肝癌组织中凋亡信号蛋白的表达及其临床意义

[目的]分析凋亡信号蛋白(FADD、TRADD、FasL、Fas和NFκB)在人类肝癌组织中的表达及其临床意义。[方法]采用Westernblot法检测肝癌组织中上述5种凋亡信号蛋白的表达情况。[结果]在35例HCC标本中,FADD、TRADD、FasL、Fas和NFκB蛋白表达分别为37.14%(13/35)、68.57%(24/35)、68.57%(24/35)、60%(21/35)和77.14%(27/35)。其中,Fas蛋白表达随肿瘤增大而下降,同肿瘤大小之间差异有显著性(P<0.05)。FADD和Fas两蛋白表达随肿瘤恶性程度增高,而明显下降,与病理分级间差异有显著性(P<0.01,P<0.05)。TRADD和Fas蛋白表达同甲胎蛋白水平呈正相关(P<0.01)。各蛋白表达同肿瘤转移无关(P>0.05)。[结论]肝癌细胞可通过下调引起凋亡的信号蛋白的表达,如Fas,FADD;和上调引起存活信号蛋白的表达,如TRADD,NFκB等机制的协同作用,来逃避凋亡的发生,从而达到维持自身稳定的目的,这对肝癌的发展起重要作用。

特发性血小板减少性紫癜患儿外周血T细胞凋亡信号蛋白表达的临床意义

目的检测凋亡信号蛋白死亡结构域(FADD)、Fas、FasL和核因子κB(NF-κB)在特发性血小板减少性紫癜(ITP)患儿外周血T细胞中的表达,探讨其对T细胞凋亡的影响及其临床意义。方法无菌采集35例ITP患儿及30例健康儿童外周血,T细胞分离富聚柱法分离纯化T细胞,流式细胞仪检测T细胞凋亡率及Fas、FasL蛋白的表达;免疫组化法检测FADD、NF-κB P65蛋白的表达。结果ITP患儿T细胞凋亡信号蛋白Fas、FADD表达与正常儿童比较明显下降,FasL、NF-κB P65表达显著上升,差异均有显著性意义(P均<0.05);患儿外周血T细胞凋亡率明显降低,并与血小板计数呈对数正相关(r=0.880 P<0.05)。结论ITP患儿可通过下调引起T细胞凋亡的信号蛋白Fas、FADD表达,同时上调活化增殖蛋白FasL、NF-κB P65表达,导致ITP患儿T细胞凋亡减少、活性增强,引起血小板大量损伤。

APP17肽对DM大鼠海马神经元胰岛素和凋亡信号传导通路相关蛋白的影响

目的 观察糖尿病大鼠海马脑区胰岛素和凋亡信号传导通路中某些相关蛋白的表达及 APP17肽对其表达的影响。方法 链脲佐菌素诱发大鼠糖尿病模型 ,并用 APP17肽治疗。用免疫沉淀和 Western- blot法分析海马中信号传导及部分凋亡相关蛋白 ;电镜观察大鼠脑组织超微结构。结果 DM大鼠 IGF- IRα、Akt/ PKB、CREB表达明显降低 ,APP17肽治疗后明显上调 (P <0 .0 5 ) ,GSK- 3β、PP- 1及凋亡相关蛋白 Bax、AIF表达增加 ,治疗后则明显降低 (P <0 .0 5 ) ;超微结构表明 APP17肽治疗后兴奋性突触小泡明显减少。结论 糖尿病大鼠海马脑区胰岛素和凋亡信号传导通路中某些重要蛋白表达异常 ,APP17肽部分纠正这些蛋白的异常表达 ,这可能是其保护

