人用冻干无佐剂狂犬病疫苗的临床观察

目的观察人用冻干无佐剂狂犬病疫苗(武生欣宁)接种人体后的临床反应和免疫效果。方法40名健康者分别于0、3、7、14和28d接种疫苗,观察接种者副反应,并于接种后采血,用快速荧光灶抑制试验检测血清中和抗体水平。结果第1针和第2针接种后副反应率分别为2.5%和7.9%,后3针副反应率为0。免疫前抗体均为阴性,接种后第7天抗体阳转率为76%,第14天抗体水平GMT为9.42IU/ml,阳转率100%,第28天抗体水平GMT为9.83IU/ml,阳转率100%。结论人用冻干无佐剂狂犬病疫苗反应轻微,效果良好。

BCG-CpG-DNA佐剂人用狂犬病疫苗(MRC-5细胞)在食蟹猴体内的免疫原性

目的 评价BCG-CpG-DNA佐剂人用狂犬病疫苗(MRC-5细胞)在食蟹猴体内的免疫原性。方法 将食蟹猴随机分为对照组、3针组及4针组,经后肢肌肉免疫,1.0 mL/剂。3针组及4针组均接种BCG-CpG-DNA佐剂人用狂犬病疫苗,3针组于0 d、7 d、21 d各接种1剂,4针组于0 d、3 d、7 d、14 d各接种1剂;对照组接种市售国产同类疫苗,于0 d注射2剂、7 d及21 d各1剂。初免前(0 d)及初免后7 d、14 d、28 d、35 d、49 d、63 d后肢隐静脉采血,分离血清及外周血淋巴细胞。快速荧光灶抑制实验(Rapid Fluorescent focus Inhibition Test, RFFIT)及酶联免疫斑点检测技术(Enzyme-linked Immunospot Assay, ELISPOT)分别检测血清中抗狂犬病病毒中和抗体水平和外周血淋巴细胞中细胞因子IFN-γ、IL-2的表达水平。结果 食蟹猴血清中和抗体水平于免疫前均呈阴性(抗体效价<0.5 IU/mL),3针组和对照组在初免后7~28 d呈上升趋势,于28 d达最高,4针组在14 d达最高;在初免后28 d,对照组、3针组中和抗体水平显著高于4针组;初免后35 d,3针组中和抗体水平显著高于4针组,其余时间点同时间各组间差异均无统计学意义(P均>0.05)。3针组及4针组外周血淋巴细胞中IL-2及IFN-γ水平在7~14 d呈上升趋势,于14 d达最高,且3针组IFN-γ水平显著高于对照组,其余时间点同时间各组间差异均无统计学意义。结论 BCG-CpG-DNA佐剂人用狂犬病疫苗(MRC-5细胞)具有良好的免疫原性,具有优化狂犬病免疫接种程序的应用价值。

国产冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)的接种反应及其免疫原性

目的观察国产冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)的接种反应及其免疫原性。方法观察组200例和对照组50例暴露后,按照0、3、7、14、28d免疫程序,分别接种国产、进口冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)。观察组接种疫苗后,观察全身和局部反应情况。采用快速荧光灶抑制试验(RFFIT)检测观察组和对照组接种后的血清中和抗体水平。结果观察组疫苗接种后,局部红肿、硬结、疼痛、瘙痒发生率分别1.4%、0.8%、17.1%和2.4%;全身反应发热、皮疹、头痛、疲劳乏力和其他反应发生率分别为1.2%、0.4%、2.4%、4.2%和0.3%,且在第7天完全消失。观察组与对照组疫苗首剂接种后7d,抗体阳转率分别为40.3%和37.0%,14d分别为95.5%和97.7%,差异无统计学意义;且首剂接种后45d,抗体阳转率均为100%。观察组和对照组疫苗首剂接种后7、14、45d,血清中和抗体GMT差异无统计学意义,14、45d血清中和抗体GMT均大于0.5IU/ml。结论国产冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)接种反应轻微,并具有良好的免疫原性。

