中药药理学贯通性实验的设计及应用——以凉膈散为例

目的 中药药理学是以传统中药学与现代药理学为主体的新兴交叉学科,迄今国内尚未有完善的中药药理学贯通性实验教学方案。方法 结合现有基础教学条件及中药药理学教学团队的教学改革实践经验,选择凉膈散(LGS)进行实验设计。结果 建立了完善的贯通性实验教学方案,并选取中药学和中药制药2个专业学生进行教学实践。结论 此研究为中医药院校及综合性院校的中药学专业进行实验教学改革提供模板及思路。

基于网络药理学探究凉膈散对急性胰腺炎肺损伤大鼠的保护作用

目的基于网络药理学探究凉膈散对急性胰腺炎肺损伤(AP-ALI)大鼠的保护作用。方法利用TCMSP、TCMID、GeneCards、DisGeNET及STRING数据库建立药物与疾病的靶点网络,使用Cytoscape筛选靶点,借助GO和KEGG富集分析阐释生物学机制,使用Autodock Vina 1.1.2和PyMOL计算并可视化成分和靶标的结合情况。大鼠随机分为对照组、模型组和凉膈散组,除对照组外,其余组大鼠经胰胆管逆行注射5%牛磺胆酸钠(50 mg/kg)制备AP-ALI模型,凉膈散组于造模后2、12 h灌胃给予10 g/kg凉膈散。造模后24 h收集血浆、血清和胰腺、肺组织,测定肺组织湿/干重比,血浆PaO_(2)和PaCO_(2)值,血清淀粉酶活性和炎症因子TNF-α、IL-6水平,肺组织MDA、GSH水平和MPO活性,HE染色观察胰腺和肺组织病理损伤,TUNEL染色检测肺组织细胞凋亡情况,Western blot法检测肺组织PTGS2、cleaved caspase-3、HO-1、P53蛋白表达。结果网络药理学分析筛得凉膈散活性成分155个,靶点网络确定了41个关键靶点(TNF、IL6、MMP9、HO-1、PTGS2、P53、STAT3、MAPK8、CASP3、FOS等),涉及TNF、MAPK、HIF-1、TLRs和癌症等信号通路。动物实验表明,与对照组比较,模型组大鼠肺组织湿/干重比、血浆PaCO_(2)值、血清淀粉酶活性和TNF-α、IL-6水平、肺组织MDA水平和MPO活性、肺组织细胞凋亡率及PTGS2、cleaved caspase-3、HO-1、P53蛋白表达均升高(P<0.05,P<0.01),血浆PaO_(2)值、血清GSH水平均降低(P<0.01),胰腺、肺组织出现严重病理损伤,病理评分升高(P<0.01);与模型组比较,凉膈散组上述指标均有改善(P<0.05,P<0.01)。结论凉膈散可能通过促进HO-1通路活化缓解AP-ALI的氧化应激损伤,并调控P53/caspase-3通路发挥抗凋亡作用。

基于生物信息学与实验验证探讨凉膈散通过GSK-3β调控内毒素致急性肺损伤分子机制

目的探索凉膈散治疗内毒素所致急性肺损伤(ALI)的作用靶点,分析并验证其可能的作用机制。方法通过GEO、TCMSP和中医药整合药理学研究平台(TCMIP)获取凉膈散PI3K/Akt通路相关ALI疾病基因,采用单基因Meta分析识别凉膈散可能的作用靶点,通过脂多糖诱导的小鼠ALI模型对预测结果进行验证。结果生物信息学分析确定GSK3β、CDKN1A、NFKB1和MCL1为PI3K/Akt通路相关的ALI疾病特征基因,其中GSK3β是凉膈散治疗ALI的作用靶点。在脂多糖诱导的ALI小鼠模型中,凉膈散和GSK-3β抑制剂TWS119均可显著减轻小鼠肺组织水肿(P<0.001),下调GSK-3β基因表达,降低Th17细胞比例、Th17/Treg比值和白细胞介素-17含量(P<0.001,P<0.05),提高Treg细胞比例和转化生长因子-β含量(P<0.05)。加入GSK-3β激动剂Wortmannin处理后,凉膈散的上述作用被部分逆转。结论GSK-3β是凉膈散治疗ALI的作用靶点,凉膈散可通过抑制GSK-3β表达调节Th17/Treg免疫平衡,从而发挥治疗ALI作用。

