延迟性雷美替胺处理对脑冷冻伤后神经功能和组织修复的调节作用

目的研究在脑冷冻伤(cryogenic traumatic brain injury,cTBI)亚急性期连续每日给予雷美替胺对小鼠神经功能障碍和脑组织修复的调节作用。方法将30只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、损伤组和雷美替胺处理组。将经液氮预冷的铜棒按压颅骨,以造成右侧感觉运动皮层损伤。以cTBI后不同时间点(1 h、1 d、3 d)为起始给药时间,连续每日灌胃给予雷美替胺(10 mg·kg^(-1)·d^(-1)),并在14 d后取材。采用平衡木实验、旷场实验来评价小鼠运动功能;采用甲苯胺蓝染色来检测脑梗死体积;利用免疫荧光检测脑梗死周边区GAP-43和synaptophysin的表达;利用Iba-1检测小胶质细胞激活;通过检测GFAP阳性区域,分析胶质疤痕的面积和厚度。结果3种给药时程的雷美替胺处理(1 h~14 d,1~14 d和3~14 d)均可明显改善cTBI导致的小鼠运动功能障碍并减小脑梗死体积,可促进GAP-43和synaptophysin表达,并减少胶质疤痕面积和厚度以及激活态的小胶质细胞数量。此外,各药物处理组对上述指标的作用程度相当。结论延迟性雷美替胺处理可改善cTBI后神经功能障碍,且有效给药时间窗可延迟至cTBI后3 d,该作用可能与抑制胶质疤痕形成和小胶质细胞激活,促进轴突再生、突触发生有关。

银杏叶提取物对兔冷冻伤脑水肿的保护作用及其机制(英文)

背景:冷冻所致脑水肿,被认为是一种典型的血管源性脑水肿。许多化学递质参与这一过程,其中氧自由基起主导作用,采用银杏叶提取物所具有的氧自由基清除剂作用,可望发挥抗脑水肿及脑保护作用。目的:探讨银杏叶提取物对冷冻所致兔脑水肿的保护作用及其机制。设计:采用完全随机设计,空白对照实验。地点和材料:同济医科大学附属同济医院神经外科,材料由同济医科大学动物中心提供。健康中国家兔30只,体重2.0～2.8kg,雌雄不拘.干预:30只健康中国家兔,单纯随机分为3组:对照组、脑水肿模型组、EGb761处理组,3组家兔分别在术后6,24h断头取脑测定脑组织含水量、脂质过氧化物含量及超氧化物歧化酶活性。主要观察指标:测定脑含水量,脑组织LPO含量及SOD活力的变化。结果:术后6h和24h,脑水肿模型组脑组织LPO含量犤(6.82±1.36)μmol/L,(7.95±2.12)μmol/L犦及脑组织含水量犤(78.56±0.61)%;(79.86±0.54)%犦呈进行性增高,SOD活性则呈进行性下降(P<0.05);EGb761处理组脑组织LPO含量及脑组织含水量增加不显著,且SOD活性回升(P<0.05)。结论:EGb761具有抗脑水肿和保护脑组织的作用。而其减轻脂质过氧化反应,保护脑组织内源性SOD活性,增强脑组织自身清除氧自由基的功能,则可能是其重要的药理作用机制之一。

星形胶质细胞的缝隙连接蛋白43参与冷冻伤后脑水肿的形成

目的:探讨脑水肿后星形胶质细胞缝隙连接蛋白43(Cx43)的表达及其在脑水肿的发生发展过程中所起的作用。方法:采用颅骨外液氮冷冻法建立大鼠右侧顶叶皮层脑水肿模型。实验分为假手术组、脑水肿模型组和脑水肿模型+缝隙连接阻断剂(carbenoxolone或octanol)干预组。干湿重法测定冷冻伤后的脑含水量;甲酰胺法测定大鼠血脑屏障通透性的改变;HE染色观察冷冻伤脑组织的病理变化;Western blot法和免疫组化检测Cx43蛋白的表达情况。结果:冷冻伤可引起大鼠损伤脑皮层区的含水量增加,在冷冻伤后24 h脑水肿发展到高峰。冷冻伤引起损伤脑皮层区域的血脑屏障通透性增加,范围大于直接冷冻损伤区。HE染色观察显示冷冻伤中心区细胞坏死明显,而冷冻伤周围区域出现水肿。脑冷冻伤引起冷冻伤周围皮层区域的Cx43蛋白表达增加,但冷冻伤中心区的Cx43蛋白表达降低。Carbenoxolone或octanol阻断Cx43的功能,降低了冷冻伤皮层区的含水量和血屏障通透性。结论:脑水肿时星形胶质细胞上的Cx43表达上调,功能增强;阻断Cx43的功能可在一定程度上减轻脑水肿。

