微小RNA-103a-3p通过肿瘤蛋白53调控凋亡抑制剂1/P53对骨质疏松症的影响

目的探讨微小RNA(miR)-103a-3p调控细胞肿瘤蛋白53调控凋亡抑制剂1(TRIAP1)对成骨细胞分化以及去卵巢小鼠骨量的影响。方法MC3T3-E1细胞分为正常对照(NC)组、miR-103a-3p-NC组、miR-103a-3p模拟(mimc)组、miR-103a-3p mimic+TRIAP1-NC组、miR-103a-3p mimic+TRIAP1 mimic组。Real-time PCR检测细胞miR-103a-3p、TRIAP1、P53的mRNA表达,MTT法和流式细胞术检测细胞增殖及凋亡,免疫荧光染色和茜红素染色检测细胞骨架F-actin表达和矿化情况,ELISA检测细胞碱性磷酸酶(ALP)活性。24只雌性小鼠设为sham组、骨质疏松症(OP)组、miR-103a-3p antagonist-NC组和miR-103a-3p antagonist组,每组6只摘取双侧卵巢制备OP模型,sham组仅分离卵巢组织周围脂肪。测定骨组织miR-103a-3p、TRIAP1、P53、ALP、骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)的mRNA表达,microCT测定骨密度(BMD)、骨矿物质含量(BMC),HE染色观察骨组织病理改变。结果细胞转染miR-103a-3p mimic后,miR-103a-3p及P53表达升高、TRIAP1表达降低,细胞增殖降低、凋亡增加,F-actin表达减弱,钙结节数量减少,ALP活性降低(P<0.01);而在增加转染TRIAP1 mimic后,以上miR-103a-3p mimics导致的结果均得到显著逆转(P<0.01)。OP组小鼠骨组织miR-103a-3p、P53表达升高,TRIAP1、ALP、OCN、OPN基因表达降低,BMD、BMC降低,骨组织结构破坏(P<0.05);miR-103a-3p antagonist组小鼠骨组织miR-103a-3p及P53表达降低,TRIAP1、ALP、OCN、OPN基因表达升高,BMD、BMC升高,骨组织结构改善(P<0.05)。结论MiR-103a-3p可介导TRIAP1/P53抑制成骨细胞增殖及矿化,而miR-103a-3p拮抗治疗可减少OP小鼠骨量丢失。

细胞凋亡抑制剂防护晶状体上皮细胞氧化损伤的信号转导机制

目的:旨在探讨细胞凋亡抑制剂阿魏酸钠(SF)、五味子乙素(Sch B)、菊花(FC)、车前子(SP)对氧化损伤的晶状体上皮细胞(LEC)内Ca2+、环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)的影响,揭示天然药物防治白内障的细胞和分子学机制. 方法:将四种药物与H2O2造成氧化损伤的体外培养牛LEC共同孵育后,进行以下研究:1、采用四甲基偶氮唑兰(MTT)法观察在不同时间和浓度条件下LEC活性的变化.2、采用荧光分光光度法测定不同时间细胞内钙离子浓度([Ca2+]i).3、采用放射免疫法测定不同时间LEC内cAMP、cGMP的含量.观察药物的剂量效应与时间效应.

