棘霉素对肝癌SMMC7721细胞凋亡相关基因影响的研究

目的:探讨棘霉素诱导肝癌SMMC7721细胞的凋亡作用及对转录因子Twist、p53、Sur-vivin和hTERT(人端粒酶)基因的影响。方法:采用MTT法测定棘霉素对肝癌细胞的生长抑制率;半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测与肝癌的发生和转移密切相关的转录因子Twist,与细胞增殖和凋亡联系紧密的p53、Sur-vivin和hTERT的mRNA表达水平的改变;利用Western blot方法分析棘霉素治疗后上述基因的蛋白表达情况。结果:体外实验证实,棘霉素浓度>10.0ng/mL各组对细胞的生长抑制均显著增加,P<0.05,随棘霉素药物浓度增加,细胞抑制率明显增大。棘霉素抑制肝癌细胞株SMMC7721的作用呈剂量-时间依赖性。RT-PCR方法证实,随着棘霉素剂量的增加,肝癌SMMC7721细胞株中Twist、Survivin和hTERTmRNA表达水平逐渐下调,P<0.01,p53mRNA表达水平微弱上调,P<0.05。Western blot检测显示,Twist、Survivin和hTERT蛋白的表达量呈递减趋势,P<0.01,p53蛋白的表达微弱上调,P<0.01。结论:随着棘霉素剂量的增加,细胞凋亡率显著增加。棘霉素能够抑制与肝癌生长密切相关基因的Twist、Survivin和hTERTmRNA表达,促进p53mRNA表达上调,相应蛋白的表达呈下调和上调。棘霉素可能通过抑制肝癌细胞的生长、转移和促进肝癌细胞的凋亡起到抑制肿瘤生长的作用。

CASP3基因多态及单体型分布与乳腺癌危险性的关联研究

目的:探讨CASP3基因单核苷酸多态性与乳腺癌易感性的关系。方法:采用以自然人群为基础的病例对照设计,对251例乳腺癌患者与以1∶1频数匹配原则获得的251例对照者进行研究。从HapMap数据库中获取CASP3的TagSNPs数据,根据入选标准确定rs4647693、rs2696056和rs4647610共3个TagSNPs进行分析。基因分型采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法,单体型分析采用PHASE软件进行估计和比较。结果:以对照组初潮年龄中位数(16岁)分组,乳腺癌组和对照组间初潮年龄有统计学差异(P=0.007);以对照组平均初孕年龄中位数(24岁)分组,两组间分布有统计学差异(P=0.002)。年龄、吸烟、饮酒、饮茶、生理生育史等因素在乳腺癌组和对照组中分布无统计学差异。CASP3 TagSNPs的多态基因型在两组间的分布均无统计学上的差异(P>0.05),经年龄、吸烟、饮酒、生理生育史等因素校正后发现,CASP3基因多态与乳腺癌发病亦没有统计学意义上的关联(P>0.05)。应用PHASE分析软件的结果显示,GGA是CASP3最常见的单体型。单体型分布在乳腺癌组和对照组间不具有显著性差异(P>0.05)。结论:CASP3基因TagSNPs多态与乳腺癌发病风险可能不存在关联。

抑癌基因PTEN突变体真核表达载体的构建及其生物学作用

目的构建抑癌基因人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(PTEN)及其突变体(F341V)的真核表达载体,检测其在乳腺癌细胞系MCF-7中的表达,观察PTEN及其突变体(F341V)基因对MCF-7细胞增殖及凋亡的影响。方法设计PTEN基因引物,PCR扩增PTEN及其突变体(F341V)编码基因,构建p CMV-Myc重组载体,转染MCF-7细胞系,Western blot检测其表达,酶标仪及流式细胞术检测细胞的增殖及凋亡。结果 PTEN及其突变体(F341V)真核表达载体构建成功,且在MCF-7细胞中成功表达。转染PTEN基因的MCF-7细胞生长速度比对照组MCF-7细胞减慢,转染PTEN(F341V)基因的MCF-7细胞恢复了快速的生长速度;相反的,转染PTEN基因的MCF-7细胞凋亡率增加,转染PTEN(F341V)基因的MCF-7细胞凋亡率相比PTEN基因明显降低。结论 PTEN及其突变体真核表达载体成功转染入MCF-7细胞系中,且显著影响其增殖及凋亡。

siRNA XIAP表达载体的构建及其生物学作用

目的构建靶XIAP的siRNA表达载体，研究其对Hep3B细胞中XIAP表达的影响。方法根据siRNA设计原则，设计并合成三段XIAP的siRNA序列，克隆到pRNAT—U6．1／Neo质粒构建重组质粒；经序列分析确认质粒构建成功后，将重组质粒转染入人肝癌细胞Hep3B，通过RT．PCR、Westernblot和免疫组化分析X!AP的表达。结果重组质粒pRNAT—u6．1／Neo．XIAP经过基因序列分析，siRNA片段成功插入，转染不同siRNAXIAP质粒均可使XIAP的翻译和蛋白表达水平不同程度的降低。结论成功构建并筛选出靶向XIAP基因的siRNA表达载体，为进一步研究XIAP在调控肝癌细胞凋亡方面的作用奠定了基础。