氯胺酮对脑冷冻伤后自由基和脑水肿的影响

目的 探讨N 甲基 D 天门冬氨酸 (N methyl D aspartate,NMDA)受体非竞争性拮抗药氯胺酮对鼠脑冷冻伤后脑内超氧化物歧化酶 (superoxidedismutase ,SOD)、丙二醛 (malondi aldehyde,MDA)和脑水肿的影响。方法 4 9只SD大鼠随机分为假手术组、未治疗组和氯胺酮治疗组。采用液氮局部冷冻左侧鼠脑 30s制作冷冻伤模型 ,分别于 2、6、2 4h处死动物后 ,用分光光度法测 1 0 %脑组织匀浆中SOD活性和MDA产量。结果 脑组织含水量在冷冻伤后显著升高 ,并随时间延长而加重。氯胺酮治疗后脑组织含水量没有明显减少 ;脑组织SOD活性在 2、6h高于未治疗组 ,但 2 4h后SOD活性无显著差异。MDA含量比未治疗组在相应时段显著减少。结论 自由基是脑水肿形成的重要因素 ,氯胺酮能减轻冻伤脑组织中SOD活性的抑制 ,减少MDA生成 。

大鼠冷冻伤血管源性脑水肿模型的建立与评价

目的改进目前建立大鼠颅骨外冷冻伤血管源性脑水肿模型的方法,以获得更加理想的脑冷冻伤模型。方法运用自制的小口径液氮冷冻器作用于大鼠左侧顶颅骨60s,建立脑冷冻伤模型,通过观察脑组织含水量、冷冻伤脑组织的伊文思蓝蓝染范围及病理改变,对模型进行评价。结果大鼠脑水肿明显,伊文思蓝蓝染的程度稳定,动物死亡率低。结论按此方法建立的脑冷冻伤模型,方法简单,可比性强,重复性高,是研究脑水肿较理想的模型。

SOD对鼠冷冻伤脑水肿的保护作用

用电子自旋共振技术(ESR)及自旋捕捉剂(PBN)直接检测冷冻伤及伤后应用SOD、甘露醇治疗的脑组织自由基动态改变;同时检测丙二醛(MDA)、SOD活性及脑组织水含量。结果治疗组和对照组相比,自由基、MDA、水含量明显降低(P<0.01)。SOD含量回升(P<0.01);SOD比甘露醇疗效更显著(P<0.05)。提示SOD、甘露醇都有抗自由基作用;超氧阴离子自由基O_2^(?)在病理性自由基反应中具有重要作用。

冷冻伤致家兔角膜内皮损伤动物模型的建立

用冷冻法建立家兔角膜内皮损伤的动物模型。将直径为 8mm的铜探头置于液氮中数秒后取出 ,待探头温度显示在 - 12 0℃时将其垂直放于兔角膜中央表面分别接触 5s和 15s。结果显示冷冻区的角膜内皮细胞完全被破坏 ,内皮细胞损伤区与未损伤区之间界限清晰。冷冻 5s和 15s能造成面积相近的角膜内皮缺损 (P >0 .0 5) ,而冷冻 5s者角膜水肿较轻 (P <0 .0 5)。伤后 2 d,内皮缺损面积为(4 .13± 1.97) mm2 ,伤后 3d,一部分的角膜内皮已愈合 ,伤后 4 d所有角膜内皮缺损已被大小不一、形态不规则的再生内皮细胞所覆盖。伤后 12 d,再生的内皮细胞大小趋于均匀一致 ,为多边形。本试验通过对冷冻探头温度的统一监测 ,建立了兔角膜内皮损伤的动物模型 ,并且本模型具有可重复性及简单易行的特点。

大鼠脑冷冻伤后脑组织NOS活性的变化

目的研究大鼠脑组织冷冻伤后一氧化氮合酶（ＮＯＳ）活性的变化规律。方法利用液氮杯硬膜外冷冻大鼠顶叶脑组织复制冷冻伤模型，测定大鼠脑冷冻伤后不同时间脑组织ＮＯＳ活性。结果大鼠冷冻伤后３０ｍｉｎ局部脑组织ＮＯＳ活性增加（Ｐ＜０．０５），６０ｍｉｎ达较高水平（Ｐ＜０．０１），２ｈ有所下降（Ｐ＜０．０５），６ｈ左右再次升高，直至１２ｈ仍维持高水平（Ｐ＜０．０１）。结论表明大鼠脑组织冷冻伤后ＮＯＳ活性增高。

