环状RNA SEC24A对骨关节炎滑膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响及机制

背景:滑膜炎症参与骨关节炎的所有阶段,是促进骨关节炎发生发展的关键因素。研究表明,环状RNA(circRNA)在滑膜细胞及软骨细胞增殖、凋亡和细胞外基质降解过程中发挥着重要作用。目的:观察circRNA SEC24A对白细胞介素1β诱导的人滑膜成纤维细胞增殖、凋亡及炎症因子表达的影响。方法:将人滑膜成纤维细胞分为4组,包括对照组、白细胞介素1β组、空载体组、sh-circSEC24A组。除对照组外,其余3组用10 ng/mL白细胞介素1β诱导24 h建立炎症细胞模型;空载体组、sh-circSEC24A组感染空载体病毒和敲低circSEC24A的慢病毒载体。CCK-8法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡情况;ELISA法检测细胞上清液中基质金属蛋白酶9、基质金属蛋白酶13、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α水平;Western blot法检测细胞中Bax、Bcl-2、基质金属蛋白酶9、基质金属蛋白酶13、casepase3、cleaved-casepase3、casepase8和cleavedcasepase8蛋白相对表达量。结果与结论:(1)qRT-PCR结果显示,与正常组相比,白细胞介素1β诱导的人滑膜成纤维细胞中circSEC24A表达显著上调;(2)CCK-8法检测sh-circSEC24A组细胞吸光度值显著高于白细胞介素1β组和空载体组(P<0.05),流式细胞术检测sh-circSEC24A组细胞凋亡率显著低于白细胞介素1β组和空载体组(P<0.05);(3)ELISA法检测sh-circSEC24A组人滑膜成纤维细胞上清液中肿瘤坏死因子α和白细胞介素6水平显著低于白细胞介素1β组和空载体组(P<0.01,P<0.001);(4)Western blot结果显示,与白细胞介素1β组和空载体组相比,sh-circSEC24A组促凋亡因子Bax蛋白表达显著下降,抑凋亡因子Bcl-2蛋白表达显著上升(P<0.05);凋亡以及相关活化因子cleaved-casepase3和cleaved-casepase8蛋白表达均降低(P<0.05);(5)ELISA和Western blot结果显示,与白细胞介素1β组和空载体组相比,sh-circSEC24A组基质金属蛋白酶9、基质金属蛋白酶13蛋白表达显著降低(P<0.05)。结果表明,白细胞介素1β诱导的人滑膜成纤维细胞中circSEC24A表达异常增高,敲低circSEC24A表达可促进人滑膜成纤维细胞增殖,抑制细胞凋亡、炎症因子释放和细胞外基质降解,提示circSEC24A可能是早期骨关节炎的重要干预靶点。

大黄素对骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡和氧化应激的影响

背景:既往研究显示,沉默交配型信息调节因子2同源蛋白1(silent mating-type information regulator 2 homolog 1,SIRT1)-雷帕霉素机械靶蛋白(mechanistic target of rapamycin,mTOR)信号在骨关节炎进展中起重要作用,大黄素对骨关节炎软骨细胞有一定的保护作用。目的:基于SIRT1-mTOR探究大黄素对骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡和氧化应激的影响。方法:体外分离培养大鼠软骨细胞,采用10 ng/mL的白细胞介素1β诱导构建体外骨关节炎细胞模型,以CCK-8法测定经0,20,40,80,120,160μmol/L的大黄素处理后的大鼠软骨细胞活力,选出合适大黄素作用浓度。将软骨细胞随机分为对照组、模型组、大黄素低剂量组、大黄素高剂量组、SIRT1抑制剂EX527组、大黄素高剂量+EX527组,除对照组外其余各组以10 ng/mL的白细胞介素1β诱导构建体外骨关节炎模型,同时以大黄素和EX527分组处理细胞后,用CCK-8法、Edu染色法及流式细胞术分别检测各组细胞增殖与凋亡情况;用试剂盒检测各组细胞活性氧相对含量、丙二醛与抗氧化酶超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶水平;免疫印迹检测各组细胞基质降解、凋亡与SIRT1-mTOR通路相关蛋白表达。结果与结论:①与对照组相比,模型组大鼠软骨细胞活力、Edu阳性率、超氧化物歧化酶与过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶水平、Bcl-2与SIRT1蛋白表达降低,凋亡率、活性氧相对含量、丙二醛水平、Bax与基质金属蛋白酶3、基质金属蛋白酶9蛋白表达及p-mTOR/mTOR升高(P<0.05)。与模型组相比,大黄素低、高剂量组上述各项指标呈相反变化(P<0.05);EX527组各指标水平与大黄素各组呈相反趋势(P<0.05)。②与大黄素高剂量组相比,大黄素高剂量+EX527组细胞活力、Edu阳性率、超氧化物歧化酶与过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶水平、Bcl-2与SIRT1蛋白表达降低,凋亡率、活性氧相对含量、丙二醛水平、Bax与基质金属蛋白酶3、基质金属蛋白酶9蛋白表达及p-mTOR/mTOR升高(P<0.05)。③结论:大黄素可通过激活SIRT1-mTOR信号而抑制骨关节炎软骨细胞氧化应激,从而促进软骨细胞增殖并减轻其凋亡。

