大鼠卵巢组织玻璃化冷冻及自体移植对卵泡的影响

目的探讨大鼠卵巢组织冷冻及自体移植对卵泡形态和数量的影响。方法 8周龄SD雌性大鼠随机分为对照组、移植组、冷冻组,每组3只,6个卵巢组织。麻醉后切除双侧卵巢组织。对照组直接固定并进行HE和免疫组化染色。移植组进行肾被膜下自体移植,4周后取移植卵巢组织。冷冻组采用玻璃化冷冻方法,4周后取出复苏。观察各组卵巢组织形态学,并对卵泡计数。采用TUNEL荧光检测卵巢细胞凋亡水平。采用免疫组织化学法检测各组VEGF表达情况。统计学方法采用单因素方差分析和独立样本t检验。结果对照组、冷冻组、移植组每张切片的卵泡均数分别为(32.3±4.2)、(27.2±7.0)、(22.5±1.5)个,冷冻组及移植组均低于对照组,移植组低于冷冻组,差异有统计学意义(F=41.746,P<0.05)。对照组、冷冻组、移植组的细胞凋亡指数分别为(2.8±0.3)、(5.5±1.0)与(14.2±2.8)(F=60.788,P<0.05),冷冻组及移植组的凋亡指数均高于对照组,移植组高于冷冻组,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组、冷冻组和移植组免疫组织化学染色VEGF阳性细胞百分比分别为(79.5±5.3)%、(63.2±6.5)%与(48.5±2.8)%(F=45.871,P<0.05),冷冻组和移植组的VEGF表达低于对照组,移植组VEGF表达低于冷冻组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论卵巢组织冷冻或自体移植过程中均伴有卵泡丢失、卵巢组织VEGF表达下降。提高移植卵巢组织的VEGF表达,可能对促进移植物血管形成、提高卵巢移植效率有积极作用。

自体卵巢冷冻后移植治疗卵巢早衰的实验研究

目的研究卵巢早衰小鼠自体冷冻卵巢移植后移植卵巢的存活、生长及功能恢复情况。方法将60只雌性昆明鼠分为化疗组、放疗组、化疗+移植组、放疗+移植组、正常组、去势组,每组10只。取出小鼠单侧卵巢经液氮冷冻后,利用环磷酰胺、白消安或60Coγ照射处理小鼠,使其卵巢功能衰竭,随后将解冻后自体卵巢植入部分小鼠肾脏包膜下。观察冻融后卵巢组织学变化,移植后卵巢、子宫内膜组织学变化及雌二醇(E2)水平。结果解冻后卵巢中卵泡的数量与新鲜卵巢相似,但卵泡体积变小,卵母胞与周围颗粒细胞之间的空隙增大。化疗、放疗组卵巢呈典型的早衰样组织学改变:表现为卵巢明显萎缩,卵泡闭锁,卵母细胞及透明带退行性改变,黄体及间质纤维化、坏死等。冷冻卵巢移植后,可见不同阶段的发育卵泡,并可见间质腺和黄体,移植组小鼠阴道上皮细胞及子宫内膜有雌激素效应。血清学结果显示,移植组血清E2水平[化疗+移植组(27.47±1.98)pg/L,放疗+移植组(25.89±2.78)pg/L]明显高于未移植组[化疗组(16.88±2.06)pg/L,放疗组(15.50±1.17)pg/L,P<0.05],而与正常组[(30.93±4.05)pg/L]之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论卵巢早衰小鼠自体冷冻卵巢移植后能在异位存活、生长发育并具有内分泌功能。