EGb761对兔冷冻伤脑水肿的保护作用

目的 探讨银杏叶提取物 (EGb76 1)对冷冻所致兔脑水肿的保护作用及其机制。 方法 30只健康家兔随机分为三组 :对照组 (A组 )、脑水肿模型组 (B组 )和 EGb76 1处理组 (C组 )。各组分别在术后 6、2 4 h断头取脑测定脑组织含水量、脂质过氧化物 (L PO)含量及超氧化物歧化酶 (SOD)活性。 结果 术后 6 h和 2 4 h,B组脑组织 L PO含量及脑组织含水量呈进行性增高、SOD活性则呈进行性下降 (P<0 .0 1) ;C组脑组织 L PO含量及脑组织含水量增加不显著 ,且 SOD活性回升 (P<0 .0 1)。 结论 EGb76 1能有效地清除自由基 ,减轻脂质过氧化反应 。

断指冷冻伤后再植的临床经验

目的 探讨断指冷冻伤后再植术前的复温方式及术后注意事项。方法 对在低温环境下丢弃或保存不当而致指体冷冻伤的 9例 11指 ,采取自然复温 (2 2～ 2 8℃ )和温盐水复温 (3 8～ 42℃ )。对冷冻指体复温后 ,行再植手术。结果 再植术后完全存活 6例 ,部分成活 3例。结论 ①温盐水复温方式值得推荐 ;②指体冷冻伤不应一概列为断指再植禁忌证 ;

大鼠脑冷冻伤引起的脑水肿模型的改进

为了探索应用颅骨外冷冻方法造成大鼠脑冷冻伤引起的血管源性脑水肿模型的最佳温度及时间，选用６０℃、８０℃ 及１９６℃（液氮的温度）三个冷冻温度，及１、２、３、４ ｍ ｉｎ 四个冷冻时间冷冻大鼠一侧大脑。结果发现，采用１９６℃冷冻１ ｍ ｉｎ 时，大鼠脑水肿明显，模型稳定，操作简单，动物死亡率低。

大鼠颅脑冷冻伤后一氧化氮的变化及其对脑水肿的影响

目的 :探讨脑冷冻性损伤后一氧化氮 (NO)与脑水肿的关系及其对脑水肿的影响。方法 :建立大鼠脑冷冻伤脑水肿模型 ,测定伤后伤侧脑组织水的质量分数和颈静脉血NO量 ,并应用一氧化氮合酶 (NOS)抑制剂进行治疗。结果 :伤后伤侧颈静脉血NO浓度增加 ,但随着脑水肿的加重 ,NO浓度呈进行性下降。应用NOS抑制剂可以有效减少脑组织水的质量分数。结论 :NO与创伤性脑水肿的发生和发展密切相关 ,NOS抑制剂也许可以用于治疗脑水肿。

L─精氨酸甲酯及L─精氨酸对冷冻伤脑水肿的影响

利用液氮杯局部冷冻大鼠顶叶脑组织复制脑水肿模型，观察NO合酶（NOS）的特异性抑制剂L－精氨酸甲酯（L—NAME）及合成NO的底物L－精氨酸（L—ARG）对脑冷冻伤后脑水肿的影响。结果发现：局部冷冻伤脑水肿具有一般水肿的特征，冷冻伤后脑水肿指数升高，血脑屏障破坏，伊文氏兰渗出明显增加。L—NAME可不同程度地使脑水肿及血脑屏障破坏有所减轻，而L—ARG可逆转L—NAME所致的效应，并有加重脑水肿的倾向。我们的实验表明，NO是致大鼠冷冻伤脑水肿的一重要因素。

大黄对兔冷冻伤性脑水肿的保护作用

为研究大黄注射液静脉给药对兔急性冷冻伤性脑水肿模型的影响,观察了兔脑组织水分含量,钠、钾、钙含量,大脑半球表面伊文思蓝蓝染及组织形态学变化。大黄注射液(100％)给药采用两种剂量(8ml/kg 体重和4ml/kg 体重),并以甘露醇作为阳性对照,生理盐水作为阴性对照。结果发现,大黄注射液(8ml/kg 体重)与生理盐水比较,能减少冷冻伤侧半球兔脑组织水分含量(P<0.05),减轻冷冻伤侧大脑半球表面伊文思蓝蓝染(P<0.05),有减轻冷冻伤侧水肿脑组织钠潴溜的趋势,缓解了损伤脑组织的病理改变;对脑组织钾含量无明显影响。甘露醇组也有类似作用,大黄组与甘露醇组比较无显著差异。未发现大黄对冷冻伤脑组织细胞钙超载的影响。本结果提示大黄注射液(8ml/kg 体重)能减轻兔急性冷冻伤性脑水肿。

