稽留流产患者绒毛组织中同源框基因A10 mRNA、凋亡相关调控基因p53 mRNA的表达及其临床意义

目的探究同源框基因A10(HOXA10)mRNA、凋亡相关调控基因p53 mRNA在稽留流产(MA)患者绒毛组织中的表达水平及意义。方法将2019年6月至2021年9月监利市人民医院收治的75例MA患者纳入MA组,并将同期行人工流产的75例正常早孕者纳入对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测两组绒毛组织中HOXA10 mRNA、p53 mRNA的表达水平;采用Pearson法分析MA患者绒毛组织中HOXA10 mRNA与p53 mRNA的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线评价绒毛组织中HOXA10 mRNA与p53 mRNA表达水平对MA的诊断价值。结果与对照组相比,MA组患者绒毛组织中HOXA10 mRNA表达水平明显降低,p53 mRNA表达水平明显升高(P<0.05);MA患者绒毛组织中HOXA10 mRNA与p53 mRNA呈负相关(r=-0.453,P<0.05);绒毛组织中HOXA10 mRNA、p53 mRNA诊断MA的曲线下面积(AUC)分别为0.875、0.887,截断值分别为0.77、1.41,灵敏度均为88.0%,特异度分别为80.0%、74.7%;两者联合诊断MA的AUC为0.962,其灵敏度、特异度分别为86.7%、92.0%。结论MA患者绒毛组织中HOXA10 mRNA表达水平降低,p53 mRNA表达水平升高,两者呈负相关,且HOXA10 mRNA、p53 mRNA联合可有效提高对MA的诊断价值。

p53、PUMA、MCL-1对于凋亡途径的调控

p53是一个众所周知的肿瘤抑制基因,目前的研究表明,其在控制细胞周期动力学、细胞凋亡和肿瘤发生中起着重要的作用。p53的诱导凋亡作用对抑制肿瘤发生至关重要,其能激活多种凋亡相关基因的表达,但其决定性作用的机制尚不明确。p53上调凋亡调控因子(PUMA)与髓细胞白血病基因1(MCL-1)作为p53的靶分子,在决定细胞是否凋亡的过程中起重要作用。该文对细胞凋亡过程中p53基因的激活及其对下游PUMA、MCL-1作用的研究进行综述。

PUMA基因对胰腺癌细胞BxPC-3的促凋亡作用及其可能机制

目的:研究P53正向凋亡调节因子基因(P53 up-regulate modulator of apoptosis,PUMA)对胰腺癌细胞株BxPC-3凋亡的影响及其可能的作用机制。方法:以100 MOI的携PUMA基因重组腺病毒(Ad-PUMA)感染BxPC-3细胞0～96 h,流式细胞术检测BxPC-3细胞凋亡率,Western blotting检测BxPC-3细胞中PUMA、Bcl-2、Bax、Cytochrome C和Caspase-3蛋白的表达,Western blotting检测BxPC-3细胞中细胞质和线粒体内Bax的表达及Bax寡聚体。结果:随着Ad-PUMA感染时间的延长,BxPC-3细胞凋亡率逐渐增加,48 h时最高。Ad-PUMA感染促进BxPC-3细胞中PUMA、Cytochrome C和Caspase-3蛋白的表达,抑制BxPC-3细胞中Bcl-2蛋白的表达。Ad-PUMA感染后BxPC-3细胞的凋亡率与BxPC-3细胞中PUMA蛋白的表达具有明显的相关性。Ad-PUMA感染不影响BxPC-3细胞中Bax蛋白的总表达量,但细胞质中的Bax几乎完全消失,而线粒体中的Bax表达明显增加;Ad-PUMA感染诱导BxPC-3细胞中Bax蛋白的寡聚化。结论:PUMA基因通过线粒体途径促进胰腺癌细胞凋亡。

ASPP1基因mRNA在肿瘤细胞株中的表达初探

目的建立p53凋亡刺激蛋白基因(ASPP1)mRNA表达水平的RT-PCR测定方法;并应用该方法测定ASPP1 mRNA在正常人单核细胞与白血病细胞株Jurkat、HL-60、K562中的表达水平。方法应用单核细胞分离液分离正常人血液单核细胞,用RPMI 1640培养液培养细胞株Jurkat、HL-60、K562,所得细胞用Tripure分离试剂提取总RNA,用RT-PCR扩增。取ASPP1基因和β-actin基因的扩增产物各10μl,行溴钇锭染色,在琼脂糖凝胶上进行电泳,检测ASPP1 mRNA的表达水平。对ASPP1基因表达量与β-actin表达量的比值进行比较,从而计算ASPP1在各细胞株的相对表达量。结果在正常人单核细胞和各白血病细胞株中均有ASPP1基因的mRNA表达,ASPP1与β-actin的比值在正常人单核细胞中为0.545±0.019,而在白血病细胞株Jurkat、HL-60、K-562中分别为0.155±0.081、0.199±0.016、0.191±0.015,可见ASPP1 mRNA在正常细胞中的表达水平比在白血病细胞株Jurkat、HL-60、K-562中的表达水平高(P<0.01)。结论在肿瘤的发生、发展中,ASPP1与p53共同作用,形成ASPP-p53复合物作用于原凋亡基因启动子,能特异性增强p53结合DNA的能力,促进p53诱导细胞凋亡的作用。ASPP1的这种功能在抑制正常细胞恶性转化的过程中有重要作用。