松萝酸调节PD-1/PD-L1信号通路对肺癌细胞增殖、凋亡和免疫逃逸的影响

目的 研究松萝酸通过调节程序性死亡受体1(PD-1)/程序性死亡配体1(PD-L1)信号通路影响肺癌细胞增殖、凋亡和免疫逃逸。方法 分离培养人CD8~+T淋巴细胞,1∶1比例与人肺癌细胞A549共培养,并将其进行分组:对照组,低浓度松萝酸组、中浓度松萝酸组、高浓度松萝酸组,松萝酸+空载组,松萝酸+过表达PD-L1组;CCK8法测定A549细胞增殖;ELISA测定细胞上清液INF-γ和TNF-α水平;流式细胞术测定A549细胞凋亡;RT-PCR检测A549细胞TNF-α、INF-γ、PD-L1、CD8~+T细胞PD-1 mRNA水平;Western blot检测CD8~+T细胞PD-1、A549细胞PD-L1、cleaved-caspase 3、ki67蛋白水平。结果 与对照组相比,低、中、高浓度松萝酸组A549细胞A_(450)值、上清液TNF-α水平、A549细胞TNF-α、PD-L1、CD8~+T细胞PD-1 mRNA水平、CD8~+T细胞PD-1、A549细胞PD-L1、ki67蛋白水平均显著性降低,A549细胞凋亡率、上清液INF-γ水平、A549细胞INF-γ mRNA水平以及cleaved-caspase 3蛋白水平升高(P<0.05)。与松萝酸+空载组相比,松萝酸+过表达PD-L1组A549细胞A_(450)值、上清液TNF-α水平、A549细胞TNF-α、PD-L1、CD8~+T细胞PD-1 mRNA水平、CD8~+T细胞PD-1、A549细胞PD-L1、ki67蛋白水平均显著性升高,A549细胞凋亡率、上清液INF-γ水平、A549细胞INF-γ mRNA水平以及cleaved-caspase 3蛋白水平均显著性降低(P<0.05)。结论 松萝酸可能通过阻滞PD-1/PD-L1信号通路诱导A549细胞凋亡,并抑制免疫逃逸和增殖。

南蛇藤素对脂多糖诱导的人牙周膜干细胞增殖、凋亡和炎症反应的影响

目的 探讨南蛇藤素(Cel)对微小RNA(miR)-223-3p/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)轴对脂多糖(LPS)诱导的人牙周膜干细胞(hPDLSCs)增殖、凋亡和炎症反应的影响。方法 分别给予不同浓度的Cel(1、2、4μmol/L)培养经1μg/ml LPS诱导的hPDLSCs,以未处理的hPDLSCs作为对照组。采用MTT法检测细胞存活率,选取合适的Cel浓度用于后续实验研究。将对数生长期hPDLSCs分为对照组、LPS组、Cel组(2μmol/L),采用LipofectamineTM2000转染试剂盒在Cel组的基础上转染细胞miR-223-3p inhibitor及阴性对照(inhibitor NC),并命名为Cel+inhibitor NC组、Cel+miR-223-3p inhibitor组。分别检测以上各组细胞凋亡、增殖以及炎症因水平;q RT-PCR检测各组细胞中miR-223-3p表达水平,Western blot检测细胞中NLRP3蛋白及凋亡蛋白-天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)表达;双荧光素酶报告基因检测实验验证miR-223-3p、NLRP3靶向关系。结果 2μmol/L Cel作用细胞后其活力最高。与对照组相比,LPS组细胞存活率、mi R-223-3p表达显著下降,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6含量、细胞凋亡率、NLRP3、Caspase-1表达显著升高(P<0.05);与LPS组相比,Cel组细胞存活率、miR-223-3p表达显著升高,TNF-α、IL-1β、IL-6含量、细胞凋亡率、NLRP3、Caspase-1表达显著降低(P<0.05);与Cel+inhibitor NC组相比,Cel+miR-223-3p inhibitor组LPS组细胞存活率、miR-223-3p表达显著下降,TNF-α、IL-1β、IL-6含量、细胞凋亡率、NLRP3、Caspase-1表达显著升高(P<0.05)。结论 Cel可以促进LPS诱导的hPDLSCs增殖,抑制细胞凋亡及炎症反应,可能与上调miR-223-3p、抑制NLRP3表达有关。

