温胰蛋白酶消化法和冷消化法培养乳鼠心肌细胞的比较

目的探索一种经济、简单易行的心肌细胞培养方法。方法选用新生乳大鼠心肌细胞进行0.25%胰蛋白酶温消化法和冷消化法。结果与温消化相比,冷消化可获得较高的细胞存活率、24h生存率,而且在开始贴壁生长、出现搏动、形成所谓功能性合体细胞的时间和搏动频率等方面,冷消化法培养的心肌细胞都优于温消化法。结论虽然温胰蛋白酶消化法应用广泛,但冷消化能产生大量可存活细胞且较省力、经济、实验要求条件不高,故冷消化法优于温消化法。

胶原酶冷消化法分离制备罗非鱼肝细胞

目的研究罗非鱼肝细胞的分离提取的方法、鉴定。方法将鱼肝脏经D-Hank液反复洗涤后剪碎经IV型胶原酶消化后过滤、离心、经DMEM洗涤后用Percoll分离液行肝细胞纯化、细胞计数,光镜下观察其形态结构。结果胶原冷消化法分离后的细胞中仍含有一定量的杂细胞,可采用90g,60g,30g离心进一步分离提纯。结论胶原酶冷消化法获得满意结果,60g离心2min和30g离心3min可达到纯度和产量均较理想的结果。

ADA冷消化尿样砷铈催化反应计时测定尿碘

目的研究一种适于现场快速检测尿碘的方法。方法采用自制消解液ＡＤＡ在室温下５～１０分钟内消解尿样（冷消化），利用碘催化砷铈反应的原理，通过指示剂Ｆｅｒｏｉｎ指示反应终点，用秒表计录反应时间测定尿碘。结果测定的尿碘范围为５～４００μｇ／Ｌ，最低检出浓度为５μｇ／Ｌ（０．２ｍｌ尿样），批间测定的变异系数≤６．０％，平均回收率为９５．２％，对碘含量为１１９和１９７μｇ／Ｌ的尿碘标准物质测定的平均相对误差均为１．８％，对２７份尿样测定结果与国标法相比无显著性差异（Ｐ＞０．５）。结论提出了一个简易、快速。

人脐带间充质干细胞生物特性比较:胰酶冷消化和组织块法体外培养

背景:以往采用胰酶冷消化法培养脐带间充质干细胞的研究较少。目的:比较两种方法体外培养人脐带间充质干细胞的生物学特性。方法:采用胰酶冷消化法和组织块法从人脐带中分离、纯化和传代培养人脐带间充质干细胞,记录首次出现贴壁细胞时间及原代培养周期,倒置相差显微镜观察脐带间充质干细胞的形态及生长情况,制作第3代脐带间充质干细胞生长曲线,流式细胞仪分析检测第3代脐带间充质干细胞表面标志的表达,第3代脐带间充质干细胞加入成神经诱导培养基诱导分化第3天行荧光免疫化学染色检测Nestin的表达。结果与结论:使用上述两种方法均可获得脐带间充质干细胞,胰酶冷消化法首次出现贴壁细胞时间早于组织块法(P<0.05);原代培养周期差异无显著性意义(P>0.05)。倒置相差显微镜下细胞均为贴壁生长,形态为成纤维细胞样,但胰酶冷消化法培养的少数原代细胞呈多角形,不规则,细胞的体积较组织块法大。组织块法获得第3代细胞的增殖速率显著快于胰酶冷消化法,在进入对数生长期后各个时间点细胞数量差异有显著性意义(P<0.05)。两种细胞具有均一的细胞表型,均表达CD29,CD105,不表达CD34,CD45。两种方法培养出来的第3代脐带间充质干细胞经诱导后,免疫荧光均显示神经干细胞特征性标志物nestin阳性表达。结果表明胰酶冷消化法与组织块法均能培养出脐带间充质干细胞,但组织块法更适合于此类细胞的培养,对细胞的伤害更低。

冷原子吸收法测定尿汞消化方法的比较

目的 通过对3种前处理方法比较,以找出冷原子吸收法测定尿汞最佳的前处理方法。方法 采集30例正常人尿液,分别进行不同的前处理,然后采用冷原子吸收法测定其尿汞的浓度,进行数据分析。结果 这3种前处理方法中,回收率最好的是恒温消化法,其次是冷消化法,再次是热消化法。它们的变异系数分别是:恒温消化法6.80％,冷消化法7.86％,热消化法16.14％。t检验表明3种方法互相之间差异均有非常显著性,恒温消化优于冷消化法和热消化法。结论 冷原子吸收法测定尿汞的消化方法以恒温消化法为最佳选择。

冷酶消化法在分离和培养新生大鼠Schwann细胞的应用

Schwann细胞(SCs)是公认的周围神经组织工程的种子细胞,在周围神经损伤后的再生中扮演着重要的角色。为了快速分离和培养大量的SCs,本研究采用冷酶消化法对Wister乳鼠坐骨神经的细胞进行分离和培养,结果得到的细胞数量超过106,经S-100蛋白免疫组化染色鉴定,SCs的纯度超多了90%。从培养细胞的形态和生长曲线可见,冷酶消化法是一种简单快捷地分离SCs的方法,使用该法得到的SCs具有良好的生物学特性,并在细胞的分离时间、数量、纯度以及生物活性等方面,均达到了实用要求。

