冻干人凝血酶原复合物的生产工艺研究

目的冻干人凝血酶原复合物的生产工艺和病毒灭活工艺的研究。方法对比两种生产工艺和两种不同类型的灭活方法对制品质量的影响。结果采用以血浆为原料生产的制品,4种凝血因子活性均保持较高水平;制品经过S/D病毒灭活,4种凝血因子活性回收率分别在78%以上;制品经过(100±0.5)℃灭活,4种凝血因子活性基本没有降低。结论采用以血浆为原料生产人凝血酶原复合物优于其他方法;为保证制品安全,同时采用S/D灭活和(100±0.5)℃灭活30m in对制品是必须的且对制品的活性基本没有影响。

冻干人凝血酶原复合物治疗肝硬化凝血功能障碍的临床研究

目的:观察凝血酶原复合物治疗肝硬化凝血功能障碍患者的疗效。方法:凝血酶原复合物300PE加注射用水250ml静脉滴注,每天2次,连续用药3天。观察临床症状、体征的变化,测定用药前一天和治疗后次日APTT、PT及VII因子的水平。结果:经治疗,患者APTT、PT较治疗前缩短,其中PT的缩短有统计学意义;VII因子含量显著高于治疗前。19例治疗前有上消化道出血患者中16例3天内止血,另3例5天内止血,住院期间无一例继续或再次发生消化道出血。结论:凝血酶原复合物应用于肝硬化伴凝血功能障碍患者能提高患者血浆凝血因子浓度,缩短凝血酶原时间,达到止血和预防出血的目的。

国产冻干人凝血酶原复合物的质量分析

目的 分析国产冻干人凝血酶原复合物的质量。方法 对国内７个血液制品生产单位１９９３年以 后原料血浆经ＨＢｓＡｇ、ＨＣＶ－Ａｂ、ＨＩＶ－Ａｂ筛选和病毒灭活生产的３９批ＰＣＣ与１９９３年以前原料血浆未经ＨＣＶ－Ａｂ筛选 和病毒灭活生产的１０批ＰＣＣ进行质量比较。结果１９９３年以后生产的ＰＣＣ，ＨＣＶ－Ａｂ阳性检出率明显低于１９９３年 以前生产的ＰＣＣ，但中国的质量标准和国产的ＰＣＣ质量与国际同类产品质量标准均有差距。结论 国产ＰＣＣ的 ＦＩＸ效价比国际标准低，而肝素含量比国际标准高。

国产冻干人凝血酶原复合物质量标准的研究

目的通过对国产人凝血酶原复合物 (PCC)质量的研究 ,建立与国际接规的质量标准。方法用人凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ (FⅡ、FⅦ、FⅨ、FⅩ )浓制剂国家标准品 ,采用一期法测定国内用不同原料制备的PCC中FⅡ、FⅦ、FⅨ、FⅩ的效价 ;用正常人血浆作标准 ,用凝固法检测PCC的总效价及PCC中的肝素。结果用血浆作原料提纯制备的PCC ,FⅣ的效价能达到 1 0IU/ml以上 ,FⅦ效价最低 ;用组分Ⅲ作原料 ,FⅣ活性损失很大 ,只有 2 / 7批次能达到 1 0IU/ml;而FⅦ效价最高。无论用何种原料 ,FⅡ和FⅩ活性均能保持在一定水平。结论从血浆中直接提纯制备PCC ,能有效地保持FⅣ活性 。

人凝血酶原复合物在肝移植围术期的应用和探讨——附2例报道

目的 探讨人凝血酶原复合物(prothrombin complex concentrate,PCC)在肝移植围术期的应用。方法 分析2例肝移植患者围术期使用人凝血酶原复合物的治疗过程,并结合国内外相关文献内容探讨PCC在肝移植围术期的应用。结果 2例患者在肝移植术前存在不同程度的凝血功能障碍,术中和术后曾多次联合或单独输注血浆、PCC和冷沉淀。2例患者术后一段时间凝血功能有所好转,腹部彩超移植肝内未见血栓。患者1经治疗后好转出院;患者2肝功能好转但因多种并发症,病情逐渐恶化。结论 PCC在肝移植受者围术期的运用可能有助于患者凝血功能的改善,但肝移植受者围术期的凝血功能复杂易变,应充分考虑PCC可能导致的血栓风险。