ASPP基因家族的研究进展以及在肾癌中的研究前景

p53的凋亡刺激蛋白(ASPP)基因家族可以调控p53,在肿瘤的发生、发展中起重要作用。肾癌是泌尿系统常见的恶性肿瘤之一,其发病较为隐匿,缺乏早期临床表现。肾癌最主要的治疗方法是根治性肾切除术,其具有多药物耐药基因,对放射治疗及化学治疗不敏感。目前,ASPP基因在肾癌中的研究非常匮乏,但ASPP2在肾癌中的作用已有研究证明,且其家族在肿瘤中的作用明确。近年来,肾癌的基因靶向治疗已逐渐成为肾癌治疗的新热点,为肾癌的早期诊断和治疗提供了新思路。

p53正向细胞凋亡调控因子基因表达改变对关节软骨细胞凋亡的影响

目的 观察p53正向细胞凋亡调控因子基因（PUMA）的表达对关节软骨细胞凋亡的影响.方法 通过白细胞介素（IL）-1β干预建立小鼠骨关节炎模型,再采用小分子RNA干扰片段对小鼠软骨细胞中的PUMA进行抑制,转染前后分别检测PUMA蛋白的表达及细胞凋亡.结果 空转染对照组PUMA蛋白表达量为空白对照组的6.11倍,空转染对照组分别为两个实验组的2.02倍和3.30倍.染色显示细胞凋亡率在空白对照组为3.6％,空转染对照组29.6％,两个实验组分别为9.0％和13.2％,实验组和空转染对照组的差异有统计学意义（P＜0.01）,抑制PUMA表达后细胞凋亡明显减少.结论 骨关节炎小鼠软骨细胞中PUMA基因表达增加,提示PUMA基因参与了骨关节炎软骨细胞凋亡.

PFT-α对脑缺血后神经干细胞移植中PUMA的调控研究

目的探索p53抑制剂(PET-α)对脑缺血后神经干细胞(NSCs)中p53下游促凋亡基因(PuMA)的表达影响。方法利用SD仔鼠分离NSCs,原代及传代培养,经氧糖剥夺(OGD)处理6 h后分为OGD+二甲基亚砜(DMSO)组和OGD+PFT-α组,采用免疫印迹技术比较2组p53蛋白及PUMA的表达变化。体内实验中采用Longa法建立经CT证实的大脑中动脉栓塞模型大鼠48只,随机分为PFT-α+NSCs移植组(n=24)和DMSO+NSCs移植组(n=24);采用免疫荧光技术检测不同移植组中PUMA的表达。结果 (1)体外实验中氧糖剥夺6 h后OGD+PFT-α组中p53蛋白入核水平下调,胞浆内表达上调,而OGD+DMSO组主要表达位于胞核;PUMA的表达水平明显低于OGD+DMSO组(P<0.05);(2)体内实验中,与DMSO+NSCs组相比,PIT-α+NSCs移植组中PUMA表达阳性的细胞明显减少[(38.9±4.3)%vs.(29.4±5.6)%,P<0.01]。结论 PFT-α与神经干细胞联合应用后,可明显抑制PUMA的表达,这可能是PFT-α促进移植后神经干细胞在脑缺血区存活的重要机制。

