冷诱导RNA结合蛋白表达在颅脑损伤大鼠亚低温治疗中的作用及机制

目的探讨冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)表达在颅脑损伤(TBI)大鼠亚低温(MH)治疗过程中的作用,并分析其机制。方法将大鼠随机分为A、B、C组,分别一次性鞘内注射0.1 m L生理盐水、空白AD5-GFP、AD5-GFP-CIRP-siRNA;每组再分为4个亚组,即假手术组(Sham组)、TBI组、MH组、TBI+MH组。TBI、TBI+MH组采用液压打击装置进行TBI造模,Sham组及MH组不予打击;TBI造模成功后,MH组、TBI+MH组行MH治疗48 h。于MH开始治疗后30 min及6、12、24、48、72 h,采用Western blot法检测下丘脑部位CIRP、Ras、Raf、ERK-1/2、pERK-1/2蛋白;MH开始治疗后96 h取大鼠脑皮层、海马、下丘脑部位脑组织,采用TUNEL法检测凋亡脑细胞、RTPCR法检测CIRP mRNA。结果 A、B、C组中,TBI、TBI+MH组皮层、海马、下丘脑部位神经细胞凋亡指数均较Sham、MH组升高(P均<0.05);A、B组中,TBI+MH组各部位神经细胞凋亡指数较TBI组降低(P均<0.05),且该组下丘脑部位较皮层、海马区神经细胞凋亡指数下降明显(P均<0.05);在C组中,TBI+MH组各部位神经细胞凋亡指数较TBI组无差异(P均﹥0.05)。在A、B组中,MH、TBI+MH组各部位CIRP mRNA较Sham组升高(P均<0.05),下丘脑部位较皮层、海马区CIRP mRNA表达升高(P均<0.05);而在C组中,TBI、MH、TBI+MH组各部位CIRP mRNA较Sham组均无差异(P均﹥0.05),各部位CIRP mRNA表达无差异(P均﹥0.05)。在A、B组中,TBI组CIRP蛋白自创伤后12、24 h较创伤后30 min升高(P均<0.05),随后开始下降,在48、72 h无差异(P均>0.05);MH、TBI+MH组CIRP蛋白表达自MH开始后6 h升高(P均<0.05),于48 h达高峰,72 h呈下降趋势;在C组中,各组CIRP蛋白表达均无差异(P均>0.05)。TBI、MH、TBI+MH组Ras激活度(Ras/Raf值)均进行性升高,于24 h达到峰值,随后进行性下降;MH、TBI+MH组可导致ERK-1/2激活度(p-ERK-1/2/ERK-1/2值)峰值前移,并迅速降低其激活度,而C组中MH、TBI+MH组此作用消失。结论在MH治疗TBI过程中,CIRP因低温作用而在皮层、海马、下丘脑部位过表达,其中下丘脑部位更加明显;CIRP作用机制可能通过直接调控ERK-1/2激活,使其激活度随时间推移迅速降低,减少对应部位脑组织细胞凋亡,从而发挥神经保护作用。