大鼠卵巢组织的冷冻移植

背景:玻璃化冷冻是应用高浓度的冷冻保护液结合极快的制冷速度,使细胞快速冷冻,避免细胞内外冰晶形成对细胞的破坏作用,是一种比较新的冷冻方法,具有操作简单、冷冻效率高等特点。目的:采用玻璃化冷冻技术冷冻大鼠卵巢组织,比较4种冷冻保护剂对大鼠卵巢组织学和功能的影响。方法:将大鼠随机数字表法分为6组,每组6只:二甲基亚砜+乙二醇组、二甲基亚砜+乙二醇+蔗糖组、二甲基亚砜+乙二醇+蔗糖+乙酰胺组、乙二醇+蔗糖+乙酰胺组、去势组、正常对照组。4冷冻组摘除卵巢后应用相应的冷冻保护液冻存,去势组仅摘除卵巢不冻存、不移植,正常对照组不作处理。冻存2周后解冻复苏行同体异位移植,将卵巢组织植入大鼠后肢大腿内侧。移植后30d,观察阴道上皮类型及动情周期;移植后3个月,经腹主动脉采血检测血清雌二醇水平;回收卵巢组织做组织学检查。结果与结论:4冷冻组均可见卵巢组织结构受损表现,原始卵泡的形态正常率分别为67.9%,71.6%,80.5%,59.4%,初级卵泡形态正常率分别是41.6%,52.3%,55.9%,36.7%。二甲基亚砜+乙二醇+蔗糖+乙酰胺组卵泡正常率较二甲基亚砜+乙二醇组、乙二醇+蔗糖+乙酰胺组高(P<0.05);不同发育阶段卵泡构成比差异无显著性意义,均未见典型的次级卵泡。受损的卵细胞主要表现为体积变小、胞浆内出现空泡、核皱缩等。4冷冻组未出现典型动情周期的细胞类型。移植物自周围组织获得可见的血管供应,将卵巢组织块连接形成网络。移植物内毛细血管丰富,皮质中可见成群的原始卵泡,初级卵泡、次级卵泡所占比例低于原始卵泡,形态与正常者相似。4种冷冻方法冻存卵巢组织血清雌二醇水平较正常对照组明显降低(P<0.01),二甲基亚砜+乙二醇+蔗糖+乙酰胺组高于其他冷冻组(P<0.05)。结果提示4种冷冻方法均对大鼠卵巢组织有一定程度破坏,初级卵泡的损伤大于原始卵泡。冻存复苏后,卵巢功能恢复,但并不完全,二甲基亚砜+乙二醇+蔗糖+乙酰胺组效果优于另外3组,但移植后动物没有出现规律的动情周期,提示冷冻方法尚需进一步完善。

小鼠双侧卵巢自体移植的组织化学研究

对小鼠双侧自体移植的卵巢进行组织化学研究，探讨其生长规律。结果表明：移植第２～４ｄ，卵巢的原有组织处于退化状态，边缘偶见窦前卵泡，仅散在分布酶染色阳性物质。移植第７～１４ｄ，卵巢中出现窦状卵泡，酶染色较强阳性，大多数动物出现动情周期。移植第１４ｄ以后，卵巢内含发育不同阶段的卵泡、黄体和大量间质腺，酶分布广泛，染色强阳性。研究结果提示双侧自体移植卵巢能够生长发育，并可能分泌性激素。

卵巢组织冷冻保存和移植的研究进展

卵巢组织冷冻保存和移植技术为许多年轻女性患者提供了一种新的保存生殖及内分泌功能的方法。本文就卵巢组织冷冻和移植的动物及临床研究进展进行综述。

去势手术方式对小鼠卵巢组织自体皮下移植效果的影响

目的探讨两种去势手术方式对联合免疫缺陷(SCID)小鼠卵巢自体皮下移植效果的影响。方法按照手术方式不同将SCID小鼠分为3组:对照组、腹式组以及背式组,每组10只。腹式组和背式组术后分别进行腹壁皮下及背部皮下自体卵巢组织移植。记录两组手术所用时间及术后小鼠存活率。2周后与对照组(无手术处理)都进行了促排卵。其后回收卵巢组织进行卵泡存活率分析。结果腹式组有3只小鼠术后死亡,对照组及背式组均无小鼠死亡。腹式组较背式组手术所用时间长,分别为(18.6±2.7)min和(12.5±3.1)min,差异有统计学意义(P<0.05)。腹式组和背式组术后卵巢组织卵泡存活数较对照组减少(均P<0.05),但两组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论小鼠背式去势手术并自体卵巢组织皮下移植相比腹式手术更加快捷简单,两术式可获得相似的移植后卵泡生存率。

卵巢组织冷冻保存及移植技术进展

背景:生育力保存技术可以为因肿瘤或肿瘤治疗相关原因失去卵巢功能的女性患者提供恢复内分泌功能和生殖功能的机会。目的:阐述了卵巢组织玻璃化冷冻以及冻融卵巢组织自体移植等技术在重建卵巢功能方面取得的进展和存在的问题。方法:应用计算机检索CNKI和Pubmed数据库中1999-01/2011-12关于卵巢早衰的文章,在标题和摘要中以"卵巢早衰,玻璃化冷冻,卵巢移植"或"premature ovarian failure,vitrification freeze,ovary transplantation"为检索词进行检索。最终选择关于卵巢玻璃化冷冻和自体移植的40篇文献进行综述。结果与结论:对于重建肿瘤相关性卵巢早衰患者卵巢功能,卵巢组织玻璃化冷冻保存和自体原位移植具有广泛临床应用前景。不仅能够恢复自然生育力、生殖功能及内分泌功能,而且不存在免疫排斥,也没有伦理学争议,安全方便。可以相信,随着医学技术的发展和进步,卵巢组织冷冻移植技术将越发成熟,为更多的女性肿瘤患者保存生育力和内分泌功能带来福音。

