期培养起始细胞回收率,前后者对比分别为(96.1±1.8)%、(70.0±9.5)%、(49.2±10.9)%、(54.2±13.8)%vs(76.3±5.6)%、(52.7±8.1)%、(43.5±12.3)%、(47.2±13.6)%。用上述保护剂配合上述降温法保存后,细胞在间充质干细胞培养上,生长特性良好。同一保护剂用上述两种降温法保存后,细胞各种回收效果差异不显著(p>0.05)。结论:细胞在液氮中保存21-25年,其细胞形态和回收活力(率)良好;保存如骨髓这种细胞成分并非单一的标本时,用5%DMSO-6%HES-4%HuA为保护剂的-80℃冰箱预冻降温后液氮保存,方法简便、经济、易操作,适合临床应用。