凋亡抑制剂zVAD对脑缺血再灌注小鼠外周血线粒体DNA拷贝数的影响

目的探讨凋亡抑制剂zVAD对脑缺血再灌注小鼠线粒体DNA拷贝数的影响。方法 80只雄性25~30gC57BL/6小鼠,随机分为大脑中动脉栓塞（MCAO）模型组（3组共24只）、模型给药组（3组共24只）、假手术组（3组共24只）和对照组（8只）。MCAO模型组应用线栓法,构建小鼠大脑中动脉栓塞模型并在1h后进行再灌注,模型给药组在再灌注前腹腔注射10mmol/L的ZVAD10mL/kg,假手术组暴露颈内动脉后缝合皮肤,对照组不进行任何操作。分别于再灌注后不同时间点（24、48、72h）,对经手术操作的每组各8只小鼠进行改良神经功能损伤评分（mNSS）,评分后取血约200μL并提取外周血基因组DNA,real-time PCR法检测相对线粒体DNA拷贝数。结果 MCAO模型组和模型给药组术后24、48和72h的mNSS评分均明显高于相应对照组（P〈0.05）,术后48、72h,模型给药组mNSS评分均明显低于相应MCAO模型组（P〈0.05）;术后24、48 h,MCAO模型组和模型给药组线粒体DNA拷贝数均高于对照组或假手术组,模型给药组高于MCAO模型组（P〈0.05）;术后72h,各组的线粒体DNA拷贝数差异无统计学意义（F=1.58,P〉0.05）。结论凋亡抑制剂zVAD对脑缺血再灌注小鼠可起到一定的脑保护作用,这可能由于zVAD抑制了线粒体介导的凋亡通路,并通过端粒—线粒体途径促进了外周血线粒体DNA拷贝数的升高。

凋亡抑制剂TPCK对致痫大鼠早期抽搐发作的影响

目的研究凋亡抑制剂TPCK是否能减少杏仁核内注射海人酸致痫大鼠的抽搐发作次数。方法一次抽搐定义为出现肢体阵挛或全身痉挛。给药组在海人酸注射前1h腹腔注射100mg/kg·b.w.TPCK,而对照组注射溶剂。自海人酸注射后第2周开始,对每只动物每天观察2h,每周观察5d,持续6周。以周为单位记录抽搐次数。6周后取海马组织计数CA3区活神经元数。结果在同一观察时段内,给药组和对照组的抽搐发作次数无显著性差异(P>0.1),但给药组海马CA3区存活神经元数显著高于对照组(P<0.05)。结论虽然凋亡抑制剂TPCK对海马CA3区神经元由海人酸引起的神经毒性有保护作用,但不能减少海人酸致痫大鼠的抽搐次数。

凋亡抑制剂zVAD对脑梗死小鼠外周血白细胞端粒长度的影响

目的探讨凋亡抑制剂z VAD对脑梗死小鼠外周血白细胞端粒长度的影响。方法将80只雄性C57BL/6小鼠,随机分为10组:即Model组(3组共24只)、z VAD组(3组共24只)、Sham组(3组共24只)和Control组(8只)。Model组与z VAD组均采用线栓法构建小鼠大脑中动脉栓塞模型,1 h后完成再灌注。再灌注后z VAD组立即腹腔注射浓度为2.3mmol/L的z VAD 10ml/kg进行干预。Sham组则暴露颈动脉后缝合皮肤进行假手术操作。Control组不进行任何操作。造模后,分别于不同时间点对各组小鼠进行改良神经功能损伤程度评分(m NSS),评分后立即取血,提取外周血基因组DNA,real-time PCR法检测相对端粒长度。Control组则选取再灌注后72 h时间点,进行同期同质的评分与测量。结果术后48 h和72 h,z VAD组的m NSS评分均明显低于相应的Model组,但仍高于相应的Sham组(P<0.05)。术后72 h,z VAD组相对端粒长度明显长于Model组(P<0.05),且基本与Sham组和Control组的长度持平(P>0.05)。结论凋亡抑制剂z VAD可减缓脑梗死小鼠外周血白细胞端粒长度缩短,并对神经功能损伤起到一定的保护作用。

阻断细胞内凋亡抑制剂可以清除HBV

【据《Proc Natl Acad Sci U S A》2015年5月报道】题：阻断细胞内凋亡抑制剂可以清除HBV（作者Ebert G等）来自墨尔本大学的Ebert G等已经发现细胞内凋亡蛋白抑制剂（c IAPs）可以通过阻止肿瘤坏死因子（TNF）介导的对感染细胞的杀伤/死亡作用,削弱HBV的清除。对于治疗的重大意义是,这一发现能够转化为治疗药物从而清除感染的细胞。c IAPs抑制剂作为抗癌药物来促进TNF介导的肿瘤杀伤作用。这些药物叫做Smac的模拟物,因为它们可以模拟内源性蛋白Smac/Diablo的作用来拮抗c IAP的功能。