白藜芦醇对大鼠冻存卵巢组织自体异位移植功能影响的研究

目的:探究白藜芦醇对大鼠冻存卵巢组织自体异位移植功能的影响。方法:选取24只成熟雌性Wister大鼠,并分为空白对照组、移植组、低剂量白藜芦醇组和高剂量白藜芦醇组,每组各6只。移植组、低剂量白藜芦醇组和高剂量白藜芦醇组采用手术摘取卵巢,使用玻璃化冷冻保存2周。低剂量白藜芦醇组和高剂量白藜芦醇组卵巢组织在白藜芦醇溶液中平衡,且在大鼠冻存卵巢组织自体异位移植前、后分别腹腔注射5、10μmol/L白藜芦醇处理,移植组注射等量生理盐水。使用HE染色后光镜下观察卵泡情况,并记录各组大鼠异常卵泡数目百分比。记录各组大鼠月经恢复情况,检测各组大鼠血清内氧化应激相关物质超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧基团(ROS)含量水平。分别于第4、8周检测各组大鼠血清激素E2及P的分泌情况。结果:相比空白对照组,移植组异常卵泡数目百分比、ROS含量水平均显著升高,SOD含量及第4、8周大鼠E2及P含量均显著降低(P<0.05);相比移植组,低剂量白藜芦醇组和高剂量白藜芦醇组异常卵泡数目百分比、月经恢复时间、ROS含量水平均显著降低,第4、8周E2、P和SOD含量均显著升高(P<0.05)。结论:白藜芦醇对大鼠冻存卵巢组织自体异位移植功能恢复有促进作用,同时可以降低大鼠氧化应激反应保护大鼠卵巢。

卵巢组织冷冻复苏及移植

绝大多数进行生育力保存的人群来自于癌症患者，因为此后的放化疗过程可能会损伤这些患者的性腺功能，从而造成不育。其他疾病的治疗，如自身免疫性疾病（如红斑狼疮）和骨髓增生异常综合征也会对生殖细胞和组织造成损伤。

移植卵巢组织卵泡损伤机制及保护策略

卵巢组织冷冻保存及移植是青春期前女性及不能延迟放疗或化疗的恶性肿瘤患者唯一的生育力保存手段。目前,卵巢组织冷冻保存及移植效率仍低,卵巢组织移植后面临缺血缺氧风险,始基卵泡的异常激活和血供恢复后的缺血-再灌注损伤也造成移植卵巢组织卵泡大量损失。大量研究尝试通过添加某些药物减少卵泡在冷冻及移植过程中所受的损伤,延长卵巢移植患者内分泌功能及生殖功能持续的时间:如添加褪黑素、N-乙酰半胱氨酸、促红细胞生成素或其他抗氧化剂以减轻氧化应激,添加不同来源的间充质干细胞、碱性成纤维细胞生长因子、血管内皮生长因子、血管生成素2、促性腺激素以促进血运重建,添加抗米勒管激素、雷帕霉素以减少始基卵泡异常激活。本文重点阐述了卵巢组织移植后卵泡损伤的主要机制及减少移植卵巢组织卵泡损伤的方法,以期为提高卵巢组织移植效率提供参考。

卵巢组织冷冻保存和移植的研究进展

卵巢组织冷冻移植作为育龄女性癌症患者保存生育力和恢复内分泌功能的治疗方案之一,发挥着越来越重要的作用,它甚至是青春期女性患者的唯一选择。但是,卵巢组织冷冻移植比较复杂,其过程包括卵巢组织的获取、卵巢组织的冷冻复苏、冻融后的活力检测、复苏后再移植等步骤,而每个步骤又有诸多影响因素,都会影响冷冻保存和移植的效果。本文对卵巢组织冷冻保存和移植的各主要环节进行了论述,并阐述了该技术现存的主要问题及该领域的新进展。

冷冻保存卵巢组织移植术对年轻宫颈癌患者卵巢内分泌功能的影响

目的探讨年轻宫颈癌患者冷冻保存卵巢组织移植术恢复卵巢内分泌功能的效果。方法8例年轻宫颈癌患者行广泛全子宫切除术和单侧卵巢悬吊术,同时行单侧卵巢组织冻存。放疗结束后,随机抽取5例行卵巢组织前臂皮下移植术,另外3例作为对照组。术后对患者进行随访,检测卵巢形态和内分泌功能。结果行单侧卵巢悬吊术3例患者随访1年均出现不同程度的围绝经期症状和卵巢内分泌功能异常,随访1年激素水平无改善。其中1例患者术后9个月出现E_2明显下降<20 pg/ml,FSH显著升高>40 U/L,LH显著升高>50 U/L。行单侧卵巢悬吊术合并前臂冻存卵巢组织自体移植术的5例患者中,术后6个月后卵巢内分泌功能逐渐恢复,其中3例患者术后9个月激素水平恢复正常,但1例术后1年失随访。5例患者术后6个月时移植部位卵巢超声提示卵巢内部可见血流信号和小卯泡发育,但卵巢组织较移植时有体积缩小。结论冷冻保存卵巢组织自体移植术对保存和恢复年轻宫颈癌患者的卵巢内分泌功能是一种有效的手术方式。