细胞凋亡信号调节蛋白1对大鼠脊髓损伤后GFAP、vimentin表达及后肢运动功能的影响

目的探讨细胞凋亡信号调节蛋白1(ASK1)对大鼠脊髓损伤(SCI)后胶质瘢痕中中间丝蛋白胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和波形蛋白(vimentin)的表达及损伤大鼠后肢行为学和电生理变化的影响。方法采用大鼠脊髓夹伤模型,设ASK1特异性抑制剂Thioredoxin组(Trx组)、ASK1单克隆抗体组(Anti-ASK1组)、生理盐水对照组(Model组)及假手术组(Sham组),于损伤即刻在损伤局部分别给予Thioredoxin、ASK1单克隆抗体、生理盐水各10μl,Sham组大鼠仅打开椎板暴露脊髓,不造成SCI。各组大鼠定期(SCI后1、7、14、28 d)应用Western blot和免疫荧光法检测GFAP、vimentin的表达,BBB评分检测大鼠后肢行为学变化,体感诱发电位及运动诱发电位检测电生理的变化。结果 SCI后1 d各组GFAP、vimentin的表达无明显差异,7、14、28 d Trx组、Anti-ASK1组GFAP、vimentin的表达较Model组明显下降(P<0.01);SCI后1、7、14 d各组BBB评分及体感诱发电位、运动诱发电位无明显差异,SCI后28 d,Trx组、Anti-ASK1组BBB评分较Model组明显升高(P<0.01),体感诱发电位及运动诱发电位潜伏期明显缩短,波峰值明显升高(P<0.01或P<0.01)。结论抑制ASK1可减弱大鼠SCI胶质瘢痕局部GFAP、vimentin的表达,并可促进大鼠后肢运动功能的恢复和电生理的改善。

中风活心软胶囊通过靶向微小RNA-126诱导缺氧诱导因子-1α/促凋亡调节蛋白BNIP3信号通路促进自噬减轻脑缺血再灌注损伤大鼠神经损伤的作用机制研究

目的探讨中风活心软胶囊通过靶向微小RNA(miRNA)-126诱导缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/促凋亡调节蛋白BNIP3信号通路促进自噬减轻脑缺血再灌注损伤大鼠神经损伤的作用机制。方法选取30只无特定病原体(SPF)级雄性SD大鼠,随机分为空白组、模型组与治疗组,每组10只。采用Zea Longa法建立右侧大脑中动脉缺血(MCAO)大鼠模型。治疗组给予中风活心软胶囊。采用改良神经功能损害评分(mNSS)评估大鼠神经功能缺损情况,透射电镜观察缺血半暗区皮质神经元及自噬囊泡超微结构,蛋白质免疫印迹(WB)法和实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法分别检测缺血半暗区皮质雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、HIF-1α蛋白及其mRNA和miR-126的表达水平。结果模型组、治疗组mNSS评分均高于对照组,但治疗组低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组、治疗组缺血半暗区皮质mTOR、HIF-1α蛋白表达水平均高于对照组,但治疗组低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组、治疗组缺血半暗区皮质mTOR、HIF-1αmRNA表达水平均高于对照组,miR-126表达水平低于对照组,但治疗组mTOR、HIF-1αmRNA表达水平低于模型组,miR-126表达水平高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组缺血半暗区皮质神经元及电镜下自噬囊泡数量明显增加,细胞结构损坏减轻。结论中风活心软胶囊可显著提高脑缺血大鼠缺血半暗区皮质mTOR、HIF-1α因子表达,其作用机制可能是通过激活miR-126表达进而靶向调控mTOR/HIF-1α信号通路,促进自噬,从而发挥其脑保护效应。

普罗布考抑制过氧化氢诱导血管平滑肌细胞的凋亡

目的研究抗氧化剂普罗布考(probucol)对过氧化氢(H2O2)诱导血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡的影响。方法以1mmol·L-1H2O2为VSMC凋亡诱导剂,probucol浓度为100、10和1μmol·L-1,孵育6h,采用Annexin V-FITC染色、TUNEL法和Hoechst33258染色法观察细胞凋亡;Western blot检测细胞中ASK-1和Trx-1蛋白的表达。结果H2O2可促使VSMCs凋亡,细胞中ASK-1蛋白表达增加,Trx-1蛋白表达降低。Probucol可减轻H2O2所致的细胞凋亡,呈浓度依赖性;同时细胞中ASK-1蛋白表达降低,Trx-1蛋白表达增加。结论probucol能拮抗H2O2诱导的血管平滑肌细胞凋亡,其机制可能与降低细胞中ASK-1蛋白表达,升高Trx-1蛋白表达有关。