冷酶消化法分离和培养新生大鼠许旺细胞

背景：常规酶消化法在许旺细胞分离培养实验中应用较多,但由于胰蛋白酶在37℃超过30min对细胞有毒性作用,会对许旺细胞的数量和纯度有一定的影响。目的：探索快速分离和培养大量许旺细胞的新方法。方法：采用4℃胰蛋白酶消化剥离好的乳鼠坐骨神经6~18h分离许旺细胞,培养一段时间,进行MTT实验绘制细胞生长曲线和苏木精-伊红染色和免疫组织化学染色观察许旺细胞的形态,并对阳性细胞进行计数。结果与结论：结果得到的细胞数量超过1×106,经抗S-100蛋白免疫组织化学染色对细胞进行鉴定,细胞纯度达到90%以上。从培养的细胞形态和细胞生长曲线可见,冷酶消化法是一种简单快捷的方法,其细胞具有良好的生物学特性,在分离时间、细胞数量和纯度、细胞的生物活性均达到临床上的要求。

尿中汞测定的氢化物发生—冷原子荧光光谱法

目的:建立测定尿汞的氢化物发生—冷原子荧光光谱法。方法:尿中的汞经硫酸和高锰酸钾冷消化后,用硼氢化钾将汞离子还原成游离基态汞原子,用XDY-2A型双道原子荧光光谱仪测定。结果:样品处理方法简单,汞挥发损失小。标准曲线线性范围好,相关系数0.9998～1.0000。仪器精密度相对偏差0.52%,方法精密度相对偏差2.80%,检出限0.048ng/ml。回收率96.58%～103.55%。结论:该法具有灵敏度高,检出限低,基体干扰少的优点,能为临床职业病诊断与中毒治疗提供准确依据。

山羊痘活疫苗羊睾丸细胞消化工艺优化试验

本试验采用冷热两种消化法对羊睾丸组织进行消化分离,分别进行原代细胞的培养,细胞长成单层后进行接毒,分别收获毒液配苗,并对半成品、成品进行测毒,结果表明,冷热两种消化方法相比较,冷消化法的作用较温和,对原代细胞的损伤较小,细胞活力较高,可明显的提高生产效率并大大降低生产成本。因此,这种方法可以大力推广,值得同行借鉴。

一种简便快速的消化方法及应用

有机物中微量元素的测定,需先用干式或湿式消化方法来破坏有机物。一般认为,干式消化会造成某些待测组分的损失,湿式消化虽克服上述问题,但操作复杂并带来环境污染。目前分析工作者们研究出一种消化仪,虽无上述缺点,但多样品时,除非一样一套,否则分析时间就会拖得很长。现介绍一种快速的冷消化法。

新生大鼠肝细胞分离及体外培养方法

背景:新生大鼠肝细胞是中度分化细胞,兼具肝祖细胞和成熟肝细胞的特性和功能,是研究肝细胞特性的理想细胞来源。目的:探讨新生大鼠肝细胞分离及体外培养方法。设计、时间及地点:细胞学体外实验,于2008-03/08在解放军总医院普通外科研究所完成。材料:SD新生大鼠,雌雄不限,3月龄。方法:采用组织块-胰酶冷消化法和多步低速离心获取新生大鼠肝细胞,给予含体积分数10%胎牛血清的HepatoZYME-SFM培养基体外二维培养。采用相差显微镜观察、MTT分析、PAS染色和脲酶法对培养的肝细胞生长及功能进行检测和分析。主要观察指标:肝细胞形态、活性,糖原水平,培养上清中的尿素浓度。结果:分离纯化的新生大鼠肝细胞总数1.0×106～2×106/肝,活力在90%以上,光镜下肝细胞呈圆形或卵圆形,核大而圆,胞体较成熟肝细胞小。通过多步低速离心可去除红细胞、其他非实质细胞和死亡的肝细胞,其纯度可达95%以上。肝细胞活性在培养初期即缓慢上升,至第3天时开始快速增殖,第11天时达到高峰,与第1天相比差异有显著性意义(P=0),但随后又缓慢降低,到15天时与第11天相比差异有显著性意义(P=0)培养的肝细胞贴壁生长,并保持肝细胞特异细胞形态。培养至第7天的肝细胞PAS染色呈强阳性,之后阳性细胞逐渐减少,至15d时可见少量阳性细胞。培养上清中尿素在培养初期基本没有变化,培养至第7天时显著下降。结论:组织块-胰酶冷消化法和HepatoZYME-SFM培养基二维培养为种简单有效的新生大鼠肝细胞分离培养方法。