凉膈散汤双途径给药治疗重症急性胰腺炎患者的疗效评价

目的:分析凉膈散汤双途径给药治疗重症急性胰腺炎(SAP)的效果。方法:回顾性采集2019年8月-2020年8月我院79例SAP患者的临床资料,根据患者及家属意愿按照治疗方法分组,其中35例采用常规西医综合治疗为西医组,44例在西医组基础上采用凉膈散汤双途径给药治疗为中西医组。比较两组疗效、中医证候积分、急性生理与慢性健康评分(APACHEⅡ评分)、实验室指标水平[白细胞计数(WBC)、血淀粉酶(AMS)、尿AMS]及并发症。结果:中西医组总有效率(93.18%)高于西医组(77.14%)(P<0.05);治疗4周后,中西医组中医证候积分、APACHEⅡ评分低于西医组(P<0.05);中西医组腹痛缓解、胃肠减压、肠鸣音恢复、开放肠内营养时间短于西医组(P<0.05);治疗4周后中西医组WBC、血AMS、尿AMS水平低于西医组(P<0.05);中西医组并发症发生率为11.36%,低于西医组的37.14%(P<0.05)。结论:凉膈散汤双途径给药治疗SAP疗效显著,能改善临床症状及病情程度,调节实验室指标水平,降低并发症发生率。

果酸联合凉膈散面膜治疗中度痤疮的临床疗效

目的:观察果酸联合凉膈散面膜治疗中度痤疮的临床疗效。方法:将符合改良Pillsbury标准的267例患者分成三组,分别为果酸联合凉膈散组(试验组89例),单纯果酸对照组(T1组89例),果酸联合中药倒膜对照组(T2组89例),治疗6周观察疗效。结果:果酸联合凉膈散组总体有效率86.51%(77/89),对照T1组为53.93%(48/89),对照T2组为69.66%(62/89),试验组与对照T1组有显著差异(P<0.01),与对照T2组有一般差异(P<0.05)。结论:果酸联合凉膈散面膜疗效确切,为中度痤疮优秀治疗组合。

加味凉膈散治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重期中医临床症状评估

目的:分析加味凉膈散治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)对中医临床症状改善的影响。方法:选取2020年1月—2021年3月我院AECOPD患者82例,按随机数表法分为采取常规西药治疗的对照组41例,以及在对照组基础上采取加味凉膈散治疗的研究组41例,对比两组疗效以及治疗前后中医临床症状(咳嗽、咯痰、气促、喘息)、肺功能[第1秒用力呼气所得容积数值(FEV_(1))、第1秒用力呼气所得容积占预计值之比(FEV_(1)%)]。结果:研究组总有效率(95.12%,39/41)高于对照组(78.05%,32/41),差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,研究组中医临床各项积分低于对照组,FEV_(1)、FEV_(1)%水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:加味凉膈散治疗AECOPD可提高疗效,促进临床症状消退,利于肺功能改善。

凉膈散对内毒素血症小鼠的肝脏库普弗细胞CD14和清道夫受体表达的影响

目的:探讨凉膈散对内毒素血症小鼠的肝脏库普弗细胞CD14和清道夫受体(SR)的表达的影响以及肝脏(LPS)引起损伤的影响,从细胞信号转导途径阐明中药解毒机制。方法:建立内毒素血症小鼠动物模型,同时灌服凉膈散,在内毒素给药后不同时间点(2,4,8 h)杀动物取肝组织,免疫组化法观察肝脏库普弗细胞CD14及SR表达的变化,并进行图像分析和肝组织的病理检测。结果:注射LPS 2,4,8 h后,与正常对照组相比,LPS损伤组肝脏库普弗细胞CD14的表达均呈显著升高,SR表达均呈显著降低(P<0.01)。不同剂量凉膈散组及地塞米松组均介于正常对照组与LPS损伤组之间。与LPS损伤组比较,不同剂量凉膈散组及地塞米松组在两者的表达上均有显著性差异(P<0.01),以高剂量凉膈散最为明显,呈剂量相关性。肝脏损伤主要表现为空泡变性,肝脏库普弗细胞SR,CD14的表达变化与小鼠肝损伤程度呈平行关系。结论:凉膈散对内毒素血症小鼠的肝脏库普弗细胞表面CD14表达上调以及SR表达下调有明显的抑制作用,并能减轻内毒素所致的肝损伤。

凉膈散对家兔内毒素温病模型的解毒作用研究

本文用大肠杆菌内毒素复制家兔温病模型,观察凉膈散对该模型动物的解毒作用。结果表明,凉膈散可减少模型动物血浆内毒素含量,降低血浆肿瘤坏死因子(TNF-α)、血清过氧化脂质(LPO)水平,提高血清超氧化物歧化酶(SOD)活性,减轻脏器组织病理损害,提示凉膈散可通过多途径发挥解毒作用。