circRAF1调节人卵巢颗粒细胞的增殖与凋亡

目的探讨circRAF1在早发性卵巢功能不全(primary ovarian insufficiency,POI)中的表达及对人卵巢颗粒细胞(GCs)系(KGN细胞)增殖、凋亡的影响。方法RT-qPCR检测正常卵巢储备功能的患者(n=50)和POI患者(n=50)卵巢GCs及血清中circRAF1的表达,并分析其与卵巢储备功能指标的相关性;构建针对circRAF1的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),转染至KGN细胞;利用CCK-8、EdU实验检测细胞增殖,JC-1、Tunel实验检测细胞凋亡;RT-qPCR和WB检测细胞增殖与凋亡相关基因(FSHR、PCNA、Bcl-2、Casp-9、Bax)的表达。结果circRAF1在POI患者GCs及血清中表达下降,circRAF1的表达与血清中基础E2和AMH水平呈正相关(P<0.001),而与血清中基础FSH、LH水平呈负相关(P<0.001),同时,circRAF1的表达与AFC呈正相关(P<0.001)。干扰circRAF1的表达可抑制KGN细胞的增殖,促进其凋亡。结论POI患者GCs及血清中的circRAF1表达下调,且与卵巢储备功能下降有关;干扰circRAF1可以抑制GCs增殖,促进其凋亡。

雄激素受体抑制剂恩杂鲁胺对山羊卵泡颗粒细胞增殖凋亡的影响

旨在通过使用恩杂鲁胺探究雄激素受体(AR)对山羊卵泡颗粒细胞增殖凋亡的影响。本研究首先对山羊卵泡颗粒细胞进行体外分离培养,然后利用显微镜观察和CCK8探究颗粒细胞的恩杂鲁胺适合培养浓度;之后将试验分为3个组,即空白对照组(不做处理)、阴性对照组(DMSO处理)和试验组(恩杂鲁胺处理),每个组均设置3个重复;然后利用EDU检测颗粒细胞的增殖情况,使用Caspase3活性与细胞凋亡检测试剂盒检测颗粒细胞的凋亡情况,并利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)检测颗粒细胞增殖凋亡相关基因和蛋白的表达情况。结果表明,AR抑制剂恩杂鲁胺能够显著地抑制颗粒细胞的增殖和降低颗粒细胞中CCND1、PCNA和MKI67基因的mRNA水平,并且还能够显著抑制CCND1、PCNA和β-catenin蛋白的表达;此外,恩杂鲁胺还能够促进山羊卵泡颗粒细胞的凋亡,显著提高山羊卵泡颗粒细胞中BAX和BCL2的mRNA水平,但不影响BAX和BCL2的蛋白表达,另外恩杂鲁胺虽然没有影响CASP3基因的mRNA水平但能够提高Caspase 3的活性。这些结果表明,恩杂鲁胺抑制AR活性后能够影响颗粒细胞中β-catenin、PCNA、CCND1、Caspase 3等的表达,参与调控颗粒细胞的增殖凋亡。

甲状腺激素T3对急性酒精性肝损伤小鼠肝脏细胞增殖与凋亡的影响

目的研究甲状腺激素T3对急性酒精性肝损伤小鼠的肝脏结构与功能的影响及细胞增殖与凋亡的相关基因表达。方法对正常小鼠提前给予不同浓度的甲状腺激素T3腹腔注射干预,最后一次给药后给予50%酒精溶液一次性灌胃,24 h后处死,并留取血清和肝脏。该实验通过建立小鼠急性酒精性肝损伤模型,对甲状腺激素T3在其中的作用进行分析。结果经T3干预后的急性酒精性肝损伤小鼠可观察到肝小叶轮廓清晰,肝索排列较为整齐,但存在炎细胞浸润,血清ALT活性和肝脏ROS含量增加,高剂量组PCNA表达增加(P<0.05),凋亡基因Caspase3和Bax表达较模型组有所降低(P<0.01),但随T3干预浓度升高凋亡基因表达出现上升趋势。结论浓度较高的甲状腺激素T3干预,会使小鼠急性酒精性肝损伤加重。