非小细胞肺癌组织AIP1、EDIL3表达变化观察

目的观察非小细胞肺癌(NSCLC)组织凋亡信号调节激酶1-相互作用蛋白1(AIP1)、表皮生长因子样结构域3(EDIL3)表达变化,分析其与微血管密度(MVD)、临床病理特征及预后的关系,为NSCLC的靶向治疗提供新的干预靶点。方法纳入155例NSCLC患者,免疫组织化学法检测癌组织和癌旁组织中AIP1、EDIL3蛋白,Weidner法检测癌组织MVD。比较不同AIP1、EDIL3表达的NSCLC患者MVD值及不同临床病理特征NSCLC患者癌组织AIP1、EDIL3表达水平。Kaplan-Meier生存曲线分析不同AIP1、EDIL3表达的NSCLC患者生存情况,多因素Cox回归分析NSCLC患者预后的影响因素。结果与癌旁组织比较,NSCLC癌组织中EDIL3阳性表达率高、AIP1阳性表达率低(P均<0.05)。不同分化程度、淋巴结转移、肿瘤直径、TNM分期的NSCLC患者癌组织中AIP1、EDIL3蛋白阳性表达率比较,P均<0.05。AIP1阳性表达的NSCLC患者癌组织MVD值低于AIP1阴性表达者(P<0.05),EDIL3阳性表达的NSCLC患者癌组织MVD值高于EDIL3阴性表达者(P<0.05)。EDIL3阳性表达的NSCLC患者3年总生存(OS)率低于EDIL3阴性表达者(P<0.05),AIP1阳性表达的NSCLC患者3年OS率高于AIP1阴性表达者(P<0.05)。淋巴结转移、TNM分期ⅢA期、EDIL3阳性表达是NSCLC患者预后不良的危险因素(P均<0.05),AIP1阳性表达是保护因素(P<0.05)。结论NSCLC癌组织中AIP1阳性表达率降低,EDIL3阳性表达率升高;癌组织中AIP1、EDIL3阳性表达率与MVD、分化程度、淋巴结转移、肿瘤直径、TNM分期有关,是NSCLC预后不良的影响因素。

丹参素经PI3K/Akt/Bax信号通路对脓毒症大鼠脑损伤的改善作用

目的:探讨丹参素经磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt)/促凋亡基因(Bax)信号通路对脓毒症大鼠脑损伤的改善作用。方法:100只SD大鼠随机分为5组:假手术组、模型组、乌司他丁组(20 mg·kg^-1)、丹参素低、高剂量组(40,80 mg·kg^-1),每组20只。除假手术组外,其余各组建立脓毒症模型。乌司他丁组、丹参素低、高剂量组给予相应药物灌胃,假手术组及模型组给予等体积的生理盐水,1次/d,持续给药7 d。实验结束后,评估大鼠神经功能,观察大鼠海马神经元病理结构,测定大鼠海马组织PI3K、Akt、Bax mRNA和蛋白表达水平。结果:与假手术组比较,模型组Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)评分、经过原平台位置的次数、原平台象限停留时间、PI3K、Akt mRNA和蛋白表达水平明显降低,逃避潜伏期、Bax mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与模型组比较,乌司他丁组和丹参素低、高剂量组BBB评分、经过原平台位置的次数、原平台象限停留时间、PI3K、Akt mRNA和蛋白表达水平明显升高,逃避潜伏期、Bax mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。与乌司他丁组比较,丹参素低剂量组各指标差异有统计学意义(P<0.05),高剂量组与其作用相似(P>0.05)。结论:丹参素可减轻脓毒症大鼠脑损伤,其机制与丹参素激活PI3K/Akt信号通路进而抑制Bax的表达有关。

宫颈癌患者血清叶酸、细胞凋亡信号受体蛋白、辅助性T细胞17表达与人乳头状瘤病毒感染的关系研究

目的分析宫颈癌患者FA、Fas、Th17表达与H PV感染的关系。方法将本院2017年1月-2019年9月收治的308例宫颈癌作为观察组,100例健康体检女性作为对照组;检测血清中FA、Fas、Th17水平及阴道组织中HPV水平。结果HPV感染患者血清中FA及Fas明显低于未感染者,Th17明显高于未感染者,差异均有统计学意义(P<0.05);宫颈癌患者HPV感染是影响患者血清中FA、Fas及Th17水平的独立性影响因素(P<0.05)。结论宫颈癌患者血清中FA、Fas明显降低,Th17显著升高,且HPV感染是影响患者血中FA、Fas及Th17水平的独立性因素。

