冷缺血期一氧化碳和氢气联合膨肺对肺移植后大鼠肺损伤的影响

目的 观察冷缺血期一氧化碳(CO)和氢气(H_(2))联合膨肺对大鼠移植肺脏炎症反应的影响及机制。方法 选择成年SPF级雄性SD大鼠80只,40只供体和40只受体,8~10周龄,体重250~280 g。采用随机数字表法将大鼠分为四组:O_(2)膨肺组(O_(2)组)、CO膨肺组(CO组)、H_(2)膨肺组(H_(2)组)和CO和H_(2)联合膨肺组(CH组),每组10对(每对1只供体和1只受体)。供体大鼠切取左肺后,于冷缺血期进行气体膨肺,O_(2)组采用40%O_(2)+60%N_(2)膨肺,CO组采用0.05%CO+40%O_(2)+59.95%N_(2)膨肺,H_(2)组采用3%H_(2)+40%O_(2)+57%N_(2)膨肺,CH组采用0.05%CO+3%H_(2)+40%O_(2)+56.95%N_(2)膨肺,四组体积均为5 ml/kg,每30分钟使用气密针置换气体1次,180 min后行肺移植。受体大鼠于移植前即刻、再灌注后3、60、120、180 min进行血气分析,记录PaO_(2)/FiO_(2)、pH和碱剩余(BE)。再灌注后180 min处死受体大鼠,测定移植肺组织湿/干重比(W/D),采用ELISA法检测移植肺组织白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)浓度及髓过氧化物酶(MPO)含量。检测移植肺组织支气管肺泡灌洗液(BALF)中性粒细胞百分比,采用高效液相色谱法检测BALF中大聚积体(LA)、小聚积体(SA)和LA/SA。采用Western blot法检测移植肺组织表面活性蛋白A(SP-A)和核转录因子-κB(NF-κB)蛋白含量。采用HE染色法观察移植肺组织病理形态并进行肺组织损伤评分(LIS)。结果 与O_(2)组比较,CO组、H_(2)组和CH组受体大鼠再灌注后60、120、180 min PaO_(2)/FiO_(2)、pH、BE均明显升高(P<0.05),移植肺组织W/D、IL-6、IL-1β、TNF-α浓度、MPO含量、中性粒细胞百分比、SA、NF-κB蛋白含量和LIS均明显降低(P<0.05),IL-10浓度、LA、LA/SA和SP-A蛋白含量明显升高(P<0.05)。与CO组比较,H_(2)组和CH组受体大鼠再灌注后120、180 min PaO_(2)/FiO_(2)、pH、BE均明显升高(P<0.05),CH组移植肺组织W/D、IL-6、IL-1β、TNF-α浓度、MPO含量、中性粒细胞比、SA、NF-κB蛋白含量和LIS明显降低(P<0.05),IL-10浓度、LA、LA/SA和SP-A蛋白含量明显升高(P<0.05)。与H_(2)组比较,CH组受体大鼠再灌注后120、180 min PaO_(2)/FiO_(2)、pH、BE均明显升高(P<0.05),移植肺组织W/D、IL-6、IL-1β、TNF-α浓度、MPO含量、中性粒细胞百分比、SA、NF-κB蛋白含量和LIS均明显降低(P<0.05),IL-10浓度、LA、LA/SA和SP-A蛋白含量明显升高(P<0.05)。结论 冷缺血期CO和H_(2)联合膨肺抑制移植肺脏炎症反应,降低NF-κB蛋白含量、升高SP-A蛋白含量、维持肺泡表面活性物质稳定。

无肝期、冷缺血期、热缺血期对小儿活体肝移植术中肝功能影响的研究

目的探讨小儿活体肝移植术中无肝期、冷缺血期、热缺血期对术中肝功能影响,为指导临床手术提供帮助。方法 2006年6月至2009年3月共收治23例肝移植患儿,分别记录术中无肝期、冷缺血期、热缺血期时间及术中肝功能,分析肝功能变化与术中无肝期、冷缺血期、热缺血期长短是否相关。结果术中无肝期长短与无肝期后总胆红素(TB)上升明显相关(r=0.82,P<0.000 1)。除此之外,术中无肝期、冷缺血期、热缺血期长短与术中肝功能变化无关。结论小儿活体肝移植无肝期长导致未结合胆红素无法经肝代谢为结合胆红素而排出体外,可引起总胆红素上升。因活体肝移植较全肝原位肝移植冷、热缺血时间均短,因此,对术中肝功能影响较小。