和枢消积方对人肝癌细胞系HepG2增殖凋亡的影响

目的探讨和枢消积方对人肝癌细胞系HepG2增殖凋亡的影响,揭示可能的分子机制。方法使用和枢消积方作用于人肝癌细胞系HepG2,采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)、平板克隆实验检测细胞增殖能力。采用蛋白质印迹法(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2基因(BCL-2)、BCL-2相关X蛋白(BAX)、丙型肝炎病毒(HCV)非结构5A蛋白(NS5A)反式激活基因13(NS5ATP13)及蛋白激酶B(AKT)/糖原合酶激酶(GSK)/雷帕霉素靶蛋白(MTOR)相关通路蛋白的表达水平。结果和对照组相比,和枢消积方各组可使HepG2细胞活性、增殖率显著降低(P<0.05);同时可上调BAX的蛋白表达,下调BCL-2及磷酸(p)-AKT、p-GSK、p-MTOR及NS5ATP13的表达(P<0.05),呈浓度依赖性。结论和枢消积方可以抑制HepG2细胞的增殖并诱导凋亡,这可能与和枢消积方抑制NS5ATP13的表达,继而抑制AKT/GSK/MTOR信号转导通路的活化有关。

蛋白4.1R对肝细胞HL-7702增殖、凋亡以及糖酵解的影响

目的探究蛋白4.1R对肝细胞增殖、凋亡以及糖酵解的影响,并初步阐明其分子机制。方法以肝细胞株HL-7702为材料,利用CRISPR/Cas9技术构建4.1R^(-/-)HL-7702细胞株。设置对照组为正常培养的4.1R+/+HL-7702细胞,实验组为4.1R^(-/-)HL-7702细胞。细胞在培养24、48以及72 h时,分别用CCK-8及EdU-488染色,然后利用酶标仪以及流式细胞术检测细胞的增殖能力。细胞经Annexin V-FITC/PI染色后,流式细胞术检测HL-7702细胞在培养24、48以及72 h时的凋亡水平。利用生化试剂盒分别检测HL-7702细胞葡萄糖摄取量、乳酸分泌量以及ATP生成的变化。pH计检测培养48 h HL-7702细胞上清培养基的pH值。qRT-PCR检测HL-7702细胞糖酵解过程关键调节酶HK2、PFKL、PKM2以及LDHA的mRNA表达量。Western blotting检测AMPK、p-AMPK、Raptor以及p-Raptor的蛋白表达量。结果Western blotting以及基因测序结果表明4.1R^(-/-)HL-7702细胞株构建成功。与对照组相比,4.1R^(-/-)组的CCK-8和EdU-488实验结果均显示HL-7702细胞的增殖能力降低;细胞凋亡实验结果表明,4.1R^(-/-)HL-7702细胞凋亡水平升高。蛋白4.1R的缺失导致HL-7702细胞葡萄糖摄取量(P<0.05)、乳酸分泌量(P<0.001)、ATP生成(P<0.001)下降,细胞上清培养基pH值(P<0.01)升高。qRT-PCR实验结果表明糖酵解过程关键调节酶的mRNA表达量均下降(P<0.001)。相较于HL-7702细胞,4.1R^(-/-)HL-7702细胞的AMPK和Raptor蛋白表达量下降,p-AMPK和p-Raptor蛋白表达量升高。结论蛋白4.1R的缺失导致HL-7702细胞增殖能力降低、凋亡水平增加,糖酵解过程被抑制,其调控机制与下游AMPK-mTORC1信号通路的激活密切相关。

STAT3介导甲基化抑制剂5-AZA-DC调控子痫前期滋养细胞凋亡、增殖、侵袭与迁移的作用及分析

目的探讨甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-AZA-DC)对子痫前期滋养细胞凋亡、增殖、侵袭与迁移的调控。方法收集40例正常妊娠组产妇和40例子痫前期(PE)组产妇胎盘组织,采用分娩后胎盘HE染色,胎盘组织中全基因组甲基化测序(WGBS),体外培养HTR8/Svneo、JEG-3、JAR、BeWo滋养细胞株,分为空白对照组(Control组)、STAT3沉默组(shSTAT3组)、STAT3过表达组(STAT3^(OE)组)。应用5-AZA-DC处理,采用CCK8、流式细胞技术、Transwell侵袭和细胞划痕实验,检测滋养细胞凋亡、增殖、侵袭与迁移。采用t检验和单因素方差分析,对数据进行统计分析。结果(1)在胎盘组织中,与正常妊娠组相比,PE组血管腔变小,血管闭塞,血流量少,绒毛间质间纤维蛋白沉积,绒毛可见梗死、玻璃样变。WGBS检测出PE组甲基化水平显著增高,其中STAT3[(17.25±1.05)vs.(30.36±1.33),P<0.01]、PTEN[(13.33±0.71)vs.(23.05±1.17),P<0.02]、TSC2[(15.28±1.43)vs.(26.53±1.15),P<0.02]基因为甲基化差异显著基因,差异有统计学意义。(2)在细胞株中,与空白对照组相比,5-AZA-DC干预后滋养细胞凋亡减少、增殖上调、侵袭与迁移上调,差异有统计学意义。结论STAT3基因是引起子痫前期发病的重要基因,5-AZA-DC干预对子痫前期滋养细胞凋亡、增殖、侵袭与迁移作用和影响显著。5-AZA-DC可能成为介导表观遗传学治疗子痫前期的潜在药物。

