体外联合方法净化骨髓的研究进展

联合方法净化骨髓是自体骨髓移植发展的趋势之一。本文简要综述各种方法联合如药物与药物,药物与免疫学方法,其它方法相互联合的实验和临床研究现状,并讨论了耐药肿瘤细胞在体外通过逆转增加对净化药物的敏感性,从而达到高效的体外净化作用。

加热对净化骨髓白血病细胞效果研究

本文利用正交设计分析了４０°～４２℃、加热３０～９０分钟合并２～４ＧｙＸ射线照射等九水平对粒单造血祖细胞（ＧＭ－ＣＦＵ）和白血病祖细胞（Ｌ－ＣＦＵ）存活率的影响，指出温度为上述三因素中影响选择性杀伤白血病细胞作用的主要因素，认为４２℃、３０分钟加热合并３ＧｙＸ线照射为最佳净化条件。

用单克隆抗体免疫毒素体外净化自体骨髓移植的研究

体外净化骨髓中残留自血病细咆的方法，以免疫学方法特异性最强。我们与军事医学科学院协作，从1988年5月开始应用补体介导细胞毒法和单克隆抗体与蓖麻毒素偶联制备成免疫毒素在体外净化白血病细胞后进行ABMT研究。共计7例，全部成功，现报道如下：

慢性粒细胞白血病骨髓的体外净化

目的 :探讨白细胞介素、干扰素α2α、bcr -abl反义寡核苷酸对慢性粒细胞白血病骨髓体外净化效果。方法 :采用体外克隆形成培养技术 ,分别用白细胞介素、干扰素α2α、bcr-abl反义寡核苷酸不同的组合方案 ,进行体外净化 5例慢性粒细胞白血病 (CML)骨髓。结果 :联用IL - 2、IFN -α2α(各 80 0um/ml)、bcr-ablAS -ODN(30ug/ml)方案 ,对白血病细胞克隆形成单位 (L -CFU)抑制作用有显著差异 (P <0 .0 1 ) ,而相同条件下 ,GM-CFU及L -CFU的集落存活率分别为 2 6 .91 %和 3 .49% (P <0 .0 1 )。结论 :联用IL - 2、IFN -α2α(各 80 0u/ml)、bcr-ablAS -ODN(30ug/ml)方案 ,选择性体外净化慢性粒细胞白血病细胞的效果好 ,可用于临床净化CML骨髓。

亲溶酶体药物IHW2净化骨髓在白血病患者自体骨髓移植中的应用

目的：观察亲溶酶体药物ＩＨＷ２体外净化急性髓细胞白血病骨髓（ＢＭ）进行骨髓移植（ＡＢＭＴ）的临床疗效。方法：用ＩＨＷ２体外净化ＡＢＭＴ患者的ＢＭ，冷冻保存后回输给患者。结果：３例患者输用净化处理的ＢＭ后均成功地恢复造血功能。２例患者移植后至今已分别持续缓解超过３６、３４个月。其中１例患者移植前染色体为４６ＸＹ，ｄｅｌ（１６）（ｑ２２），移植后２个月检测为４６ＸＹ正常染色体核型。１例患者于移植后１９个月复发。结论：初步研究显示亲溶酶体药物ＩＨＷ２，用于临床移植患者是安全可行的。

大容量骨髓体外净化及初步临床应用

应用补体介导细胞毒法体外净化骨髓中残留白血病细胞后,对普通型急性淋巴细胞白血病(CALL)患者4例进行了自身骨髓移植(ABMT)。单个核细胞经单克隆抗体55(McAb 55)加兔补体两次处理后,CALL抗原阳性细胞清除率可达3个对数级,骨髓有核细胞及CFU-GM回收率分别为25.8％～64.8％和40.0％～62.4％,外周血白细胞于移植后第11～13天开始回升,15～29天升至10~9/L以上。第23～53天出洁净室,现无病存活时间分别为8^+、7^+,3^+和1.5个月,远期疗效仍在定期随访中。