肺保存液复合硫化氢对大鼠供体肺冷缺血期肺组织内质网应激的影响

目的 探讨供体肺保存液中加入外源性硫化氢(H2S)对大鼠供体肺冷缺血期肺组织内质网应激的影响。方法 将28只健康雄性SD大鼠分为对照组、LPD组和硫氢化钠(NaHS)组。NaHS组即在低钾右旋糖酐液(LPD液)中加入NaHS,并根据不同剂量(20 mmol/L和40 mmol/L)进一步分为NaHS20组和NaHS40组。对照组大鼠处死后用LPD液行肺灌注后即取标本保存待检,后3组大鼠放血处死后分别用相应的液体行肺灌注后行低温保存肺脏2 h。测定肺组织匀浆中H2S含量、H2S生成酶胱硫醚-γ-裂解酶(CSE),观察肺组织中细胞凋亡的情况。采用免疫印迹(Westernblot)法测定肺组织中GRP78及PERK蛋白表达。结果 与对照组相比,LPD组肺组织中H2S含量及CSE活性无显著变化(P >0.05),NaHS组H2S含量及CSE活性显著升高(P<0.05),不同剂量NaHS组间比较,差异无统计学意义(P >0.05)。与对照组相比,LPD组及NaHS组凋亡细胞百分比显著升高(P<0.05);与LPD组相比,NaHS组凋亡细胞百分比显著降低(P<0.05);NaHS组间相比,差异无统计学意义(P >0.05)。与对照组相比,LPD组及NaHS组肺组织GRP78及PERK蛋白表达显著增加(均P<0.05);与LPD组相比,NaHS组GRP78及PERK蛋白表达显著下降(P<0.05),NaHS组间差异无统计学意义(P >0.05)。结论 肺保存液中复合H2S可显著增加肺组织中H2S含量及CSE活性,降低内质网应激相关蛋白GRP78及PERK蛋白表达,减少细胞凋亡。

冷缺血期氢气膨肺对氧化应激和细胞凋亡的影响

目的观察冷缺血期氢气膨肺对移植肺脏氧化应激和细胞凋亡的影响。方法冷缺血期,对照组(control组)采用40%氧气+60%氮气膨肺,氢气组(H2组)采用3%氢气+40%氧气+57%氮气膨肺,20min置换一次肺内气体,180 min后肺移植。受体于移植前、再灌注3 min、60 min、120 min、180 min行动脉血气分析,再灌注180 min时检测移植肺组织丙二醛(MDA)浓度和超氧化物歧化酶(SOD)活性,观察细胞凋亡及caspase-3蛋白表达情况,并行肺组织损伤评分(LIS)。结果与control组相比,再灌注120 min、180 min H2组氧和指数(Pa O2/Fi O2)、BE值、p H值显著增加(P<0.05)。H2组MDA浓度、LIS、caspase-3蛋白表达和细胞凋亡显著低于control组,SOD活性显著增加(P<0.05)。结论冷缺血期氢气膨肺能够抑制移植肺脏氧化应激损伤和细胞凋亡。