基于TLR4/NF-κB信号通路探讨祛脂愈肝汤对肝星状细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨祛脂愈肝汤含药血清对肝星状细胞(HSC-T6)增殖、凋亡及TLR4/NF-κB信号通路的影响。方法制备祛脂愈肝汤含药血清,通过抵抗素诱导HSC-T6细胞建立非酒精性脂肪性肝纤维化模型,设置空白组、模型组、祛脂愈肝汤含药血清低、中、高剂量组及吡格列酮组,采用细胞增殖与毒性检测法(CCK-8)检测各组细胞增殖情况,油红O染色观察脂质沉积程度,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组细胞上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞Toll样受体4(TLR4)、核转录因子-κB p65(NF-κB p65)、IκB磷酸化激酶(IKK alpha/beta)的蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组细胞表现为激活型状态,细胞内蓄积有大量橘红色脂滴,细胞增殖率升高(P<0.05),细胞上清液IL-1β、IL-6、TNF-α含量显著升高(P<0.01),TLR4/NF-κB通路相关的TLR4、NF-κB和IKK的蛋白表达水平均显著增高(P<0.01)。与模型组比较,各药物组细胞生长被抑制,细胞内脂滴减少,均可抑制细胞增殖(P<0.05),并能促进细胞凋亡(P<0.05),相关炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α表达均明显降低(P<0.01),TLR4/NF-κB通路相关的TLR4、IKK和NF-κB的蛋白表达水平均显著下调(P<0.01)。结论祛脂愈肝汤能通过调控TLR4/NF-κB信号通路,抑制细胞增殖活化,促进凋亡,减少相关炎症因子释放,从而达到有效治疗NAFLD肝纤维化的作用。

精氨酸加压素联合丹参素对骨质疏松患者成骨细胞凋亡及增殖的影响

目的:探究精氨酸加压素联合丹参素对骨质疏松患者成骨细胞凋亡及增殖的影响。方法:选择1例接受髋关节手术治疗的骨质疏松患者骨组织为研究材料,采用骨组织块培养法培养原代成骨细胞,并将其分为A组(生理盐水干预)、B组(精氨酸血管加压素干预)、C组(丹参素干预)及D组(精氨酸加压素+丹参素干预)。干预3 d后,用TUNEL法评估4组细胞凋亡情况,并用Western-blot法检测细胞凋亡相关蛋白Bax、AIF、cyto-C蛋白的表达情况;用CCK-8法检测4组细胞的增殖及BMP-2增殖蛋白的表达情况。结果: 4组成骨细胞凋亡以D组最小,B和C相近,A组最大。除B组和C组相比差异无统计学意义外( P>0.05),其余各组相比,差异有统计学意义(P <0.05);细胞凋亡相关蛋白Bax、AIF、cyto-C蛋白表达情况为D组最小,B和C组次之,A组最大。其中,D组明显低于B组和C组( P <0.05),B组和C组明显低于A组( P <0.05),B组和C组相比,差异无统计学意义( P >0.05);4组细胞增殖及BMP-2增殖蛋白表达D组最大,B组和C组次之,A组最小。其中,D组明显高于B组和C组( P <0.05),B组和C组明显高于A组( P <0.05)。结论:精氨酸加压素联合丹参素可有效抑制骨质疏松患者成骨细胞凋亡,同时还可促进成骨细胞增殖,且效果优于单独干预,是值得推广的一种干预治疗方案。