国产无佐剂人用Vero细胞狂犬病疫苗接种反应及免疫效果

目的观察国产无佐剂人用Vero细胞狂犬病疫苗接种反应及免疫效果。方法对93名观察对象采用0、3、7、14和28 d程序进行暴露后免疫,观察免后30 min的即时反应及72 h内的局部和全身副反应,并于第1针免疫后3、7、14和45 d采血,检测血清抗体水平。结果疫苗接种后均无异常反应,局部及全身一般反应率分别为5.8%和4.5%。免后7 d,血清抗体阳转率达22.58%,14 d达100%;免后7、14和45 d的GMT差异有显著意义;不同性别间免后14和45 d的GMT差异均无显著意义;不同年龄组间GMT14 d差异有显著意义,45 d差异无显著意义。结论国产无佐剂人用Vero细胞狂犬病疫苗安全,免疫效果好。

猪IL-2与IL-6的原核表达及其对伪狂犬病基因缺失疫苗的佐剂效应研究

将猪白细胞介素2(pIL-2)与猪白细胞介素6(pIL-6)的cDNA序列克隆到大肠杆菌表达载体pET-28a及pGEX-KG上,转化BL21(DE3)表达菌,经IPTG诱导产生重组蛋白pIL-2与pIL-6,表达量分别占菌株总蛋白的43.45％和28.37％,经提纯后含量可分别达到97.06％和86.37％。将提纯后不同剂量的两种重组蛋白以单独或组合的方式,加入伪狂犬病(Ea株)TK^-/gG^-双基因缺失疫苗中,使每头份疫苗分别含2、5和10μg·ml^(-1)的pIL-2或(和)pIL-6,用此疫苗免疫伪狂犬病抗体阴性猪。同时设试验对照组。初次免疫30d后加强免疫,测定中和抗体,观察试验猪的日增重情况,进行统计分析。发现各试验组的抗体水平均高于不含重组蛋白的基因缺失疫苗组;其中,含2μg·ml^(-1)pIL-2试验组与含10μg·ml^(-1)pIL-2/pIL-6试验组抗体水平和基因缺失疫苗对照组之间呈显著差异(P=0.019)与极显著差异(P=0.009)。结果表明,大肠杆菌表达的pIL-2、pIL-6对伪狂犬病鄂A株基因缺失疫苗(TK^-/gG^-/LacZ^+)有较强的佐剂效应,且呈剂量相关性。不同试验组日增重比较结果表明,免疫效果高低与猪的生长速度呈正相关。本试验为重组pIL-2与pIL-6作为新型疫苗佐剂应用提供了重要的试验依据。

人用无佐剂狂犬病疫苗的接种反应及免疫效果

目的观察人用无佐剂狂犬病疫苗的接种反应及免疫效果。方法使用无佐剂CTN-IV株Vero细胞疫苗和无佐剂AG株原代地鼠肾细胞疫苗免疫健康成人,按暴露后全程免疫程序接种,Vero细胞疫苗接种41人,地鼠肾细胞疫苗接种32人,观察其接种反应及免疫效果。结果接种人用无佐剂狂犬病疫苗后,无严重局部或全身不良反应出现。首剂免疫后14d,两组疫苗抗体阳转率均达100%,中和抗体滴度分别为7.29和6.35IU/ml,二者差异无显著意义。结论无佐剂狂犬病疫苗接种后无严重不良反应出现,且免疫效果良好。