特异性坏死性凋亡抑制剂-1(Nec-1)减轻脊髓损伤模型大鼠胶质瘢痕的形成

目的观察特异性坏死性凋亡抑制剂-1(Nec-1)对脊髓损伤模型大鼠胶质瘢痕形成的影响及其机制。方法将大鼠随机分为假手术组、模型组(坠落法)及受体相互作用蛋白激酶1(RIPK1)抑制剂Nec-1组(在大鼠侧脑室注射10μmol/L Nec-110μL)。BBB评分法测定大鼠后肢运动功能,免疫荧光检测胶质瘢痕形成,Western blot检测组织蛋白酶(cathepsin)B、caspase-3、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和vimentin表达。结果术后第14天,与假手术组相比,模型组和Nec-1组BBB评分值均显著降低(P<0.05),与模型组相比,Nec-1组BBB评分值显著升高(P<0.05)。术后第14天,假手术组未见NF-200荧光,模型组及Nec-1组均可见NF-200荧光,与模型组相比,Nec-1组NF-200荧光标记强度显著降低(P<0.05)。术后第7天及14天,与假手术组相比,模型组、Nec-1组cathepsin B、caspase-3、GFAP、vimentin蛋白水平显著升高(P<0.05),与模型组相比,Nec-1组cathepsin B、caspase-3、GFAP和vimentin蛋白水平显著降低(P<0.05)。结论Nec-1可能通过调控cathepsinB和caspase表达,减轻大鼠脊髓损伤后胶质瘢痕形成,促进神经功能恢复。

凋亡蛋白抑制剂家族研究进展

凋亡蛋白抑制剂(inhibitor of apoptosis proteins,IAPs)编码一组结构相关的蛋白,该家族成员不仅可以抑制细胞凋亡, 而且参与多种似无关联的生物学功能,如调节细胞周期和细胞分裂等.迄今为止,在人体新发现的IAPs家族有8个成员,分别是HIAP-1、HIAP-2、XIAP、ML-IAP、Survivin 和ILP-2/Ts-IAP、NAIP、BRUCE/apollon等.本文对现有的IAPs家族成员的结构特征和功能作一总结,尤其对Survivin的分子构成、功能、作用机制、组织分布、表达特点、生物学特性以及与肿瘤治疗相关的研究进展方面进行重点综述.

坏死性凋亡特异性抑制剂抗环孢素A致坏死性凋亡的机制研究

目的研究坏死性凋亡特异性抑制剂(Nec-1)抗环孢素A致坏死性凋亡的机制。方法将30只C57/BL6雄性小鼠随机分为对照组、环孢素A组、Nec-1组,对照组给予橄榄油口服,环孢素A组以100 mg/(kg·d)灌胃给予环孢素A,Nec-1组在给予环孢素A前0.5 h采取腹腔注射方式给予Nec-1 2.5 mg/kg。14 d后测定小鼠血液肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)含量变化,皮质中还原型谷胱甘肽(GSH)活性变化,丙二醛(MDA)含量变化;检测皮质中受体连接蛋白(RIP3)表达。结果处理后14 d,与对照组比较,环孢素A组能使血清中SCr及BUN水平明显升高,皮质中GSH活性下降,丙二醛(MDA)水平升高;与环孢素A组比较,Nec-1组SCr及BUN水平明显下降,GSH活性增加,丙二醛含量下降(P<0.05),但3组小鼠皮质中RIP3表达无明显差异。结论 Nec-1对环孢素A肾毒性具有保护作用,表明环孢素A肾毒性可能与坏死性凋亡有关。

新发现和正在研究中的细胞凋亡蛋白抑制剂(综述)