冷缺血期氢混合气膨肺对大鼠肺移植后的能量代谢保护作用

目的探讨冷缺血期氢混合气膨肺对大鼠肺移植后能量代谢的保护作用。方法健康雄性SD大鼠42只,8~10周龄,体重250~300 g,随机取21只大鼠为供体大鼠,其余21只为受体大鼠,采用随机数字法将两组大鼠进一步分为三个亚组(每组7只):对照组、氧气组和氢气组。冷缺血期对照组不使用气体膨肺,氧气组采用40%O2+60%N2膨肺,氢气组采用3%H2+40%O2+57%N2膨肺,2 h后肺移植。受体大鼠于肺移植前、再灌注3 min、1、2 h时行动脉血气分析检测PaO2、PaCO2、pH、碱剩余(BE),计算氧合指数(OI),留取血清与移植肺组织,术后2 h采用ELISA法检测血清白介素-8(IL-8)、白介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度。肺组织HE染色,记录肺组织损伤评分(LIS)。采用ELISA法检测肺组织中乳酸(Lac)、丙酮酸(PA)、三磷酸腺苷(ATP)浓度,采用透射电镜观察肺线粒体结构。结果与对照组比较,再灌注2 h氢气组、氧气组pH、BE、OI明显升高(P<0.05);与对照组比较,氢气组、氧气组血清IL-8、TNF-α浓度明显降低,IL-10浓度明显升高(P<0.05)。与氧气组比较,再灌注2 h氢气组OI、pH、BE明显升高(P<0.05);与氧气组比较,氢气组血清IL-8、TNF-α浓度明显降低,IL-10浓度明显升高(P<0.05)。LIS评分氢气组明显高于氧气组(P<0.05)。对照组移植肺组织肺泡中有大量透明膜形成,肺泡内出血明显,肺泡隔和肺泡重度水肿,大量中性粒细胞浸润;氢气组、氧气组移植肺组织病理损伤程度轻于对照组,氢气组轻于氧气组。与对照组比较,氧气组和氢气组受体大鼠移植肺组织中Lac、PA浓度明显降低(P<0.05),ATP浓度明显升高(P<0.05),移植肺组织线粒体的面积、周长、费雷特径明显增大(P<0.05),线粒体圆度明显降低(P<0.05),嵴紊乱比例明显小于氧气组(P<0.05)。结论冷缺血期氢混合气膨肺能提高大鼠移植肺氧合功能,降低乳酸/丙酮酸比值,减轻炎症反应,部分改善肺损伤,提高组织ATP含量,保护肺线粒体,对移植肺的能量代谢功能具有保护作用,这种效果可能是通过对线粒体保护作用而产生的。

冷缺血期间经一氧化碳膨肺减轻大鼠移植肺缺血再灌注损伤

目的观察冷缺血期经一氧化碳（CO）膨肺对大鼠肺移植后肺缺血再灌注损伤（IRI）的作用以及作用机理。方法取SD大鼠24对建立大鼠肺移植模型，采用随机数字表法将24只受鼠分为3组，每组8只。（1）一氧化碳膨肺组（CO组）：在供肺冷缺血期，采用体积分数为百万分之500的CO＋体积分数40％O2＋N2膨肺，气体体积为5ml／kg；（2）氧气膨肺组（02组）：在供肺冷缺血期，采用体积分数40％O2＋体积分数60％N2膨肺；（3）对照组：不使用气体进行膨肺处理。O2组和CO组每30min置换气体1次，180min冷缺血期完毕后行肺移植。分别于移植前，再灌注即刻，以及再灌注后60、120和180min采集各组受鼠的血液样本进行血液气体分析；再灌注180min时，检测各组受鼠血清中相关炎症因子及移植肺组织细胞凋亡和NF-κB蛋白的表达情况。结果再灌注180min时，O2组受鼠氧合指数为（293±78）mmHg，CO组为（361±48）mmHg，均较对照组的（238±61）mmHg明显升高（P〈0．05）；与O2组相比，CO组氧合指数显著增加（P〈O．05）。同样，与对照组相比，O2组和CO组血清IL-8、TNF-α及凋亡细胞明显降低，与O2组相比，CO组IL-8、TNF-α及凋亡细胞显著降低，NF-κB蛋白表达明显降低（P〈0．05）。结论冷缺血期应用CO膨肺通过抑制NF-κB介导的炎症反应和细胞凋亡从而减轻了大鼠肺缺血再灌注损伤。

氢分子及其制品对肺移植保护作用的研究进展

肺移植术后缺血-再灌注损伤是导致原发性移植物功能障碍的主要原因,进而会降低肺移植受者的移植肺功能和总体生存率。氢分子作为一种生理调节性分子,具有抗炎、改善氧化应激、减轻直接细胞损伤和缓解上皮细胞水肿等作用。近年来,越来越多的研究证明氢分子及其制品(主要是氢气和富氢溶液)可以显著改善肺移植术后缺血-再灌注损伤等并发症。本文就氢分子及其制品在肺移植中的保护作用及具体机制进行回顾总结,旨在为氢分子及其制品作为一种新的肺移植相关并发症治疗手段提供理论依据,进而改善肺移植受者的总体预后及生活质量。