人凝血酶原复合物提取及其合并血浆制备血液制品的质量风险分析

目的:旨在分析从人血浆中提取人凝血酶原复合物(Prothrombin Complex Concentrate,PCC)及合并血浆生产其他血液制品过程中可能存在的质量风险,为相关企业和监管部门提供风险提示和控制措施建议,以保障公众用药安全。方法:通过文献调研与实际工作经验,分析人血浆提取PCC及合并血浆制造血液制品的工艺流程及质量控制措施,评估PCC工艺过程对人血白蛋白与免疫球蛋白的安全性及有效性影响。重点从工艺参数、人员、设备、文件及法规等角度,比较从人血浆直接制造人血白蛋白、静注人免疫球蛋白与提取PCC后合并血浆制造的工艺差异,并进行风险分析,提出控制措施。结果与结论:PCC制备工艺的选择、原料特性的把握及质量控制,以及关键工艺参数的优化和管理,对PCC及其提取后合并血浆生产的其他血液制品的质量至关重要。通过对PCC制备工艺、原料特性研究及工艺变更风险的分析,提出了风险提示和相关建议,供企业与监管部门参考。

生长抑素联合人凝血酶原复合物治疗肝硬化并发上消化道出血的效果观察

评估生长抑素与人凝血酶原复合物联合疗法在肝硬化并发上消化道出血治疗中的疗效。方法 随机选取2021年11月—2023年11月本院收治的60例肝硬化并发上消化道出血患者为研究对象,利用数字表法将其分为两组,每组30例。两组均进行基础治疗,同时,常规组患者采用生长抑素进行治疗,探究组患者实施生长抑素联合人凝血酶原复合物治疗治疗,分析对比两组疗效。结果 探究组临床治疗成效、凝血功能指标优于常规组(P<0.05);探究组患者不良反应发生率与常规组相比,无差异(P>0.05)。结论 生长抑素与人凝血酶原复合物的联合治疗在肝硬化并发上消化道出血的治疗中展现了更优的效果,不仅未提升不良反应的发生率,而且显著提升了患者的凝血功能。

人凝血酶原复合物冻干保护剂及冻干工艺的研究

目的对人凝血酶原复合物冻干保护剂及冻干工艺进行研究,生产出符合中国药典要求的产品,提高人凝血因子Ⅸ回收率。方法通过对冻干保护剂甘氨酸不同添加浓度的研究比较,得到最佳的甘氨酸添加浓度;探讨不同冻干工艺对人凝血酶原复合物的影响,优化得到最佳冻干工艺。结果冻干保护剂甘氨酸的最佳添加浓度为20 g·L^(-1);最佳冻干工艺为:制品快速降温到-45.0℃保持3 h冻结,退火到^(-1)5℃,再冻结,保持3 h后,抽真空,真空度保持在10 Pa左右后,开始加热,升温至0℃升华;升华完毕,梯度升温(每小时升高10~20℃);制品温度升至30℃后,制品进入干燥最后阶段,保持数个小时,温度不超过35℃。结论通过对人凝血酶原复合物处方及冻干工艺进行优化,制备出了符合中国药典要求的冻干产品,人凝血因子Ⅸ收率提高了约18%。

人凝血酶原复合物冻干工艺的研究

为建立最优的人凝血酶原复合物(PCC)冻干工艺,先通过实验确定共晶点,再采用正交实验法,对PCC真空冷冻干燥过程的预冻时间、主要干燥温度、主干燥时间、解吸温度和真空压力等关键参数进行研究。获得PCC最优的冻干工艺:-40℃预冻1h;主要干燥温度从-40℃升温至-28℃,再从-28℃升温至5℃,总耗时22 h,真空压力为25 Pa;解析温度维持在33℃,真空压力为5 Pa,终点测试压力无变化时结束。通过该工艺冻干出的PCC符合《中国药典》2010年版三部该项下的质量要求,经验证该冻干曲线能够应用于人凝血酶原复合物的大规模生产。