加味凉膈散对早期脓毒症解毒抗炎 攻邪安正作用观察

目的:观察加味凉膈散在脓毒症早期阶段的抗炎解毒作用,以及对ICU住院时间、28天病死率的影响。方法:57例早期脓毒症患者随机分为A组(西医常规治疗,29例)与B组(加味凉膈散加西医常规治疗,28例),健康志愿者12例为对照组C组,比较3组外周血TNF-α、IL-6、CRP、PCT水平和两组患者之间住ICU时间、28天病死率的差异。结果:两组患者入院当天WBC、IL-6、TNF-α、CRP、PCT水平较健康对照组明显升高,治疗第7天B组IL-6、TNF-α、CRP较A组下降幅度大,有统计学意义,两组28天病死率无统计学差异,但B组住ICU时间较A组明显缩短。结论:西医联合应用加味凉膈散在早期脓毒症解毒抗炎、攻邪安正方面显示出良好的治疗前景。

凉膈散对肠缺血再灌注损伤大鼠肠道的保护作用

目的:观察凉膈散对大鼠缺血再灌注(I/R)损伤肠黏膜的保护作用。方法:健康Wistar大鼠168只,随机分为正常组、假手术组、模型组、凉膈散治疗组和凉膈散防治组,其中正常组8只,其他4组各40只。正常组不予任何处理,假手术组只分离不夹闭肠系膜上动脉,其余3组通过夹闭肠系膜上动脉建立大鼠小肠I/R模型,根据缺血45min后再灌注3、12、24、48和72h5个时相点又分为5组,每组8只大鼠。测定各组5个时点动物小肠黏膜病理损伤Chiu氏评分、门静脉血浆D-乳酸值、小肠组织匀浆丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力、肠黏膜细胞凋亡指数及Bax表达水平。结果:模型组动物肠黏膜结构破坏明显,Chiu氏评分、血浆D-乳酸值明显升高。小肠匀浆MDA含量升高、SOD活力降低,肠黏膜细胞凋亡指数及Bax表达水平升高。凉膈散干预后,可减轻小肠黏膜病理损伤程度、与模型组比较,除3h外,门静脉血浆D-乳酸值下降,小肠组织匀浆MDA含量降低和SOD活力升高、肠黏膜细胞凋亡指数及Bax表达水平均下降。结论:I/R损伤可破坏肠黏膜屏障功能,凉膈散可通过减少机体氧自由基的生成而保护肠黏膜。

凉膈散对内毒素致大鼠急性肺损伤的保护作用

目的:探讨凉膈散对内毒素(LPS)致急性肺损伤(ALI)的保护作用。方法:静脉注射内毒素5mg/kg制作大鼠急性肺损伤模型。将实验动物随机分为对照组、LPS组、LPS+3个不同剂量凉膈散组、LPS+地塞米松组,伤后1、2、4、8、16h观察各组大鼠的动脉血氧分压(PaO2)、肺组织通透性指数、肺组织含水量及肺系数、肺组织病理改变的差异。结果:LPS 4h后组肺间质水肿,肺泡腔内可见大量炎细胞浸润和血浆蛋白渗出;氧分压降低,肺湿干重比、肺系数及肺通透性指数均显著升高。地塞米松、凉膈散各组均较LPS组显著下降,氧分压值升高。结论:凉膈散对内毒素导致的急性肺损伤具有保护作用。

凉膈散、银翘散对早期脓毒症炎症因子干预作用比较研究

目的观察凉膈散、银翘散对早期脓毒症炎症因子IL-1β、TNF-α、IL-10的不同干预作用。方法将40只新西兰大耳白兔随机分成空白对照组、模型组、银翘散治疗组、凉膈散治疗组、地塞米松对照组,采用耳缘静脉注射大肠杆菌内毒素的方法建立脓毒症模型,造模0.5 h后药物干预,4 h后观察兔一般情况及体温,检测血浆内毒素、促炎因子IL-1β、TNF-α及抗炎因子IL-10水平。结果银翘散组兔全身情况好转,体温、血浆内毒素、IL-1β、TNF-α的水平均比模型组降低(P<0.01or 0.05);凉膈散组兔全身症状加重,体温、血浆内毒素、IL-1β、TNF-α、IL-10与模型组差异无统计学意义(P>0.05)。结论银翘散能抑制早期脓毒症卫分证相关阶段促炎因子IL-1β、TNF-α的释放而减轻炎症反应、改善症状,但凉膈散不能抑制IL-1β、TNF-α释放、减轻炎症反应。