脑缺血再灌注中nNOS介导的ASK1巯基亚硝基化促进其激活

目的本文主要研究在脑缺血再灌注早期,神经性一氧化氮合酶(nNOS)来源的NO是否能够引起凋亡信号调节激酶蛋白1(ASK1)巯基亚硝基化,以及ASK1的巯基亚硝基化与其激活的关系。方法 SD大鼠分为正常对照组,缺血复灌6 h组,7NI给药组,AMT给药组,生理盐水对照组。采用四动脉结扎去结扎法构建大鼠全脑缺血再灌注模型。运用SDS-PAGE、免疫印迹、免疫沉淀和免疫组织化学方法对蛋白质的磷酸化以及蛋白质之间的相互作用进行研究;蛋白质的S-亚硝基化的检测主要是通过"生物素转化法"(Biotin-Swich method)。结果 nNOS的抑制剂7NI能够降低ASK1的亚硝基化水平,进而降低了ASK1的磷酸化水平(P<0.05)即ASK1的活性。结论 7NI通过降低nNOS介导的ASK1巯基亚硝基化,对SD大鼠海马区脑缺血再灌注损伤的神经元起到保护作用。

ASK1在损伤的大鼠脊髓星形胶质细胞增生中的作用

目的探讨细胞凋亡信号调节蛋白1(ASK1)在损伤的大鼠脊髓星形胶质细胞增生中的作用。方法原代培养得到高纯度(>96%)大鼠脊髓星形胶质细胞,建立星形胶质细胞损伤模型。星形胶质细胞损伤后立即给予生理盐水(损伤模型组)、ASK1特异性抑制剂(Trx组)、ASK1特异性抗体(抗体中和组)处理;对照组为原代大鼠脊髓星形胶质细胞,不作任何处理。应用蛋白质印迹法检测星形胶质细胞标志蛋白胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和波形蛋白(Vimentin)的表达情况,应用免疫荧光标记技术检测星形胶质细胞划痕宽度的变化,应用CCK-8法检测星形胶质细胞增殖活性。结果损伤后24 h及72 h损伤模型组GFAP和Vimentin蛋白的表达均显著高于对照组、Trx组和抗体中和组(P<0.01);损伤后24 h及72 h损伤模型组星形胶质细胞划痕平均宽度明显小于对照组、Trx组和抗体中和组(P<0.01);损伤后12 h、24 h、72 h对照组、Trx组和抗体中和组星形胶质细胞增殖活性明显低于损伤模型组(P<0.05)。结论大鼠脊髓星形胶质细胞损伤后阻断ASK1可抑制其细胞增生。

ASK1在大鼠脊髓损伤后炎症因子介导继发损伤中的机制研究

目的探讨细胞凋亡信号调节蛋白1(ASK1)在炎症因子介导的大鼠脊髓损伤(SCI)中的作用。方法采用大鼠脊髓夹伤模型,48只大鼠分为假手术组(Sham组)、生理盐水组(Saline组)及炎症因子组(Cytokine组),用Western blot法检测ASK1和磷酸化的ASK1(pASK1)的表达,用BBB评分及Grid Walking法检测后肢行为学变化,用体感诱发电位(SEP)及运动诱发电位(MEP)检测电生理变化。结果 SCI后1周各组ASK1mRNA及蛋白水平的表达无明显变化,Cytokine组pASK1的表达较Saline组显著上调(P=0.002);SCI后3、4周时,Cytokine组BBB评分较Saline组明显下降(P=0.000、0.000);SCI后4周,与Saline组相比,Cytokine组大鼠后肢踏空率增加(P=0.032),SEP及MEP潜伏期延长(P=0.043、0.045),波峰值无显著变化(P=0.889、0.434)。结论炎症细胞因子可导致大鼠SCI后后肢运动功能障碍加重,机制可能与ASK1磷酸化水平升高有关。