自体树突状细胞活化的骨髓细胞对慢性粒细胞白血病骨髓的净化

为考察慢性粒细胞白血病 (CML)患者自体树突状细胞 (DCs)活化骨髓细胞、净化骨髓的作用 ,采用免疫磁珠从 2例血液学缓解的CML骨髓单个核细胞 (BMMNCs)分离DCs,另取BMMNCs置T 2 5塑料培养瓶建立Dexter培养体系 ,分为 3份 ,第 1份为对照 ,第 2份加rhIL 2 ,第3份加自体DCs。每周取半量非贴壁细胞、计数、行CFU GM检测 ,然后加等量新鲜培养基继续培养。当非贴壁细胞总数 <2× 10 5时终止培养 ,收集贴壁细胞做CFU GM集落形成试验并检测CD34和P2 10表达。取贴壁细胞形成的CFU GM集落 ,抽提RNA ,用反转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测BCR ABL的表达。结果发现 ,在DCs加入CML骨髓Dexter培养体系培养后 1- 2周 ,非贴壁细胞的CFU GM产量明显下降 ,与rhIL 2的体系基本平行 ,同时体系中的P2 10阳性细胞显著减少。不过 ,培养 3周后含DCs的体系CFU GM产量下降减缓 ,而含rhIL 2的体系CFU GM产量持续下降。在含自体DCs的Dexter体系 ,贴壁细胞中CD34+ 细胞和P2 10 + 细胞比例最低 ,只是贴壁细胞产生的CFU GM集落中 ,BCR ABL(+ )的集落比例与不含DCs的体系比较无明显差别。这些结果说明自体DCs加入CML骨髓Dexter培养体系能减少白血病的祖细胞 ,包括成熟的祖细胞和原始的祖细胞 ,自体DCs有可能用于CML骨髓的体外净化。

干扰素α联合体外长期液体培养净化慢性髓细胞白血病骨髓的实验研究

用干扰素α(IFN-α)联合体外长期骨髓液体培养(LTBMC)净化16例慢性期Ph^+慢性髓细胞白血病(CML)的骨髓,研究结果为:IFN-α1000IU/ml和2×10~6MNC/ml对LTBMC中CML和正常骨髓的非贴壁层细胞数无明显影响,对CML培养3周后和正常骨髓培养第2—3周的非贴壁层CFU-GM有抑制作用,对CML和正常骨髓在LTBMC中的基质细胞层形成均有一定影响。在有完整染色体资料的13例患者中,加IFN-α组培养4周后有8例Ph^+染色体完全消失,2例Ph^+<50％,1例Ph^60％,2例无变化,而对照组中只有5例完全消失,3例Ph^+<50％,1例Ph^+65％,4例无变化,而且加IFN-α组Ph染色体的消失或减少时间较对照组提前1周。结论:IFN-α1000U/ml与LTBMC联合对CML骨髓的净化有协同效应,两者联合可用于临床净化慢性期CML骨髓。

CD_3 McAb联合rhIL-2激活的骨髓对白血病细胞杀伤净化作用的研究

目的 探讨CD3单克隆抗体 (CD3McAb)联合重组人白细胞介素 2 (rhIL 2 )激活的骨髓对白血病细胞的杀伤及净化作用。方法 用MTT法检测激活骨髓的细胞毒作用 ;半固体集落培养法观察激活骨髓CFU GM水平和对白血病细胞的净化作用 ;采用间接荧光法测定激活骨髓的免疫标记。结果 CD3McAb与rhIL 2联合激活的骨髓对白血病细胞株K5 6 2、HL 6 0均有明显的杀伤净化作用 ,且优于rhIL 2或CD3McAb单用组 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。rhIL 2和 (或 )CD3McAb对激活骨髓的CFU GM水平无明显影响。CD3McAb +rhIL 2激活的骨髓 ,与活化前及rhIL 2或CD3McAb组相比 ,CD3+ 、CD8+ 、CD1 9+ 、CD2 5+ 、CD38+ 、CD56+ 细胞显著升高。结论 CD3McAb能增强rhIL

慢性粒细胞白血病骨髓体外净化的实验研究

目的 探讨白细胞介素、干扰素 α2 a、bcr- abl反义寡核苷酸对慢性粒细胞白血病骨髓体外净化效果。方法 采用体外克隆形成培养技术 ,分别用白细胞介素、干扰素 α2 a、bcr- abl反义寡核苷酸不同的组合方案 ,体外净化 5例慢性粒细胞白血病 (CML)骨髓。结果 联用 IL- 2、IFN- α2 a(各 80 0 u/ m l)、bcr- abl AS- ODN(30 μg/ ml)方案 ,对白血病细胞克隆形成单位 (L- CFU)抑制作用有显著差异 (P<0 .0 1) ,而相同条件下 ,GM- CFU及 L- CFU的集落存活率分别为 2 6 .91%和 3.49% (P<0 .0 1)。结论 联用 IL- 2、IFN- α2 a(各 80 0 u/ m l)、bcr- abl AS- ODN(30 μg/ml)方案 ,选择性体外净化慢性粒细胞白血病细胞的效果好 ,可用于临床净化 CML