卵巢组织的冷冻和移植研究进展

卵巢组织冷冻技术可以为患有良、恶性肿瘤的女性提供生育保险 ,已经成为生殖医学领域的新型技术和研究的热点之一。冷冻卵巢组织的移植途径有异体移植、异位自体移植、原位移植和卵泡的体外成熟培养 ,其应用前景广阔。

单合子双胎间部分卵巢组织原位移植及冷冻保存

【目的】总结1例单合子双胎间卵巢组织原位移植手术的体会。【方法】卵巢组织受者:单合子双胎之一(姐姐)诊断"卵巢早衰",卵巢组织供者:双胎之二(妹妹)卵巢储备正常,育有一子。2012年2月8日于中山大学附属第六医院生殖医学研究中心分别进行供者卵巢部分组织获取术及卵巢早衰的受者卵巢组织原位移植术。【结果】供者术后月经规则,受者在移植术后108 d恢复月经,术后受者血清卵泡生成素(FSH)和黄体生成素(LH)水平逐渐下降。【结论】异体卵巢组织原位移植可以帮助卵巢早衰患者恢复内分泌功能,并可能恢复其生殖功能。

卵巢组织冷冻保存和移植的历史、现状及前景

精子库的建立为男性生殖提供了保障 ,人们就试图寻找为女性提供生殖保障的方法。卵巢冷冻保存为一种趋势 ,现就卵巢组织冷冻、移植的历史、研究进展、方法、影响因素及关注问题和有关对策进行综述。

卵巢组织冷冻和移植研究

卵巢是维持女性生殖和内分泌功能的重要器官，对于那些由于卵巢早衰、卵巢先天发育不良或缺如、病理性卵巢切除、恶性肿瘤放射治疗、化学药物治疗（放、化疗）等原因失去卵巢功能的妇女，生育力的保存和卵巢内分泌功能的恢复显得尤为重要。目前对生育力保存可选择卵细胞冷冻保存、胚胎冷冻保存、卵巢组织冷冻保存。由于卵细胞对低温异常敏感、

恶性肿瘤在冷冻复苏后的卵巢组织移植中的转移风险研究进展

1960年,Parrott DM等^（[1]）将冷冻复苏后的小鼠卵巢进行移植并获得妊娠。卵巢组织冷冻是指冷冻保存卵巢的皮质组织或卵巢组织,目前多采用卵巢皮质组织。这种方法可以保存大量的原始卵泡,适用于无法进行超促排卵的癌症患者和青春期前癌症患者进行生育力保存。迄今为止,卵巢组织冷冻技术已经导致了24例正常分娩^（[2]）,日后癌症患者可能有望在癌症治愈后移植冷冻复苏后的自体卵巢组织恢复生育能力。

卵巢组织玻璃化冷冻保存和移植的研究进展

背景:卵巢组织玻璃化冷冻技术作为一种快速、简便、经济的冷冻方式被逐渐应用于卵巢组织的保存。目的:综述国内外关于卵巢组织玻璃化冷冻保存及移植的研究进展。方法:由第一作者检索1995/2011PubMed数据库及清华同方数据库有关卵巢组织玻璃化冷冻保存以及卵巢组织移植技术等方面的文献。结果与结论:玻璃化冷冻是一个超高速的冷冻过程,形成高黏度的"玻璃样凝固状态",可以避免由于冰晶形成所造成的细胞损伤。但至今玻璃化冷冻仍缺乏统一的标准化程序。影响卵巢组织玻璃化冷冻保存效果的主要因素有卵巢组织块的大小、冷冻保护剂的种类、渗透平衡的时间和温度、冷冻载体等。随着低温生物学的发展和卵巢组织冷冻保存效果的提高,卵巢组织的移植已经具备了一定的临床应用可行性。到目前为止,全世界已有一系列关于冻存卵巢组织移植后成功妊娠及分娩的报道,移植成功的关键在于减少缺血再灌注损伤和促进新生血管的形成。

人类卵巢组织冷冻与移植的研究进展

女性的卵巢功能可因外界各种刺激、疾病、衰老等而逐渐衰竭。在卵巢功能尚未完全丧失之前,冷冻保存与移植卵巢组织,是患者日后恢复内分泌及生育功能的一个新选择。该项技术适用于因疾病本身或疾病治疗过程中可能引起卵巢功能衰竭的患者。目前卵巢组织冷冻方案有慢速冷冻法、快速冷冻法和玻璃化冷冻法。移植方案可分为自体移植和异体移植,也可分为原位移植和异位移植。结合近年关于人类卵巢组织冷冻、移植的研究进展综述。