改良凝胶吸附法制备的凝血酶原复合物

采用ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ５０和ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ凝胶从人血浆中吸附制备经Ｓ／Ｄ病毒灭活处理后的ＰＣＣ制品，ＤＥＡＥ洗脱液经Ｓ／Ｄ处理（０．３％磷酸三丁脂和１％Ｔｗｅｎ８０，６～８ｈ，２４℃）后，使所加入具有感染剂量（＞１０６）的标志病毒ＶＳＶ、Ｓｉｎｄｂｉｓ、ＨＩＶ均被有效灭活；ＰＣＣ制品中Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ因子的比活性（Ｕ／ｍｇ）分别为０．７９９±０．３４９、０．３４３±０．２５２、０．７４７±０．３４８、０．５８０±０．１９９（ｎ＝７），均比传统ＰＣＣ提高１．５～２．５倍（其中ＦⅨ∶Ｃ的比活性提高有显著性，ｔ＝３．１０５，Ｐ＜０．０１），同时也优于国内同类制品（ｔ＝２．３６０，Ｐ＜０．０５），对其杂蛋白（ＡＴ－Ⅲ、Ｆｎ、ＰＫＡ、Ｐｌｇ、ⅧＲ∶Ａｇ抗Ａ、抗Ｂ凝集素）的分析也反映出ＰＣＣ纯度有所提高。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、ＩＥ、ＣＩＥ电泳图谱及ＨＰＬＣ层析图谱证实上述结果，ＰＣＣ中ＴＮＢＰ残留量≤１０μｇ／ｍｌ，Ｔｗｅｅｎ８０残留量≤１００μｇ／ｍｌ，均在安全范围内。

膜径向离子交换色谱分离凝血酶原复合物

利用径向离子交换色谱法分离纯化了Nitschmann组分Ⅲ中的凝血酶原复合物 ( prothrombincomplexconcentrate ,PCC) ,流动相为pH 7.5的Tris HCl缓冲液 ,色谱柱为XK 1 6DEAEfastflowSepharose ( 0 .8cmi.d .× 5cm)及膜DEAE径向色谱柱 ( 3.0cmi.d .× 5.8cm)。通过改变不同上样流速及洗脱流速 ,研究了流速对所分离的凝血酶原复合物的蛋白质量浓度及凝固活性的影响 ,为今后在血浆蛋白分离纯化中进一步推广使用径向色谱技术和放大实验提供了依据。

冷沉淀与凝血酶原复合物联合在大出血中的应用

目的:通过冷沉淀(CRYO)与凝血酶原复合物(PCC)联合和单独使用在大出血中疗效比较,探讨成分输血在创伤性失血中的联合应用。方法:对照组分别输注CRYO、PCC,观察组联合输注CRYO+PCC。测定两组输注前1h和输注后2～5h相关指标,活化部分凝活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT)、纤维蛋白原(FIB)变化情况。结果:观察组比对照组APTT、TT、PT明显缩短,FIB显著升高,差别有显著性意义(P<0.01)。结论:联合应用冷沉淀与凝血酶原复合物在创伤性失血患者治疗中,联合输注组比单独输注组疗效更显著。

采用两步凝胶吸附法制备人凝血酶原复合物的工艺研究

目的应用两步凝胶色谱法制备高纯度、高安全性的人凝血酶原复合物(PCC)制剂。方法检测合格的健康人血浆经离心去除冷沉淀后,采用DEAE-Sephadex A50进行吸附色谱,经洗涤、洗脱得到洗脱液,加入0.3%的磷酸三丁酯和1%的吐温80(S/D)进行病毒灭活;灭活后的制品再重新进行二次吸附色谱,洗涤、洗脱去除残留的S/D试剂的同时,进一步提高制品的纯度、效价等质量指标。结果最终制品的回收率达70%,比活、S/D残留量等各项指标达到药典标准。结论用所建立的工艺制备的PCC制剂的比活及安全性指标高于传统工艺制得产品。

凝血酶原复合物制备过程吸附条件的研究

目的探讨凝血酶原复合物制备过程凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ的吸附条件,提高活性收率。方法选择DEAE-SephadexA-50凝胶平衡体系中柠檬酸钠、氯化钠、pH 3种可变因素,每因素取3水平,根据L9(33)正交表设计试验,配制平衡液,分别对DEAE-SephadexA-50凝胶进行平衡处理后,按1.67g/L加入等量健康人混合去冷沉淀血浆,4℃搅拌,吸附凝血因子;吸附后凝胶洗涤、洗脱,检测洗脱液中凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ活性并进行活性回收率正交试验直观分析,获得较优吸附条件并进行验证。此外,分析吸附平衡体系电导率与4种因子活性收率间关系。结果柠檬酸钠、氯化钠、pH对凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ吸附影响不同;在所考察范围内,pH对4种凝血因子吸附影响效应趋势一致,pH越低,吸附效果越佳;柠檬酸钠及氯化钠浓度对4种凝血因子吸附影响效应趋势不一致,柠檬酸钠浓度越高,凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅹ吸附越佳,而凝血因子Ⅸ在(0.012～0.02)mol/L水平较佳;氯化钠浓度越低,凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ吸附越佳,而凝血因子Ⅹ在(0.1～0.14)mol/L水平较佳;平衡体系电导率与4种因子活性收率间不存在线性关系。结论吸附条件中pH及柠檬酸钠浓度对凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ吸附效果影响较大。柠檬酸钠(0.02～0.028)mol/L,氯化钠(0.02～0.06)mol/L,pH6.6～6.9条件,4种凝血因子吸附效果相对较佳。电导率对4种因子吸附效果影响不明显。