自体树突状细胞用于慢性粒细胞白血病骨髓净化的初步研究

目的 考察慢性粒细胞白血病 (CML)树突状细胞 (DC)刺激自体骨髓 T细胞 ,清除白血病细胞的作用。 方法 采集 3例 CML 病人 (2例慢性期和 1例急变期 )外周血 ,分离单个核细胞 (PBMNC) ,经塑料贴壁后在含自体血浆、重组人白介素 4(rh IL- 4)、重组人粒 -单集落刺激因子 (rh GM- CSF)和重组人肿瘤坏死因子 (rh TNFα)的 RPMI- 16 40培养液 ,37℃ ,5 % CO2 孵箱培养 10天 ,或用免疫磁珠从 PBMNC分离 DC,在含自体血浆、rh GM-CSF和 rh TNFα的 RPMI16 40培养液培养 3天 ,收获的细胞即 DC加到含 rh IL- 2的 Dexter骨髓长期培养体系 ,置37℃ ,5 % CO2 孵箱培养 7天 ,观察培养前后骨髓细胞的免疫表型和 P2 10阳性细胞比例。 结果 从 CML 病人外周血获得的 DC大多数表达 P2 10。在含 rh IL- 2的 Dexter体系加入 DC能进一步增加体系中的 T细胞数。在 2例慢性期病人体系中的 P2 10阳性细胞减少 ,但在急性期病例 ,体系中 P2 10细胞明显增加。 结论 CML 病人的 DC表达 P2 10 ,能刺激自体骨髓中 T细胞增生 ,在慢性期病人 ,这些自体 DC活化的骨髓

高温联合普鲁卡因体外净化急性髓细胞白血病骨髓及其优化

采用３ＨＴｄＲ掺入法及ＣＦＵ－Ｌ、ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＦＵ－Ｂｌａｓｔ和ＣＦＵ－Ｆ等培养技术，通过正交试验设计观察了高温和普鲁卡因在不同条件下的体外净化作用。发现两者联合可以增加净化的效率及特异性。它们对各种集落形成细胞的杀伤力从大到小依次为ＣＦＵ－Ｌ、ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＦＵ－Ｂｌａｓｔ和ＣＦＵ－Ｆ（Ｐ＜０．０１）。而后两者的敏感性相似（Ｐ＞０．０５）。在普鲁卡因４ｍｍｏｌ／Ｌ（Ｐ＜０．０５）和加热（４２℃）１２０分钟（Ｐ＞０．２５）时用３ＨＴｄＲ掺入法测得净化效果最好。而用集落培养法则在普鲁卡因４ｍｍｏｌ／Ｌ（Ｐ＜０．０１）和加热（４２℃）９０分钟（Ｐ＜０．０５）时净化效果最佳，这时ＣＦＵ－Ｌ和ＣＦＵ－Ｂｌａｓｔ的杀伤率相差２．５ｌｏｇ。

微波体外净化的自体骨髓移植治疗白血病4例

用微波加温42℃持续1小时净化4例白血病患者缓解期骨髓,然后进行自体骨髓移植。3例移植后已持续完全缓解38、36、13个月;1例移植后6个月复发死亡。认为微波体外净化骨髓是一种简便、经济、有效的净化方法。

体外液体培养联合天然抑癌物净化后自体骨髓移植治疗晚期淋巴瘤

大剂量化疗和放化疗后自体骨髓移植(ＡＢＭＴ)已广泛应用于某些实体瘤的治疗,尤其是淋巴瘤,取得较满意的疗效[1]。尽管自体骨髓回输提供了足够的造血干细胞,但因骨髓中存在的肿瘤细胞是移植后复发的重要原因之一,有报道骨髓穿刺、活检侵犯骨髓者达15%～63%,用多聚酶链反应...

IL-1与IL-2联合激活的骨髓对白血病细胞的净化作用

目的 :体外观察白细胞介素 - 1(IL - 1)对白细胞介素 - 2 (IL - 2 )激活骨髓自然杀伤细胞 (NK )和淋巴因子 -激活杀伤细胞 (L AK)活性的影响及两者联合激活的骨髓对白血病细胞的净化作用。方法 :标准 4h5 1 Cr释放实验测定激活骨髓的细胞毒作用 ;集落培养法观察激活骨髓对 HL - 6 0和 K 5 6 2细胞的净化作用。结果 :10～ 2 0 0μg/ LIL- 1对正常骨髓的 NK和 L AK活性无明显影响 ;IL- 2能够增强骨髓的 NK活性和诱导 L AK细胞的产生 ,呈浓度递增趋势 ;10 0 μg/ L IL- 1能增强 1万～ 10 0万 U/ L IL- 2诱导的骨髓 NK及 L AK活性。在体外净化实验中 ,10 0μg/ L IL- 1或 10 0万 U/ L IL- 2对 K5 6 2和 (或 ) HL- 6 0细胞无直接杀伤 ,而在掺入 1% K5 6 2或 HL- 6 0的正常骨髓中 ,加入 IL- 1和 (或 ) IL- 2 ,对白血病细胞均有明显的毒性作用 ,以培养 3d的骨髓净化作用最强。IL- 2的净化效果优于 IL - 1(P <0 .0 5 )。两者联合激活的骨髓净化作用更为明显 ,1d和 3 d分别比单用 IL - 2增加 1～ 2个对数级 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。 IL - 1和 (或 ) IL - 2对激活骨髓的 CFU- GM水平无明显影响。结论 :IL - 1能够明显增强IL - 2激活的骨髓对白血病细胞的净化作用。