凉膈散对小鼠内毒素血瘀模型微循环的影响

凉膈散煎剂２０ｇ／ｋｇｉｇ连续３天。

凉膈散对家兔内毒素温病模型的化瘀作用研究

用大肠杆菌内毒素ｉｖ复制家兔温病模型，观察凉膈散对模型动物的化瘀作用，结果凉膈散能够抑制内毒素所致家兔血小板计数（ＢＰＣ）、凝血酶原时间（ＰＴ）、血浆纤维蛋白原含量（Ｆｂ）及血液流变性的异常改变。

凉膈散对内毒素致急性肺损伤大鼠信号转导与转录激活子1表达的影响

目的观察凉膈散对内毒素致急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织中的信号转导与转录激活子1(STAT1)的影响及其作用机制。方法静脉注射内毒素脂多糖(LPS)制作大鼠急性肺损伤模型。将实验动物随机分为空白组、LPS组、LPS+凉膈散高、中、低剂量组、LPS+地塞米松组,LPS组又分为致伤后1、2、4、8、16h不同时间点组,用蛋白免疫印迹法测定大鼠肺组织STAT1及磷酸化STAT1的表达。结果与空白组比较,LPS组STAT1蛋白在4h、p-STAT1蛋白在2h表达最显著(P<0.01),凉膈散各组及地塞米松组在2、4、8h能显著下调STAT1及p-STAT1蛋白的表达,与LPS组比较,有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论内毒素致急性肺损伤中存在STAT1异常表达,凉膈散各组通过下调STAT1及p-STAT1的表达,从而减轻LPS所致的急性肺损伤,这可能是凉膈散治疗急性肺损伤的机制之一。

凉膈散对LPS诱导的巨噬细胞丝裂素活化蛋白激酶p38活性的影响

目的:通过研究凉膈散对内毒素诱导的体内、体外细胞丝裂素活化蛋白激酶p38(P38MAPK)活性的影响,探讨凉膈散解毒作用的细胞信号转导调控机制。方法:分体内和体外实验两部分进行研究。体内实验部分采用凉膈散灌胃并用尾静脉注射制造内毒素损伤小鼠模型,采集腹腔巨噬细胞,用免疫沉淀及westernblot法测定磷酸化的p38MAPK(pp38MAPK)活性。体外实验部分:制备凉膈散药物血清,培养巨噬细胞RAW264.7细胞。用免疫沉淀及放射自显影技术测定不同剂量药物血清对内毒素诱导的RAW264.7细胞p38MAPK活性的影响。结果:体内实验部分,与正常对照组相比,LPS损伤组的pp38MAPK活性明显增强,各剂量药物组及地塞米松组均低于LPS损伤组,以高剂量药物组及地塞米松组最低,中低剂量组次之,呈剂量依赖性。体外实验部分:不同剂量药物血清组及阳性药物组RAW264.7细胞p38蛋白激酶活性均低于正常血清组,以高剂量药物组及阳性药物组最低,中低剂量次之,呈剂量依赖性。结论:不管在体内还是在体外,凉膈散都能明显抑制LPS诱导的磷酸化的p38MAPK活性的增强,并呈剂量依赖性。推断这是凉膈散解毒作用的细胞信号转导机制之一。

凉膈散联合商阳穴刺血治疗急性智齿冠周炎临床运用

目的探讨凉膈散联合商阳穴刺血治疗急性智齿冠周炎的临床疗效。方法随机将医院2019年6月—2020年6月诊治76例急性智齿冠周炎患者分为对照组和治疗组,两组各38例,对照组口服甲硝唑治疗,治疗组采用凉膈散联合商阳穴刺血治疗,5 d为1个疗程。观察两组患者临床疗效,临床症状(牙龈红肿、张口度、面部肿胀)积分情况,评价患者视觉模拟评分(VAS评分),检测患者C反应蛋白(CRP)和CD64水平,记录不良反应发生情况。结果治疗后,治疗组总有效率为94.74%(36/38),对照组总有效率为78.95%(30/38),治疗组显著高于对照组(P<0.05);治疗后,两组患者临床症状积分显著降低(P<0.05),且治疗组低于对照组(P<0.05);两组患者VAS评分较治疗前均显著下降(P<0.05),治疗组低于对照组(P<0.05);两组患者CRP、CD64水平均显著下降(P<0.05),治疗组低于对照组(P<0.05);对照组不良反应发生率高于治疗组(P<0.05)。结论凉膈散联合商阳穴刺血治疗急性智齿冠周炎疗效显著,可有效改善患者牙龈红肿、张口疼痛、面部肿胀等症状,提高患者免疫功能,且安全无明显不良反应,值得临床推广应用。