钩藤生物碱对自发性高血压大鼠胸主动脉成纤维细胞凋亡/增殖及FN、LN的影响

目的研究钩藤碱、异钩藤碱和钩藤总生物碱对自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat,SHR)胸主动脉血管外膜成纤维细胞(vascular adventitial fibroblasts,VAF)凋亡、增殖及Bcl-2、Bax、c-Fos、c-Myc、层黏连蛋白(laminin,LN)、纤维层黏连蛋白(fibronectin,FN)的影响。方法选择8周龄雄性SHR40只,随机分为模型组、卡托普利组(17.5mg/kg)、异钩藤碱组(5.0mg/kg)、钩藤碱组(5.0mg/kg)和钩藤总生物碱组(50.0mg/kg),每组8只。另选取8周龄雄性Wistar大鼠8只作为正常组。模型组和正常组灌胃给予等容量生理盐水。各组给药容积为每次10mL/kg,每周给药6天,连续8周,随体重变化调整给药量。采用AnnexinV-FITC结合PI染色、流式细胞术分析胸主动脉VAF凋亡率;免疫组化法检测胸主动脉VAFBcl-2、Bax、c-Myc、c-Fos、FN及LN蛋白表达;原位杂交法检测胸主动脉VAF转化生长因子-β1(transforming growth factor,TGF-β1)mRNA表达。结果与模型组比较,各用药组干预4、8周大鼠尾动脉收缩压均降低,胸主动脉VAF凋亡率、Bax蛋白均升高,Bcl-2、c-Fos、FN、LN蛋白及TGF-β1mRNA均降低,钩藤碱组、异钩藤碱组及钩藤总生物碱组c-Myc蛋白表达均降低,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。与卡托普利组比较,钩藤碱组、异钩藤碱组及钩藤总生物碱组大鼠尾动脉收缩压、c-Fos蛋白表达及TGF-β1mRNA差异无统计学意义(P>0.05);胸主动脉VAF凋亡率升高,Bcl-2、c-Myc及LN蛋白表达均降低,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);钩藤碱组、异钩藤碱组Bax蛋白表达均升高,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);异钩藤碱组FN蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。钩藤碱组、异钩藤碱组及钩藤总生物碱组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论钩藤碱、异钩藤碱和钩藤总生物碱可能通过调节原癌基因Bcl-2和Bax蛋白表达,促进SHR胸主动脉VAF凋亡,通过下调c-Fos、c-Myc蛋白和TGF-β1mRNA表达途径抑制SHR胸主动脉VAF增殖,并通过下调FN和LN蛋白表达而减轻细胞外基质的沉积,从而改善胸主动脉外膜重塑,降低尾动脉收缩压。

中草药复方制剂对青脚麻鸡法氏囊免疫功能、抗氧化性及增殖凋亡基因表达的影响

试验旨在研究由金银花、黄连、蒲公英等药材组成的中草药复方制剂,对青脚麻鸡法氏囊组织结构、抗氧化功能、细胞因子和抗体分泌及增殖凋亡相关基因(PCNA和Caspase-3)表达的影响。采用单因子试验设计,将400羽青脚麻鸡按照体重相近原则分为对照组(基础日粮)和试验Ⅰ-Ⅲ组(分别添加0.5%、1.0%和1.5%中草药复方制剂),每组5个重复(n=20),试验期56 d。结果表明,28日龄时,添加1.0%中草药复方制剂可增加青脚麻鸡法氏囊细胞因子(IL-2和IFN-γ)、IBDV抗体和GSH-Px含量及PCNA mRNA和蛋白表达量(P<0.05),降低Caspase-3 mRNA和蛋白表达量(P<0.05)。56日龄时,添加1.0%中草药复方制剂可增加青脚麻鸡法氏囊IFN-γ、IBDV抗体和GSH-Px含量(P<0.05),降低MDA含量及Caspase-3蛋白表达量(P<0.05)。显微观察可见,28和56日龄时,添加1.0%中草药复方制剂可显著增加法氏囊小叶和淋巴小结面积(P<0.05),降低法氏囊Caspas-3阳性细胞数量,说明日粮中添加1.0%中草药复方制剂对法氏囊组织结构及免疫抗氧化功能均有明显改善,对法氏囊增殖和凋亡相关基因表达有明显调控作用。文章分别从分子和组织水平揭示中草药复方制剂对青脚麻鸡法氏囊生长发育和免疫功能的影响及可能机制,为新型中草药复方制剂研发及其在青脚麻鸡生产中的应用提供科学依据。