自体骨髓移植及其净化技术

自体骨髓移植及其净化技术刘海川自本骨髓移植（ＡＢＭＴ）属于造血干细胞移植范畴。当前，造血干细胞移植治疗白血病、淋巴瘤及其它一些恶性肿瘤进展很快，其疗效明显优于化疗，提高了白血病及其它恶性肿瘤的长期生存率和治愈率，亦为基因治疗创造了条件，是目前国内外研...

rhTNF-α联合IL-2对急性髓细胞白血病患者骨髓体外净化的研究

目的 探讨重组人肿瘤坏死因子α(rhTNF -α)联合白细胞介素2(IL-2)对急性髓细胞白血病 (AML)骨髓体外净化的作用。 方法 rhTNF -α(1000u/ml)和IL-2(500u/ml)联合 ,对17例AML患者骨髓体外净化培养1～3d,用甲基纤维素半固体培养法测定粒 -巨噬细胞集落 (CFU -GM)、白血病祖细胞 (CFU -L)形成 ,并以免疫组化法测定CD33、CD38和CD34阳性表达率的变化。结果 (1)rhTNF-α对8例正常人和17例患者的CFU -GM均有明显的抑制作用 ,而与IL -2联合作用对CFU-GM则无明显影响 ;(2)单用rhTNF-α或IL-2与患者骨髓共同孵育1d和3d,CFU -L形成率均有所下降 ,但至孵育3d后 ,尚残余20%、6%的白血病克隆 ,不能完全根除CFU-L;而两者联合作用3d后 ,CFU -L抑制率达100% ;(3)17例AML患者骨髓经rhTNF-α、IL-2净化培养3d后 ,白血病细胞CD33、CD38和CD34阳性表达率发生了明显变化。 结论 (1)单用rhTNF -α或IL-2净化效果不理想 ;(2)rhTNF-α联合IL-2对CFU -L有选择性杀伤作用 ,而对正常CFU -GM无明显影响 ,净化效果较好 ;(3)白血病细胞CD33、CD38、CD34阳性率的变化可间接评价AML骨髓净化效果。

净化自体骨髓移植治疗未缓解白血病

３１例白血病患者骨髓经超长波紫外线照射、加热净化后细胞培养结果提示对ＣＦＵ－ＧＭ无明显影响，对ＣＦＵ－Ｌ有明显灭活作用，抑制率达９５．７％（Ｐ＜０．０５）。临床对２例合并较严重并发症、且常规诱导化疗无效的白血病患者进行了自体骨髓移植（ＡＢＭＴ），结果：①急粒Ｍ２型合并骨纤者，达到完全缓解；②慢粒并肺部浸润患者，肺部浸润吸收，骨髓缓解。表明某些白血病常规化疗效果不佳者。

依赖补体的细胞毒性单克隆抗体对急性淋巴性白血病患者骨髓净化的研究

针对我国常见急淋白血病,我们制备了CD10、CD7、CD9类依赖补体细胞毒性抗体55,LN67-8, LS93-2及DS21。系统地观察了它们固定补体的细胞毒作用后,系用活细胞沤染及集落培养技术,研究了上述抗体对骨髓中相应靶细胞最佳净化条件,特异性清除效率,联合使用有关抗体对异质性靶细胞清除效果,以及净化处理对造血祖细胞影响。为过渡临床,对大量骨髓细胞的分离、浓缩、净化及非冰冻短期保存效果也进行了探讨,摸索出一套适合我国国情的急淋白血病患者大量骨髓净化的可行方案。在此基础上,对5例普通型急淋患者缓解期自体骨髓进行净化处理,再行移植。临床结果表明,患者在强化放化疗后辅以净化自体骨髓移植,2～4周造血重建,3～8周患者离开层流室。除1例48岁女患者于移植后8个月因白血病复发死亡外,其余4例到目前为止仍处于无病活存状态。1例22岁女性患者无病活存己达20个月。初步临床效果表明,这组依赖补体的细胞毒性抗体可用于急淋患者自体骨髓净化。