狂犬病、犬瘟热和犬细小病毒病三联灭活疫苗免疫效果评价

狂犬病、犬瘟热和犬细小病毒病是当前危害养犬业的三种重要传染病。为探讨狂犬病毒(RABV)、犬瘟热病毒(CDV)和犬细小病毒(CPV)灭活制备三联灭活疫苗的可行性,将该3种病毒HEP-Flury株、LN(10)1株和JL(18)1-Beagle株分别在BHK-21、Vero/DogSLAM(VDS)和F81细胞培养,经β-丙内酯灭活剂灭活后,分别与三种不同类型免疫佐剂(MONTANIDE GEL 02、ADJ-801(W)、Al(OH)3)配制成三联灭活疫苗。疫苗经三次免疫比格犬后,通过测定动物血清抗体水平和攻毒保护情况评价其免疫效果。实验结果显示,不同佐剂的三联灭活疫苗对增强比格犬RABV、CDV和CPV血清抗体应答反应效果不同。其中ADJ-801(W)佐剂能显著提高针对RABV、CDV和CPV三种病毒的抗体水平,疫苗三次免疫比格犬后血清抗体效价分别为7.4 EU/mL、1∶50和1∶1024;而Al(OH)3佐剂效果较差,三免后抗体效价分别为4.01 EU/mL、1∶6和1∶256。疫苗三次免疫后,分别应用强毒CDV SD(14)7株和CPVJL(18)1-Beagle株对比格犬进行攻毒实验,实验结果显示,ADJ-801(W)组对SD(14)7和JL(18)1-Beagle攻毒保护率均为100%,MONTANIDE GEL 02组攻毒保护率均为60%,而Al(OH)3组攻毒保护率均为0,表明ADJ-801(W)佐剂制备的狂犬病、犬瘟热和犬细小病毒病三联灭活疫苗对比格犬提供较好的免疫保护作用。本研究为犬狂犬病、犬瘟热和犬细小病毒病三联灭活疫苗的研制奠定了基础。

无佐剂型人用狂犬病纯化疫苗免疫原性分析

[目的]分析无佐剂人用狂犬病疫苗(Vreo细胞)的临床免疫保护效果。[方法]使用国产和进口无佐剂人用狂犬病疫苗(Vreo细胞),全程免疫104名10～65岁入选志愿者,在免前、免疫后d 14和d 45抽血,采用小鼠中和试验(MNT)检测血清抗体水平。[结果]经Cox法统计分析,①国产疫苗的d 14、d 45血清抗体阳转率分别为98.12%(53/54)和100%(54/54);血清抗体水平(GMT)分别为2.85 IU/ml和9.49 IU/ml。②进口疫苗的d 14、d 45血清抗体阳转率分别为97.14%(34/35)和100%(35/35);血清抗体水平(GMT)分别为6.20 IU/ml和10.3 IU/ml;③国产与进口疫苗的14 d和45 d的血清抗体阳转率及45 d的GMT的差异均无统计学意义(P﹥0.05);但免疫后d 14两组间GMT的差异具有统计学意义(P﹤0.01)。[结论]观察组国产无佐剂人用狂犬病疫苗抗体产生早且水平较高,对机体具有安全性免疫保护作用。

应用生物反应器建立人用冻干狂犬病疫苗(Vero细胞)生产工艺的研究

应用15L生物反应器,采用片状载体对Vero细胞进行高密度培养、制备高毒力滴度的狂犬病毒收获液,经纯化后生产人用冻干狂犬病疫苗。采用15L生物反应器对培养方法(批次培养和连续灌流培养)进行试验,收获高毒力滴度的狂犬病毒收获液并制备人用冻干狂犬病疫苗。结果表明:Vero细胞在接种狂犬病毒后可以连续收获病毒液达到25d以上,冻干狂犬病疫苗的效价可以达到5.54IU/剂。本工艺可以用于进行大规模的人用冻干狂犬疫苗的生产。

狂犬病灭活疫苗免疫佐剂的比较试验

本文利用反向遗传操作系统拯救出狂犬病病毒的携带双G基因的HEP-dG株,选用铝佐剂、蜂胶和油乳剂制成3种狂犬病灭活疫苗,进行小鼠免疫试验。试验表明,油乳剂和蜂胶佐剂狂犬病灭活疫苗免疫组效价较高。蜂胶狂犬病灭活疫苗二次免疫产生的抗体水平明显高于首免,油乳剂狂犬病灭活疫苗首免抗体水平与蜂胶狂犬病灭活疫苗二免产生的抗体水平相当。携带双G基因的HEP-dG株具有良好的免疫原性,油乳剂是作为该狂犬病毒株的最适佐剂。

冻干人用狂犬病纯化疫苗的研制

在以原代地鼠肾细胞培养生产狂犬病疫苗工艺的基础上,通过对病毒收获液的浓缩倍数、灭活方式的改进及优化、冻干稳定剂的筛选、冻干曲线的确立,制备出了冻干疫苗,其质量及稳定性较液体疫苗有了整体水平的提高,各项检定结果均符合《中国生物制品规程》(2000版)。