制备结合凝血酶原复合物超声造影剂的初步实验研究

目的以超声空化栓塞肿瘤微循环为目的,制备一种结合凝血酶原复合物(PCC)的超声造影剂,评价其理化性质。方法采用机械振荡整合法和表面吸附法分别制备结合PCC的负电荷脂膜超声造影剂(浮选法洗涤)。观察并检测洗涤前后微泡大小、形态、浓度、荧光亮度,微泡与PCC的结合率及Ⅸ因子的活性。结果结合PCC微泡的浓度、形态与普通微泡比较无明显差异,但易静置分层。微泡与PCC的结合率及Ⅸ因子活性:两种制备方法间比较无明显差异(P>0.05),洗涤前与相同浓度的PCC比较Ⅸ因子活性无明显差异(P>0.05),但洗涤后结合率均值由洗涤前的96%左右降为82%左右(P<0.05),活性由90%左右降为19%左右(P<0.01)。结论机械振荡整合法与表面吸附法均可制备结合PCC的超声造影剂,微泡与PCC结合率较高,洗涤前能保持Ⅸ因子较高的活性,两种方法间比较无明显差异。

洗脱条件及其因素对凝血酶原复合物有效成分的影响

目的探讨洗脱条件及其因素对凝血酶原复合物(PCC)中凝血因子(F)Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ及蛋白(P)C、S、Z、抗凝血酶(AT)8种有效成分收率及比活的影响。方法选择洗脱条件中柠檬酸钠、NaCl、pH 3种可变因素,每因素取3水平,根据正交表配制不同洗脱体系;采用DEAE-Sephadex A-50凝胶,相同平衡、洗涤条件及上述不同洗脱体系,批式吸附法制备PCC浓缩物;检测浓缩物中8种成分的活性或含量,获得各成分的收率及比活;正交试验分析不同洗脱条件及其因素对8种成分收率及比活的影响。结果不同洗脱条件8种成分收率及比活有一定差异,2.4 mol/L NaCl条件比活总体较高。在所考察范围内,柠檬酸钠对FⅡ、FⅨ、FⅩ、PC、AT收率和PC、PS、AT比活有较大影响;NaCl对FⅦ、FⅩ、PS、PZ收率和FⅡ、FⅦ、FⅨ、FⅩ、PZ比活有较大影响。不同水平条件,柠檬酸钠及NaCl含量越高,4种凝血因子收率与比活越高,但对4种抗凝蛋白收率及比活影响无规律;pH6.6水平,4种凝血因子收率较高,pH6.9,其比活较高,pH对4种抗凝蛋白收率与比活的影响无规律。结论洗脱条件中高浓度的NaCl可提高PCC的整体比活;低浓度的柠檬酸钠对PCC有效成分收率及比活也有较大影响;pH对PCC中凝血因子(FⅡ,Ⅶ,Ⅸ,Ⅹ)收率及比活的影响分别有共性,对抗凝蛋白(PC,PS,PZ,AT)的影响则无规律。

凝血酶原复合物对新生儿缺氧缺血性脑病凝血功能的影响

目的 了解在维生素K1治疗的基础上加用凝血酶原复合物 (PCC)对新生儿缺氧缺血性脑病 (HIE)凝血功能的影响。方法 将 5 5例胎龄 36～ 4 0周新生儿HIE患儿分成维生素K1组 (A组 )和维生素K1+PCC(B组 ) ,比较两组凝血酶原时间 (PT)、凝血酶原国际标准化比值 (INR)、凝血酶原百分活动度 (PT % )、部分凝血活酶时间 (PTT)、凝血酶时间 (TT)、纤维蛋白原 (FIB)等凝血功能分析结果 ,并对PT延长者予PCC后再进行复查。结果 B组与A组相比 ,仅FIB明显降低 (P =0 .0 0 5 4 ) ,而PT、INR、PT %、PTT、TT均无显著差异 ;对PT延长者给予PCC后 ,PT、PT %可恢复到正常范围 (P =0 .0 4 6 7,0 .0 0 0 98) ;比较A、B组脑CT检查 ,蛛网膜下腔出血的发生率无显著差异 (P >0 .0 5 )。结论 对新生儿HIE在给予维生素K1治疗基础上若PT无明显延长可不必加用PCC。