自从杆状病毒中分离出凋亡蛋白抑制剂 (inhibitorofapoptosisproteins ,IAPs)后 ,发现的凋亡蛋白抑制剂的种类和数量逐渐增多。迄今为止 ,在人体新发现的IAPs有HIAP - 1(humanIAP -1)、HIAP - 2 (humanIAP - 2 )、XIAP(Xchromosome -likedIAP)、ML -IAP(melanocytesIAP)、Survivin和Livin等。对IAPs的发现、定位、结构。

2-氨基噻唑衍生物的设计、合成及对细胞凋亡的抑制活性

目的研究2氨-基噻唑衍生物对神经细胞凋亡的抑制作用和构效关系。方法以PFTα-为先导物,设计并合成出相应的2-氨基噻唑衍生物,利用MTT法和FCM法测定其对由过氧化氢诱导产生的PC12细胞凋亡的抑制作用,利用Cerius2的QSAR+模块,求出其QSAR方程。结果合成了11个新型含2氨-基噻唑母环的Sch iff碱化合物II,利用IR,MS,1H NMR,13C NMR等法对上述化合物进行表征。细胞实验结果表明,2氨-基噻唑衍生物对PC12细胞具有一定的保护作用并对由过氧化氢诱导的PC12细胞凋亡具有一定的抑制作用。优化QSAR方程为Activity=6.947 68-0.088 72דLUMO”-0.043 018דA logp98”-0.128 752דRad0 fG ration”+0.018 246דD ipole-m ag”,上述方程的相关统计参数如下,r2=0.970,F-test=49.149,r=0.985,Lse=0.001。结论2氨-基噻唑衍生物对由过氧化氢诱导的PC12细胞凋亡具有较为明显的抑制作用,部分化合物如I-6,I-9和II-6对于PC12细胞具有细胞保护和细胞凋亡抑制双重活性。QSAR方程提示降低化合物的旋转半径以及化合物最低空轨道的能量有利于提高化合物的活性。

NMF308^(nmf/nmf)小鼠耳蜗毛细胞凋亡方式及z-VAD-FMK对毛细胞的保护作用

目的了解年龄相关性听力损失小鼠耳蜗毛细胞的凋亡方式,探讨半胱氨酸蛋白酶(caspase)抑制剂z-VAD-FMK[z-Val-Ala-Asp(Ome)-fluoromethylketone]防治老年性聋的效果。方法选用新生NMF308nmf/nmf小鼠14只和成年同窝NMF308nmf/nmf小鼠32只,分为新生小鼠腹腔注射组(14只)、成年小鼠腹腔注射组(14只)和成年小鼠圆窗膜注射组(18只),各组又分为治疗组(注射z-VAD-FMK)和对照组[注射二甲基亚枫(dimethylsulfoxide,DMSO)],采用圆窗膜局部和腹腔注射两种方法给药,给药前后行ABR检测,用免疫荧光染色化学技术TUNEL、caspase-3和PI(碘化丙啶)染色标记耳蜗毛细胞,观察各组耳蜗毛细胞的凋亡和存活状况。结果NMF308nmf/nmf小鼠从1月龄开始发生听力减退和毛细胞功能改变,到2月龄时,caspase-3激活表达的毛细胞凋亡现象是毛细胞凋亡出现的最早表现;TUNEL阳性标记特征稍晚出现;PI标记可见毛细胞细胞核固缩和碎片出现的时间从2月龄开始;到3月龄时该种小鼠听力基本丧失,耳蜗毛细胞严重缺失;而应用z-VAD-FMK治疗后,各治疗组小鼠ABR反应阈明显好于对照组;耳蜗毛细胞凋亡数目较对照组减少,存活数明显较对照组多,尤以圆窗膜注射组明显。结论 NMF308nmf/nmf小鼠耳蜗毛细胞的死亡方式以caspase-3凋亡途径为主,应用caspase-3抑制剂zVAD-FMK定向内耳给药,可以阻断caspase-3信号途径激活所导致的毛细胞凋亡,从而有效防治老年性聋。

