近江牡蛎冻干组织糖原含量近红外模型的建立

糖原直接影响牡蛎的风味和营养品质,常作为评价牡蛎品质质量的重要标准。近红外光谱(NIR)模型可以实现糖原含量的快速准确检测。本研究以近江牡蛎(Crassostrea ariakensis)为研究对象,采用微量蒽酮法、近红外技术分别获取了外套膜、鳃、闭壳肌、肝胰腺、唇瓣、性腺等6个组织及全软体部混样共909份样品的糖原含量及光谱数据,结合最小二乘法建立了近江牡蛎6个组织及全软体部的糖原含量预测模型,并对该模型进行了外部验证和交叉验证。结果显示,所测样品光谱数据经一阶求导、乘法散射校正及平滑预处理后,建立的模型最优;所建立的7个模型的建模相关系数(RC)为0.9716~0.9963,其外部验证相关系数(REV)及交叉验证相关系数(RCV)分别为0.9490~0.9908和0.9694~0.9969,且模型交叉验证和外部验证的RPD值均大于2.5,表明所建立的模型能准确预测近江牡蛎相应组织样品的糖原含量。本研究建立的近江牡蛎糖原含量NIR分析模型,不仅丰富了牡蛎糖原含量检测方法的研究资料,还为实现近江牡蛎糖原成分的快速、准确测定提供了技术支撑,在近江牡蛎品质性状改良等领域具有重要的应用价值。

冻干组织工程骨与组织工程骨成骨活性比较研究

目的目前组织工程骨(tissue engineered bone,TEB)缺乏有效可行的储存、运输方法。评估TEB经过冻干处理后其成骨活性变化及其异位成骨能力,探索新的TEB储存和运输策略。方法取志愿者捐献的骨髓和骨组织分别培养hBMSCs和制备脱钙骨基质(decalcifi ed bone matrix,DBM),取第3代hBMSCs与DBM复合构建TEB,分别于体外孵育3、5、7、9、12、15d经过低温干燥后得到冻干组织工程骨(freeze-dried tissue engineered bone,FTEB),并将体外培养不同时间点的TEB和FTEB行扫描电镜观察。Western blot法检测TEB和FTEB内成骨相关蛋白BMP-2、TGF-β1、IGF-1的变化。将FTEB、TEB和DBM分别移植于30只6周龄BALB/C裸鼠皮下进行异位成骨实验(n=10),并行X线片评分、CT值检测以及HE染色观察。结果扫描电镜观察示,TEB中种子细胞保持正常形态,随着培养时间的延长分泌细胞外基质逐渐增加;FTEB内的种子细胞脱水皱缩而亡,细胞外基质位于疏松的DBM支架材料中。Western blot检测示,TEB和FTEB内BMP-2、TGF-β1和IGF-1表达均为阳性,除体外培养15d TEB和FTEB的TGF-β1蛋白积分吸光度(IA)比值比较差异有统计学意义(P<0.05)外,其余各时间点各蛋白含量比较差异均无统计学意义(P>0.05)。移植术后4周各种移植物未见明显钙化;术后8、12周,TEB和FTEB移植裸鼠皮下可以实现较好的异位成骨。通过X线片评分、CT值比较移植物钙化程度,TEB和FTEB差异无统计学意义(P>0.05),而DBM未见明显钙化。HE染色示TEB和FTEB出现钙化,DBM降解吸收。结论 FTEB与TEB具有相似的成骨活性,为TEB的储存和运输提供了一种新的策略和方法 。

同种异体骨体外人外周血淋巴细胞活性与增殖效应评价

目的:采用CFSE法与CCK-8法评价同种异体骨对人外周血淋巴细胞的活性与增殖效应。方法:通过人新鲜外周血淋巴细胞与供试品(脱钙骨基质与冻干型组织工程骨)浸提液共培养后,采用CCK-8法检测淋巴细胞的活性水平。通过CFSE标记的人新鲜外周血淋巴细胞与供试品浸提液共培养后,采用流式细胞术检测淋巴细胞增殖能力。结果:CCK-8法试验结果表明,脱钙骨基质组的吸光度值与培养液对照组相比无显著性差异,而冻干型组织工程骨组的吸光度值与培养液对照组相比显著增高(P<0.05),表明冻干型组织工程骨提高了淋巴细胞的活性。CFSE法试验结果表明,与培养液对照组相比,冻干型组织工程骨组的淋巴细胞增殖相关指标(Dil、PF、EI、RI)以及淋巴细胞亚群增殖指标Dil均无显著性差异(P>0.05),表明冻干型组织工程骨未对人外周血淋巴细胞的增殖产生显著性影响。结论:与培养液对照组相比,冻干型组织工程骨提高了人外周血淋巴细胞的活性,但是未对人外周血淋巴细胞的增殖产生显著影响。CCK-8法主要反映的是细胞活性,而CFSE法可以更客观地反映细胞有无增殖。