子宫内膜癌患者病灶超声造影成像检查结果、增殖凋亡基因编码蛋白表达及其相关性分析

目的探讨子宫内膜癌病灶超声造影参数、病灶组织增殖凋亡蛋白表达变化及其相关性。方法选择79例子宫内膜癌患者为子宫内膜癌组,53例子宫肌瘤患者为子宫肌瘤组。两组患者均行超声造影成像检查,记录病灶峰值强度(Peak)、达峰时间(TTP)和造影剂平均渡越时间(MMT)。均行子宫切除术,留取病灶组织,采用Western blotting法测算两组病灶组织Survivin、Bcl-2、Bax、Beclin1、CDK4、CDK6蛋白相对表达量。结果子宫内膜癌组病灶Peak、MTT、TTP均高于子宫肌瘤组病灶(P均<0.05)。子宫内膜癌组病灶组织Survivin、Bcl-2、CDK4、CDK6表达量高于子宫肌瘤组(P均<0.05),Bax和Beclin1蛋白表达量低于子宫肌瘤组(P均<0.05)。子宫内膜癌患者病灶Peak与病灶组织Survivin、Bcl-2、CDK4、CDK6表达量均呈正相关(r分别为0.704、0.692、0.737、0.730,P均<0.05),与Bax和Beclin1蛋白表达量均呈负相关(r分别为-0.687、-0.709,P均<0.05);MTT与病灶组织Survivin、Bcl-2、CDK4、CDK6表达量均呈正相关(r分别为0.689、0.731、0.725、0.694,P均<0.05),与Bax和Beclin1蛋白表达量均呈负相关(r分别为-0.714、-0.698,P均<0.05);TTP与病灶组织Survivin、Bcl-2、CDK4、CDK6表达量均呈负相关(r分别为-0.706、-0.725、-0.723、-0.701,P均<0.05),与Bax和Beclin1蛋白表达量均呈正相关(r分别为-0.696、-0.719,P均<0.05)。结论与子宫肌瘤患者相比,子宫内膜癌患者病灶超声造影参数Peak、MTT、TTP较高,病灶组织Survivin、Bcl-2、CDK4、CDK6表达量较高,Bax、Beclin1表达量较低。子宫内膜癌患者病灶Peak、MTT、TTP与病灶组织增殖、凋亡蛋白Survivin、Bcl-2、Bax、Beclin1、CDK4、CDK6表达量有关。对子宫内膜癌患者病灶行超声造影成像检查有助于判断患者细胞凋亡相关蛋白表达情况。

甲醇和汽油汽车尾气对A549细胞株细胞毒性及增殖和凋亡功能的影响

目的:比较甲醇燃料汽车尾气和汽油燃料汽车尾气对A549细胞株的细胞毒性及增殖和凋亡功能的影响.方法:1)MTT比色法检测受试物细胞毒性.2)受试物体外培养实验:汽油组剂量分组为:0.125 L/ml,0.062 5 L/ml,0.03125L/ml,0.015 6 L/ml,0.007 8 L/ml和一个空白对照;甲醇组剂量分组与汽油相同.A.细胞培养介质乳酸脱氢酶活性的测定;B.细胞形态学观察;C.流式细胞术a.检测细胞周期并计算细胞增殖指数;b.观察细胞亚二倍体峰的变化,计算凋亡百分比;结果:1)MTT比色法汽油组在0.125 L/ml剂量组OD值与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05);甲醇组在1.0L/ml剂量组OD值与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05);2)受试物体外培养实验:A.细胞培养介质乳酸脱氢酶活性的测定:汽油组在0.0625～0.125 L/ml各剂量组LDH值与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05),同等剂量下甲醇组与对照组相比,差异无统计学意义(P＞0.05);B.细胞形态学观察:汽油组在0.125 L/ml,可见大量死亡细胞和凋亡细胞数增加,相同剂量甲醇组未见明显改变;C.流式细胞术:仅汽油组0.015 6,0.031 25L/ml、0.062 5 L/ml剂量组细胞增殖指数显著低于对照组(P＜0.05),汽油组和甲醇组在0.015 6～0.062 5 L/ml剂量组凋亡百分比均高于对照组,但后者作用更强.结论:在同等剂量下,汽油燃料尾气对A549细胞株的毒性及对细胞增殖的抑制明显高于甲醇,但甲醇诱导A549细胞凋亡的作用略强.

淫羊藿苷对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡作用的实验研究

目的:研究淫羊藿苷(icariin,ICA)对MCF-7细胞增殖/凋亡作用的影响及其作用机制。方法:采用MTT比色分析法及Annexin V/PI标记流式细胞仪检测ICA对MCF-7细胞的增殖与凋亡作用的影响,采用Western blot检测蛋白表达,研究ICA是否通过ERK/MAPK信号转导通路起作用。结果:与对照组比较,MCF-7细胞培养24 h后,ICA各组OD值均降低,差异有统计学意义(P<0.05);培养48 h后,各组差异均有统计学意义(P<0.05);培养72 h后,各组差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,培养24 h后,10 m M ES单独作用后对MCF-7细胞无明显的增殖作用,ES加ICA组有明显的抑制作用。20 m M ES诱导结果与10 m M的结果一致。不同浓度的ICA作用48 h后,总ERK1/2和MEK蛋白表达均无明显变化,MEK磷酸化水平同样无明显变化,ERK1/2磷酸化水平增高。结论:淫羊藿苷对雌激素阳性人乳腺癌细胞有明显的抑制增殖与诱导凋亡的作用,同时可拮抗雌激素对乳腺癌细胞的增殖作用,但是其作用机制尚不清楚。