野生动物用狂犬病口服疫苗复合免疫佐剂与诱饵的筛选及其对免疫效果的影响

本研究旨在筛选最佳的复合佐剂和口服疫苗诱饵组方,并将筛选出的复合佐剂口服免疫试验小鼠,检测免疫小鼠血清IgG和肠道IgA抗体效价。采用牛肉粉、鸡肉粉、鱼肉粉、奶粉、血粉为主要原料,以细菌脂多糖、氢氧化锌、枸杞多糖、甘露低聚糖为疫苗免疫佐剂,通过正交试验方法将复合免疫佐剂和口服疫苗诱饵与狂犬病SRV9病毒混匀后口服免疫试验小鼠,并对免疫动物血清IgG抗体效价进行检测。优化的复合佐剂组方是细菌脂多糖100μg、氢氧化锌0.8mg、枸杞多糖50mg、甘露低聚糖10mg,免疫小鼠血清IgG抗体含量为3.24mg/L,肠道IgA抗体含量为1.56ng/mL;在疫苗诱饵的投喂试验中,狼、狐狸、犬、猫对鱼肉味诱饵的采食率最高,其次是血味和奶味诱饵;诱饵与狂犬病SRV9病毒混匀后口服免疫小鼠28d后,血清IgG平均值为1.20U/L。本试验筛选出口服疫苗复合免疫佐剂,经筛选制备的鱼肉味诱饵具备高采食性,适合野生食肉类动物口服疫苗的制备。可增加狂犬病SRV9病毒的免疫效应,为进一步研发重组减毒狂犬病口服疫苗提供了必要的技术支撑。

冻干人用狂犬病纯化疫苗稳定剂的筛选

取同一批人用狂犬病纯化疫苗纯化液,分别加入筛选出的A、B、C和D稳定剂,按已确定的适宜冻干曲线进行冻干后,分别检测其安全、效力、外观、水分等,效力结果显示,使用A、B、D稳定剂的制品在37℃放置3个月,效价降低了48%～60%;使用C稳定剂的制品在37℃放置3个月效价仅下降了16.1%。表明C稳定剂为冻干人用狂犬病纯化疫苗适宜的稳定剂配方。

无佐剂狂犬病地鼠肾细胞疫苗接种后不良反应观察

目的了解人用无佐剂地鼠肾纯化狂犬疫苗免疫接种后不良反应发生情况,评价其安全性。方法对410例狂犬病毒暴露者全程5针免疫接种后发生的不良反应追踪观察,按局部、全身、胃肠道反应进行记录。结果局部反应、全身反应、胃肠道反应发生率低,依次为8.04%、6.83%、1.21%,反应轻微,以疼痛、全身乏力、局部红肿等轻症症状为多见,且持续时间短。结论人用无佐剂地鼠肾细胞纯化狂犬疫苗安全性高。

新型佐剂狂犬病灭活疫苗的研制

利用反向遗传操作系统拯救出狂犬病毒的携带双G基因的HEP-dG株,选用新型佐剂制成狂犬病灭活疫苗,进行小鼠免疫试验、比格犬最小免疫剂量试验、免疫持续期试验。试验表明,携带双G基因的HEP-dG株具有良好的免疫原性,该新型佐剂狂犬病灭活疫苗免疫效果较好,具有完全的保护力和较长的免疫保护持续期。

无佐剂Vero细胞狂犬病纯化疫苗的接种反应及免疫效果观察

目的观察无佐剂Vero细胞狂犬病纯化疫苗接种反应及其免疫效果。方法对被犬、猫所伤的785人按暴露后免疫程序接种,观察每剂次接种反应及完成接种程序后14天免疫效果。结果所有接种对象均未发生即时反应,未出现异常和全身强副反应;完成免疫程序后14天抗体阳转率99.8%。结论无佐剂Vero细胞狂犬病纯化疫苗具有良好的安全性和免疫原性。