Beclin1、p53与肺癌恶性度及疗效预后的相关性研究

目的通过定量检测肺组织中Beclin1和p53表达水平,分析自噬蛋白Beclin1与凋亡蛋白P53在肺癌发生发展中的作用,研究二者之间及其与肺癌临床病理分期的关系、为肺癌早期诊断提供新的思路和实验依据。方法选取外科手术或纤维支气管镜肺组织56例,依据2003年UICC公布的肺癌TNM分期标准同时结合临床表现、胸部CT、X线检查、纤维支气管镜检查、腹部CT或B超等将入选的50例病例进行分组:其中Ⅰ期5例,Ⅱ期10例,Ⅲ期(ⅢA+ⅢB)26例,Ⅳ期9例,各组年龄、性别等控制情况基本匹配。组织病理学分级按2003年UICC标准:G17例,G219例,G324例。另取6例癌旁组织或者病理确诊为正常组织作为对照组织。采用流式细胞术检测和分析不同病理分期以及不同临床分期肺癌组织中Beclin1、p53的表达水平,对该表达情况与对应的分期进行样本均数两两对比式统计学分析,并与正常肺组织作对照。结果 P53蛋白阳性表达百分率:肿瘤患者(63.96±9.43)%显著高于正常对照组(24.90±4.68)%,t=49.46,P<0.05;肿瘤转移者显著高于未转移者,P<0.05;并且P53蛋白表达随患者临床分期和病理分级的增加而逐渐增高(P<0.05)。Beclin1蛋白检出率的变化规律与P53蛋白检出率的变化相反:肿瘤患者Beclin1蛋白(31.72±20.53)%,显著低于正常对照组(92.26±4.51)%,t=35.84,P<0.05;该指标随患者临床分期和病理分级的增加而逐渐降低(P<0.05)。Beclin1蛋白与P53蛋白二者相关性分析,Beclin1与p53的表达呈负相关,r=-0.848,P<0.05。结论 Beclin1与p53的联合检测可以作为肺癌诊断指标,为估计肺癌的恶性度及预后提供依据。Beclin1与P53蛋白表达水平与肺癌发生发展的关系密切,肿瘤发生过程中细胞自噬作用降低和抗凋亡作用增强同时并存,提高自噬能力成为肿瘤治疗的又一途径。

重组腺病毒介导PUMA基因对胰腺癌细胞的放射增敏作用

目的探讨重组腺病毒（Ad）介导PUMA基因联合γ线对人胰腺癌的作用。方法以不同感染复数（MOI）的Ad-PUMA（10、50、100）转染胰腺癌PANC-1细胞，RT-PCR和Westernblot检测转染前后细胞内PUMA表达。PANC-1细胞分为4组：对照组、转染组、照射组、转染联合照射组。MTT比色法和流式细胞术检测各组细胞存活率和凋亡率。人胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型分为4组：对照组、转染组、照射组、转染联合照射组，在不同时间测量肿瘤生长速率和凋亡指数。结果PUMA表达随病毒MOI增加而进行性增加（MOI=10、mRNA=0．46±0．02、蛋白：0．75±0．09；MOI=50、mRNA=1．12±0．09、蛋白=1．01±0．18；MOI=100、mRNA=1．50±0．08、蛋白=1．80±0．15；P〈0．05），细胞增殖随病毒MOI增加逐渐受抑制（r=-0．98655），经7线照射后增殖抑制更加明显（r=-0．97126，P〈0．05），而凋亡率上升（照射前=45．4％±5．26％，照射后=73．2％±6．62％，P〈0．05）。Ad—PUMA转染和γ线联合照射后7～35d，裸鼠肿瘤生长速率明显低于单纯照射组、单纯转染组和对照组[第35天肿瘤体积分别为（19．82±6．45）、（39．5±9．23）、（33．6±10．3）、（52．0±11．43）mm^3，P〈0．05]，凋亡指数升高（A1分别为0．43±0．05、0．29±0．10、0．24±0．05、0．00±0．00，P〈0．05）。结论PUMA基因转染联合γ线照射可增强对胰腺癌细胞杀灭作用，联合治疗明显优于单纯照射和单纯基因治疗。

血管性痴呆早期海马神经元的线粒体-PUMA损伤机制

目的阐明血管性痴呆早期海马神经元损伤的线粒体机制。方法雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham)和实验组(BCCAO后7、14、21d)。通过间隔1周永久性结扎双侧颈总动脉(BCCAO)制备血管性痴呆模型;Sham组大鼠暴露双侧颈总动脉,但不予以结扎。采用Western Blot技术和免疫荧光染色检测海马CA1区神经元线粒体凋亡途径的相关蛋白Bax、Bcl2、凋亡相关蛋白PUMA的蛋白表达的变化,以及线粒体功能蛋白Cyt C亚细胞分布的变化。结果 (1)与Sham组相比,BCCAO各组海马CA1区Bcl2蛋白表达明显降低,而Bax蛋白表达显著升高;(2)激光扫描共聚焦显微镜结果显示BCCAO各组海马CA1区神经元中Cyt C与线粒体标志性蛋白TOM20的共表达较Sham组明显减少;(3)PUMA蛋白于BCCAO后14、21d的表达较sham组明显升高,BCCAO后7d的PUMA表达略有增加,但无显著性差异。结论血管性痴呆早期神经元线粒体产生的损伤可能与PUMA介导的凋亡通路相关。