氯胺酮对脑冷冻伤后海马区神经细胞及其行为学的影响

目的 观察脑冷冻伤后海马区神经细胞存活数和神经创伤评分 (NSS) ,并探讨N -甲基 -D -天门冬氨酸 (NMDA)受体非竞争性拮抗剂氯胺酮对神经细胞和行为学的影响。方法 49只SD大鼠随机分为假手术组、未治疗组和氯胺酮治疗组。分别于冷冻伤后 1、2、6、2 4h进行NSS评分 ,冷冻伤后 2、6、2 4h处死动物 ,取脑作病理切片。结果 冷冻伤后未治疗组海马区神经元存活细胞数明显减少 ,氯胺酮能显著增加存活神经元细胞数 ,2 4hNSS评分明显低于未治疗组。结论 氯胺酮能减少冷冻伤后海马区神经元的丧失 ,有利于颅脑损伤后神经功能的恢复 。

氯胺酮对大鼠脑冷冻伤后一氧化氮的影响

目的观察大鼠脑冷冻伤后脑组织中一氧化氮合酶(NOS)和血浆一氧化氮(NO)的变化,探讨氯胺酮对NO的影响.方法49只SD大鼠随机分为假手术组、未治疗组和氯胺酮治疗组.分别于2、6、24 h处死动物,0℃～4℃取脑,匀浆离心制成10%组织匀浆,用分光光度法测脑组织NOS活性和血浆NO量.结果脑组织中NOS水平在冷冻伤后2 h明显升高,并随时间延长呈上升趋势.血浆NO量也有相应改变.氯胺酮治疗后脑组织NOS水平和血浆NO量在2、6 h较未治疗组显著下降,24 h无差异.结论氯胺酮能降低冷冻伤周围脑组织中NOS水平和血中NO量.

脑冷冻伤脑水肿时膜磷脂代谢障碍的实验研究

采用兔脑冷冻伤实验模型研究脑水肿时膜磷脂代谢障碍。检测脑冷冻伤后1min、30min、6h、24h冷冻灶周围脑组织膜磷脂花生四烯酸代谢产物的变化规律。发现冷冻伤后极早期病灶周围脑组织TXB_2。显著升高(P<0.01),6-Keto-PGF_(1α)亦升高(P<0.02),但T/6比值严重失调,早期猛增10倍。同时期内,冷冻灶周围脑组织水含量递增。伊文思蓝染色至30min组才蓝染,并随时相增剧。研究结果提示脑冷冻伤后早期出现冷冻灶周围脑细胞膜磷脂代谢障碍。

21-氨基类固醇对脑冷冻伤大鼠局部脑葡萄糖利用率的影响

21-氨基类固醇是新发现的铁依类脂质过氧化作用的抑制剂。其中以U74006 F(U6F)的抗中枢神经损伤作用最佳。本实验使用^(14)C-脱氧葡萄糖放射自显影方法测定U6F对大鼠脑冷冻伤后局部脑葡萄糖利用率(LCGU)的影响。动物分三组,A组(n=10)正常对照;B组(n=11)冷冻伤;C组(n=9)U6F+冷冻伤。C组动物在冷冻伤前30分钟给予U6F 20mg/kg/日,分二次ip,共注射7次。冷冻伤后72小时断头处死动物。结果,冷冻伤组冻伤侧大脑皮质区平均LCGU为正常组的58±4%,而U6F预处理组为正常组的82±5%(P<0.01)。结果提示,U6F预处理能减轻冷冻伤对大鼠大脑皮质LCGU的抑制。

脑组织伊文思兰含量和细胞内游离钙离子浓度与冷冻伤性脑水肿的关系

在大鼠冷冻伤性脑水肿时，观察脑组织伊文思蓝（ Ｅ Ｂ） 含量和突触体内游离钙离子浓度（［ Ｃａ２ ＋ ］ｉ）变化，及其与脑组织水份含量变化之间的关系。结果表明：脑组织水份含量变化与伊文思蓝含量和［ Ｃａ２ ＋ ］ｉ 变化之间，均呈高度正相关。冷冻伤性脑水肿具有细胞毒性脑水肿和血管源性脑水肿特性，即冷冻伤性脑水肿是一种混合性脑水肿。

冷冻伤所致的鼠脑水肿模型

目的在改良Ｋｌａｔｚｏ法基础上，建立冷冻伤脑水肿模型，籍此探索脑水肿发生发展的病理机制，寻求防治脑水肿的新方法。方法用液氮冷冻鼠脑，通过观察脑组织含水量，Ｎａ＋、Ｋ＋含量，冷冻伤脑组织的伊文蓝（ＥＢ）染范围及病理改变，来比较不同冷冻时间所致鼠脑水肿程度。结果上述几项观察指标都和动物受冷冻时间呈正相关，其中冷冻９０ｓ组动物因脑水肿剧烈全部于２ｈ内死亡。结论用液氮冷冻鼠脑致其脑水肿，方法简单，可比性强，重复性高，是研究脑水肿较理想的模型。