朱砂中可溶性汞盐测定的探讨

通过不同的过滤方法对朱砂中可溶性汞盐进行测定,探索了影响可溶性汞盐含量的因素,提出能真实反映其含量的测定方法。

用于ICP-MS多元素分析的致病菌前处理方法

细菌样品所含脂肪、蛋白质以及有机物含量较少,但元素含量低,因此相对于步骤繁复的微波消解前处理,相对简单方便的冷消化法更适合此类样品。本文建立了一种简化的冷消化方法,用于细菌样品中无机元素分析的前处理。此方法采用浓硝酸直接在盛放样品的容器中消化细胞样品,然后直接定量进样。这个方法简化了细胞样品预处理的实验步骤,降低了被测物质损失和污染的可能性。通过与微波消解方法比对试验的结果发现,冷消化与微波消解两种方式处理的元素含量经过统计学分析无显著性差别(p>0.05)。同时浓硝酸冷消化样品检测浓度在微波消解样品测定值的±15%以内。加标回收率试验的回收率为91%~109%,精密度为0.4%~7.7%,方法符合检测要求,各项方法学指标均达到理想效果。

绵羊耳成纤维细胞的体外培养

用组织块法和冷消化法对绵羊耳成纤维细胞在含血清培养液 (RPMI -16 40 )中进行原代和传代培养 ,探讨动物体细胞培养模式 ,并对正常细胞形态进行观察。结果表明组织块法和冷消化法培养可获得比较均一、稳定的细胞群 ,细胞呈典型的成纤维形态 ,并成功进行传代培养 ,建立了绵羊耳成纤维细胞系。

3种尿碘检测方法的比对分析

目的对尿碘检测的2种定量方法和1种半定量方法进行正确度和精密度评价,并对2种定量方法进行比对分析,为临床尿碘检测方法的选择提供指导。方法采用3种方法对4个水平的碘标准物质进行批内30次测定,判断3种方法的正确度和精密度。收集体检尿液40份,采用2种定量方法分别对其进行检测,并进行配对t检验及线性回归分析。结果 2种定量尿碘检测方法的变异系数（CV）均小于6.1%,而半定量方法的CV很大（26.1%-36.4%）;而与标准物质定值的偏倚均小于10%。对2种定量方法结果[（480.996±266.499）μg/L vs（490.273±280.646）μg/L]进行配对t检验,结果差异无统计学意义（t=1.358,P〉0.05）;经线性回归分析,r=0.991,大于0.975。结论 2种定量尿碘检测方法的正确度和精密度较好,能够满足临床需求,半定量方法所得结果精密度差。2种不同尿液冷消化方式与传统热消化方式的消化效果相同。

电感耦合等离子体-质谱法测定寄生虫细胞内痕量锑

为了研究利什曼原虫(Leishmania)对于含五价锑药物的抗药性机理而建立了一种测定细胞内痕量金属锑的方法。本文尝试使用浓硝酸冷消化法处理细胞样品,简化了实验步骤,降低了被测物质损失和污染的可能性。电感耦合等离子体-质谱(ICP-MS)作为检测手段令本方法测定金属锑的最低检出浓度达到0.036μg?l-1,线性范围达到1.0-80ng?ml-1,加标回收率为98.0-110.0%,日间精密度≤1.63%。本方法较为简单,结果准确可靠,已经应用于寄生虫的金属抗药性研究,所获结果完全符合预期的实验模型。

原子吸收光谱法微量测定生物样品汞含量的改进

汞由于其易蒸发吸附性强,在生物样品中含量微等特点,给测定分析带来一定的困难。Magos(1971)测定生物样品中的总汞、无机汞及有机汞,被公认为足够灵敏和精确。1981年Farant改进了反应瓶,使分析所用样品和试剂在为减少,更提高了灵敏度和准确性。然而,

两种方法培养人胎盘间充质干细胞的生物特性比较

背景:胎盘间充质干细胞能够为细胞治疗提供理想的种子细胞,但其培养未曾使用过胰酶冷消化法,故对此方法进行探索,并与组织块法进行比较,从中筛选出一种方便易行、培养成功率更高的方法。目的:观察胰酶冷消化法与组织块法分离培养的人胎盘间充质干细胞的生物学特性。方法:采用胰酶冷消化法和组织块法从人胎盘中分离、纯化和传代培养人胎盘间充质干细胞(n=6)。记录胎盘间充质干细胞首次出现时间及原代培养周期,绘制第3代细胞生长曲线,流式细胞仪分析第3代细胞表面标志,检测其向成神经及成脂方向诱导分化能力。结果与结论:(1)使用上述2种培养方法均可获得胎盘间充质干细胞,胰酶冷消化法首次出现贴壁细胞时间早于组织块法(P <0.05),原代培养周期短于组织块法(P <0.05);(2)生长曲线提示在进入平台期后的各个时间点胰酶冷消化法培养的细胞数量明显多于组织块法(P<0.05);(3)2种细胞具有均一的细胞表型,均表达CD29,CD105,不表达CD34,CD45;(4)2种方法培养的胎盘间充质干细胞经诱导后均具有成神经及成脂分化潜能;(5)上述结果表明,对于胎盘间充质干细胞的培养而言,胰酶冷消化法具有明显优势。