牛膝总皂苷含药血清对兔膝软骨细胞增殖与凋亡的实验研究

目的观察牛膝总皂苷(TSA)含药血清对兔膝软骨细胞增殖与凋亡的影响。方法建立离体软骨细胞培养体系,MTT法观察TSA含药血清对软骨细胞增殖的影响,RT-PCR法测定TGF-β1mRNA的表达;流式细胞分析法观察TSA含药血清对软骨细胞的凋亡,检测软骨细胞中Caspase-3活性。结果 TSA含药血清培养软骨细胞72h后,TSA高剂量组与硫酸氨基葡萄糖组能显著提高软骨细胞的增殖;TSA高、TSA中剂量组与硫酸氨基葡萄糖组能显著提高TGF-β1mRNA的表达;TSA高、中剂量组和硫酸氨基葡萄糖组在作用48h后,能够显著降低软骨细胞的凋亡数量,呈一定的量效关系;TSA高、中剂量组和硫酸氨基葡萄糖组在作用24h后,能够显著降低caspase-3在软骨细胞中的表达,随着干预时间的延长,低剂量组也出现抑制作用。结论 TSA含药血清对软骨细胞有促进增殖和抑制凋亡的作用,且呈浓度和时间依赖性,尤其是高剂量的TSA含药血清效果明显。

水龙骨提取物对宫颈癌Hela细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨水龙骨提取物(RPNE)对宫颈癌Hela细胞增殖和凋亡的影响。方法体外培养宫颈癌Hela细胞至对数生长后分为对照组和RPNE处理组。采用2、4和8μg/ml RPNE处理宫颈癌Hela细胞48 h或8μg/ml RPNE处理12、24和48 h后,通过相差倒置显微镜观察细胞形态并采用MTS细胞活性法检测细胞增殖活性,AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术检测2、4和8μg/ml RPNE处理48 h后的细胞凋亡率,基于免疫缺陷小鼠移植瘤生长抑制实验研究RPNE处理2周后的体内抗肿瘤活性。结果相差显微镜下观察发现4μg/ml以上RPNE处理48 h能显著诱导Hela细胞生长抑制和凋亡。MTS检测细胞相对活性结果显示RPNE处理可呈浓度和时间依赖性地抑制Hela细胞活性(P<0.05)。Annxin-Ⅴ/PI双染流式细胞术分析显示,与0μg/ml相比,2~8μg/ml RPNE处理组的凋亡率均升高,总体上呈浓度依赖性(P<0.05)。对照组肿瘤体积在接种第8 d生长加速,而RPNE组则开始下降。处理第10 d后,RPNE组的瘤体积低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);RPNE组的瘤体质量低于对照组(P<0.05)。结论 RPNE能在体外诱导宫颈癌细胞发生显著凋亡和增殖抑制且可有效诱导裸鼠移植瘤生长抑制,具有潜在治疗宫颈癌的功效。

4-HPR联合DDP对HeLa细胞的增殖和凋亡作用

背景与目的：4-羟苯基维胺脂（N-4-hydroxyphenyl retinode，4-HPR）是一种全反式维甲酸的衍生物，它对多种肿瘤细胞有化学预防和治疗的双重作用且毒副作用小；还对放疗和化疗方法有不同程度的增敏作用。顺铂（cis-platinμm，DDP）是宫颈癌常用的化疗药物，但因其毒副作用及耐药等问题，临床应用受到限制。本研究旨在探讨4-HPR联合DDP对宫颈癌细胞增殖、凋亡的影响及其可能的机制，最终为临床上应用4-HPR治疗宫颈癌提供实验依据。材料与方法：采用MTF法检测单用4-HPR、DDP及两药联合时对HeLa细胞增殖的影响，分析4-HPR与DDP在抑制HeLa细胞增殖中的相互作用。用流式细胞仪测定细胞周期变化和细胞凋亡；用Hoeehst染色法检测细胞核的改变。结果：4-HPR对HeLa细胞的增殖抑制的浓度在（2-40）μmol／L范围内，并呈现较好的浓度和时间依赖性，在两药合用时上述作用更加明显；4-HPR可诱导细胞凋亡并将细胞阻滞于G2-M期和S期，当4-HPR浓度为10、20、40μmol／L时细胞的凋亡率分别为2．55％，16．55％，22．91％，而G2-M期和S期的细胞比率也随4-HPR的浓度升高而增加。当以上3种浓度的4-HPR与1μmol／L DDP联合作用时，两药呈现协同作用。结论：4-HPR（浓度在2-40μmol／L范围内）对HeLa细胞有显著的增殖抑制作用，且随4-HPR的浓度升高而增加，与DDP联合使用能增强HeLa细胞的敏感性，当以上3种浓度的4-HPR与1 μmol／L DDP联合作用时，两药呈现协同作用。4-HPR（浓度在2-40 μmol／L范围内）对HeLa细胞有显著的增殖抑制作用，与DDP联合使用能增强HeLa细胞的敏感性，这一作用可能与DDP和4-HPR协同诱导细胞凋亡及G2-M期和S期阻滞有关。