子午流注择时应用清瘟败毒饮合凉膈散加减通腑治疗脓毒症胃肠功能障碍(热毒炽盛证)的临床研究

目的探讨子午流注择时应用清瘟败毒饮合凉膈散加减通腑对脓毒症胃肠功能障碍(热毒炽盛证)的临床疗效。方法选取脓毒症患者共116例按随机数字表法分为对照组和观察组各58例。两组患者按指南予西医常规治疗;对照组加予清瘟败毒饮合凉膈散加减通腑,时间不固定,每日1剂;观察组依子午流注择时通腑(卯时灌肠、未时灌胃)。两组疗程均为2周。比较两组胃肠功能障碍评分、急性生理和慢性健康状况评分(APACHEⅡ)、序贯器官衰竭评估(SOFA)、肠鸣音评分、腹腔压力、临床疗效以及血清超敏反应蛋白(hs-CRP)和降钙素原(PCT)水平。结果治疗后,观察组患者的胃肠功能障碍、APACHEⅡ评分、SOFA评分、肠鸣音评分以及腹腔压力显著低于对照组(P<0.01);观察组的总有效率显著高于对照组(P<0.05);治疗后,观察组患者血清hs-CRP和PCT水平显著低于对照组(P<0.01)。结论子午流注择时应用清瘟败毒饮合凉膈散加减通腑能改善脓毒症(热毒炽盛证)患者的胃肠功能障碍,提高临床疗效。其机制可能与治疗抑制炎症反应有关。

凉膈散对内毒素肺损伤小鼠肺组织核因子-κB活性的影响

目的 :通过研究凉膈散在内毒素 (LPS)损伤小鼠肺组织中对肺组织核因子 -κB (NF-κB)的活性的影响 ,探讨凉膈散对机体保护作用的机理。方法 :小鼠随机分为内毒素损伤组及低、中、高剂量凉膈散组 (其中又分为LPS损伤后 2h、 4h、 8h三组 ) ,另设正常对照组。用电泳迁移率改变法 (EMSA)检测各组动物肺组织匀浆中NF -κB活性。结果 :与正常对照组相比较 ,LPS注射后 2h肺组织核蛋白NF -κB明显活化 ,4h达高峰 ,8h有所下降 ,但仍高于正常对照组。且各剂量中药组肺组织核蛋白NF -κB活化程度呈剂量相关性 ,表现为高剂量组最低 ,中、低剂量组活化有所下降。结论 :各剂量凉膈散均能有效抑制NF -κB活化 ,中药凉膈散保护机体免受LPS损伤作用的机理可能是通过抑制组织核蛋白NF -κB的活性 ,从而抑制各种炎症细胞因子的产生 ,而起到清热解毒的作用。

凉膈散药物血清对脂多糖诱导体外培养巨噬细胞核转录因子-кB的影响

目的观察凉膈散药物血清对脂多糖(LPS)诱导的体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞核转录因子-кB(NF-кB)变化的影响,探讨凉膈散解毒作用的细胞信号转导调控机制。方法制备凉膈散药物血清;提取并体外培养小鼠腹腔巨噬细胞;以凉膈散药物血清及LPS共同刺激已培养细胞,免疫荧光法检测巨噬细胞NF-кB亚基p65,用激光扫描共聚焦显微镜观察并测定各组小鼠腹腔巨噬细胞核的p65的荧光表达情况。结果小鼠巨噬细胞经LPS刺激1h后,其核内的荧光强度(代表p65的表达量)显著增强。与LPS刺激组相比:抑制剂TLCK组、凉膈散药物血清不同剂量组的荧光强度值均较低,有显著性差异,以TLCK及凉膈散大剂量组强度值最低,中、小剂量组次之;空白血清不同剂量组则均无显著差异。药物血清不同剂量组之间有显著差异,呈剂量依赖性关系;空白血清不同剂量组之间无显著性差异。结论不同剂量凉膈散药物血清均能抑制LPS所致的细胞核内p65升高,且呈剂量依赖性,这可能是凉膈散解毒作用的细胞信号转导机制之一。