应用冷Schiff组织化学法检测人体组织脂质过氧化反应的研究

自由基引发的生物膜不饱和脂肪酸脂质过氧化反应涉及多种疾病过程。多年来检测脂质过氧化反应一直沿用生物化学 (如硫代巴比妥酸法测定丙二醛 )或生物物理技术 (如分光光度法测定共轭双烯 )。自从冷 Schiff组织化学染色技术用于自由基研究以来 ,使形态学方法研究脂质过氧化反应成为可能。当前 ,应用冷 Schiff组织化学法进行组织细胞的脂质过氧化反应检测大多限于动物实验研究。本研究对多种人体离体新鲜组织的冰冻切片应用冷 Schiff组织化学法进行检测 ,未发现被测组织存在组织化学水平上的脂质过氧化反应 ;但对被测组织人为施加氧化攻击 (用 Fe- NADPH促氧化剂孵育 )后 ,肝、肾及胃的泌酸细胞与其它组织相比呈现较明显的脂质过氧化反应 ;皮肤、脂肪组织几乎不出现脂质过氧化反应 ;甲状腺 C细胞、肌肉、骨骼等与钙代谢、贮存及利用相关的组织也出现较明显的脂质过氧化反应。结论 :冷 Schiff组织化学方法检测人体组织脂质过氧化反应具有简便易行、同时可以形态学定位的优点 ,在医学生物学、肿瘤学及老年医学研究中具有应用前景。

耐力运动联合间歇性冷刺激促进大鼠白色脂肪组织棕色化

目的探讨耐力运动和间歇性冷刺激对肥胖大鼠棕色脂肪组织活性及白色脂肪组织棕色化的影响及机制。方法52只SD雄性肥胖大鼠分为常温对照组(NC组)、间歇性冷刺激组(IC组)、耐力运动组(EE组)和耐力运动联合间歇性冷刺激组(EI组),每组13只,常温对照组环境温度为24~26℃;运动组采用动物跑台运动,跑速为20 m/min,坡度为0°,每次运动50 min,运动2次,中间间歇20 min;冷刺激组在环境温度为4℃下暴露4 h(低温仓内),每周刺激6 d,持续4周;持续刺激4周后,正电子发射断层显像/X线计算机体层成像(PET/CT)检测大鼠肩胛区棕色脂肪组织(BAT)代谢情况及腹股沟区白色脂肪组织(iWAT)棕色化情况;称体重、量体长、取材,采集血样检测血脂4项;免疫组织化学和Western blotting检测大鼠BAT和iWAT线粒体解耦联蛋白1(UCP1)、血管内皮生长因子A(VEGF-A)、p38 MAPK、过氧化物酶体增殖物激活受体-γ共激活因子-1α(PGC-1α)蛋白表达。结果IC组、EE组、EI组大鼠体重及血清总胆固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)显著降低。PET/CT显示,在BAT中,IC组、EE组、EI组最大标准摄取值(SUVmax)显著升高;在iWAT中,EI组SUVmax显著升高。免疫组织化学显示,IC组、EE组、EI组脂肪细胞的数目增多,密度增高,iWAT脂肪细胞中呈现棕色脂肪样细胞。Western blotting显示,在BAT中,IC组、EE组、EI组UCP1蛋白表达水平显著升高;在iWAT中,IC组、EE组、EI组UCP1、PGC-1α蛋白表达水平明显升高;IC组、EI组p38 MAPK蛋白表达水平明显升高;EE组、EI组VEGF-A蛋白表达水平明显降低。结论3种实验方案干预后均能促进肥胖大鼠棕色脂肪组织活化并且促进白色脂肪组织棕色化,以间歇性冷刺激联合耐力运动作用最为显著。

冷酶消化法分离和培养新生大鼠许旺细胞

背景：常规酶消化法在许旺细胞分离培养实验中应用较多,但由于胰蛋白酶在37℃超过30min对细胞有毒性作用,会对许旺细胞的数量和纯度有一定的影响。目的：探索快速分离和培养大量许旺细胞的新方法。方法：采用4℃胰蛋白酶消化剥离好的乳鼠坐骨神经6~18h分离许旺细胞,培养一段时间,进行MTT实验绘制细胞生长曲线和苏木精-伊红染色和免疫组织化学染色观察许旺细胞的形态,并对阳性细胞进行计数。结果与结论：结果得到的细胞数量超过1×106,经抗S-100蛋白免疫组织化学染色对细胞进行鉴定,细胞纯度达到90%以上。从培养的细胞形态和细胞生长曲线可见,冷酶消化法是一种简单快捷的方法,其细胞具有良好的生物学特性,在分离时间、细胞数量和纯度、细胞的生物活性均达到临床上的要求。