吉祥草甾体皂苷RCE-4诱导人宫颈癌Ca Ski细胞凋亡与自噬相互作用的分子机制

目的解析RCE-4诱导的凋亡和自噬在其抑制人宫颈癌Ca Ski细胞增殖中的作用并探索增强其抗肿瘤活性的方法。方法应用各种自噬和凋亡抑制剂、siRNA质粒作为工具,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot分析凋亡和自噬相关蛋白的表达。结果自噬抑制剂Baf A1与RCE-4协同效果最佳,联用后RCE-4对Ca Ski细胞的半数抑制浓度IC_(50)由4.669μmol·L^(-1)减小到1.368μmol·L^(-1),细胞凋亡率由49.96%增长到91.08%。Beclin 1 siRNA、Bcl-2 siRNA与RCE-4联用可使IC_(50)由4.669μmol·L^(-1)分别减小到1.536和1.582μmol·L^(-1)。凋亡抑制剂Z-VAD-FMK不影响RCE-4对Ca Ski细胞的敏感性。结论凋亡在RCE-4抑制Ca Ski细胞增殖中起主导地位,而自噬则起着保护细胞、拮抗凋亡的作用。可通过联用Baf A1或者抑制Beclin 1、Bcl-2表达来增强Ca Ski细胞对RCE-4的敏感性。

撤除外源生长素诱发棉花胚性悬浮细胞程序性死亡

棉花胚性悬浮细胞在仅含生长素的MS培养基 上培养时,生长良好;但当转入到不含生长素的MS培 养基上培养时,大规模死亡。通过细胞学观察发现,在 转入无生长素的MS培养基培养3-4 d后可见明显的核 质浓缩、胞质收缩,而高温处理引起的细胞坏死无此 现象。用抽提悬浮细胞基因组DNA进行凝胶电泳发 现:这种细胞死亡还伴随有典型的DNA梯度出现,而 坏死的细胞和对照无DNA梯度。表明这种由生长素撤 除引起的细胞死亡是一种程序性死亡。这种细胞死亡 能被水解酶抑制剂和半胱氨酸蛋白酶抑制剂抑制,表 明水解酶和类半胱氨酸蛋白水解酶(CLP)参与细胞程序 性死亡。

猪囊尾蚴凋亡蛋白酶抑制剂基因的克隆与表达

为了探究凋亡蛋白酶抑制剂基因在猪囊尾蚴生活过程中的作用,利用RT-PCR技术克隆了猪囊尾蚴凋亡蛋白酶抑制剂基因,并将其克隆至原核表达载体p ET-30a中,转化大肠杆菌BL21(D E3),经IPTG诱导后,用SDS-PAGE进行初步分析,在53 ku处出现明显的蛋白条带,与预期结果一致。W estern-blot结果表明,重组融合蛋白能够与抗H is特异性抗体发生反应。凋亡蛋白酶抑制剂基因的成功表达为后续对其功能进行研究奠定了基础。

凋亡信号调节激酶-1抑制剂联合血管紧张素转换酶抑制剂对5/6肾切除大鼠肾保护的研究

目的 观察凋亡信号调节激酶-1抑制剂（ASK-1I）联合血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI）对5/6肾切除大鼠的肾保护作用.方法 48只5/6肾切除大鼠饲养8周后行肾活检后平均分4组：（1）对照组;（2） ASK-1抑制剂组;（3）ACEI组;（4）联合组.0、8、12周分别检测各组大鼠安静状态下尾动脉收缩压、尿微量白蛋白肌酐比值（ACR）、血肌酐.使用CKD-EPI公式计算各组肌酐清除率（Ccr）水平.8、12周肾组织制作病理片测定肾小球硬化指数（GSI）.结果 所有大鼠8周后均形成高血压、蛋白尿、肾小球硬化和肌酐升高.12周时ACEI组血压较对照下降明显（P＜0.05）,ACEI组及联合组的ACR的增长率较对照组明显下降[分别为（57.8±24.4）％、（50.2±27.5）％、（244.9±69.4）％,P＜0.05],ASK-1抑制剂组及联合用药组的肌酐增长率较对照组下降[分别为（19.1±17.5）％、（22.3±17.7）％、（89.8±24.7）％,P＜0.05],同时联合组相较于其他组可有效逆转肾小球硬化（P＜0.05）.结论 ASK-1I联合ACEI能更有效的降血压,降低蛋白尿及硬化指数,从而更有效的保护肾功能.

