HPV6E7介导TLR通路调控CA角质形成细胞凋亡、焦亡、增殖作用

目的:探讨HPV6E7基因介导TLR通路调控对尖锐湿疣(Condyloma acuminate,CA)角质形成细胞凋亡、焦亡和增殖的作用。方法:应用CRISPR/case9系统敲除Caspase-3和Caveolin-1基因。角质形成细胞(HaCaT细胞、HDF-a细胞)分组:分为Con组、sh HPV6E7组、HPV6E7OE组。TLR抑制剂Chloroquine干预,Re-al time PCR和Western blot定量检测角质形成细胞HPV6E7、TLR、焦亡标志性基因NLRP3 mRNA及蛋白。染色质免疫共沉淀(CHIP)检测角质形成细胞中HPV6E7与NLRP3结合。iTRAQ标记液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)分析。功能性实验:(1)CCK-8检测细胞增殖;(2)FCM检测细胞凋亡。结果:Chloroquine干预后,sh HPV6E7组和HPV6E7OE组HPV6E7、TLR、NLRP3 mRNA及蛋白显著下调,sh HPV6E7和HPV6E7OE组增殖上升,凋亡率下降,差异有统计学意义(P<0.05)。CHIP验证HPV6E7与NLRP3直接结合。LC-MS/MS分析出43个显著差异蛋白质。结论:HPV6E7是引起尖锐湿疣发病的重要基因,Chloroquine干预对尖锐湿疣角质形成细胞凋亡、焦亡和增殖作用和影响显著。