含重复凋亡结构杆状病毒抑制剂5在肺鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的探索含重复凋亡结构杆状病毒抑制剂5(BIRC5)在肺鳞状细胞癌(LUSC)中的表达及临床价值。方法共纳入2863例公共数据样本(截至2022年3月31日)及385例内部样本(采集自2008年1月1日至2017年12月31日)开展回顾性研究。采用Wilcoxon秩和检验和标准化均数差(SMD)分析BIRC5表达差异。生存分析采用Kaplan-Meier曲线以及Cox回归分析。采用灵敏度、特异度以及曲线下面积(AUC)检测BIRC5表达水平区分LUSC样本与对照样本的能力。结果各数据集均显示LUSC组中的BIRC5 mRNA表达高于对照组(中位数0.057~12.478比0.000~7.959,W=18~313102,P<0.05;SMD=3.25),且实验证实BIRC5蛋白在LUSC组织中表达水平高于对照组(中位数3.000比0.000,W=6831,P<0.05)。BIRC5高表达者中位总体生存期长于低表达者(7.42年比4.54年、5.60年比3.24年、4.54年比2.90年,P<0.05),且BIRC5是LUSC独立的预后保护因素(风险比<1,P<0.05)。BIRC5 mRNA表达可以区分LUSC组和对照组(灵敏度=0.97,特异度=0.96,AUC=0.99)。结论BIRC5在LUSC中高表达,该基因可能作为LUSC预后及鉴别的生物标志物。

XIAP过度表达对新生小鼠缺氧缺血后脑组织硝基酪氨酸和4-羟基壬烯醛表达的影响

目的探讨X-染色体连锁的凋亡抑制剂(XIAP)过度表达对正常凋亡相关蛋白的影响,以及XIAP对未成熟脑在缺氧缺血(HI)后硝基酪氨酸和4-羟基壬烯醛(4-HNE)形成的影响。方法新生9日龄转基因XIAP过度表达及同期野生型C57BL/6小鼠在HI(结扎左颈总动脉加10%氧气吸入55min)后3、24、72h处死,取脑组织进行硝基酪氨酸和4-HNE免疫组化染色;部分未进行HI的动物取脑组织进行匀浆用于Western蛋白印迹。结果West鄄ern蛋白印迹显示雌性转基因动物XIAP蛋白表达量高于雄性,XIAP过度表达组和野生组脑组织中细胞色素C、凋亡诱导因子、半胱天冬酶-9、半胱天冬酶-3、诱导型一氧化氮合酶、神经元型一氧化氮合酶含量差异均无显著性。免疫组化显示HI后24hXIAP过度表达组大脑皮层和海马CA1区硝基酪氨酸和4-HNE阳性细胞数明显低于野生组(P均<0.01)。结论XIAP过度表达对正常情况下凋亡相关蛋白表达无影响,其对缺氧缺血性脑损伤的保护作用可能与减轻氧化应激损伤有关。

阿霉素心脏毒性发生机制及其防治的研究进展

文章根据国内外最新研究进展,对阿霉素心脏毒性的临床表现、发生机制及预防措施作了综述。阿霉素是一种已被广泛使用的抗肿瘤药物,但因具有心脏毒性而使其使用受到限制。近年来的研究显示这种心脏毒性是通过心肌细胞凋亡和坏死这两种途径来实现的,而胞内活性氧自由基的积累和氧化应激系统的活化则是启动这一过程的最初原因。这个理论将有助于人们开发早期、敏感、特异的评估心脏毒性的监测方法,以及高效的针对DOX的心脏保护剂。