芍药苷调节丝氨酸/苏氨酸激酶/鼠双微基因2/p53信号通路对弥漫大B细胞淋巴瘤细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响实验研究

目的:探讨芍药苷(PAE)调节丝氨酸/苏氨酸激酶(AKT)/鼠双微基因2(MDM2)/p53信号通路对弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法:以OCI-LY3细胞为研究对象,分别设置PAE低浓度组(15μmol/L PAE)、PAE中浓度组(30μmol/L PAE)、PAE高浓度组(60μmol/L PAE)、PAE高浓度+SC79(AKT激活剂)组(60μmol/L PAE+8μg/ml SC79),同时以未经处理的细胞为对照组。48 h后,分析细胞增殖、克隆形成能力及细胞周期和凋亡变化,检测AKT/MDM2/p53信号通路相关蛋白的表达水平。结果:与对照组比较,PAE低浓度组、PAE中浓度组、PAE高浓度组细胞凋亡率、p53表达、G_(0)/G_(1)期增加,细胞克隆形成数和细胞增殖率,p-AKT/AKT和p-MDM2/MDM2表达水平,以及G_(2)/M、S期降低(均P<0.05)。与PAE高浓度组比较,PAE高浓度+SC79组细胞凋亡率、p53表达、G_(0)/G_(1)期降低,细胞克隆形成数和细胞增殖率,p-AKT/AKT和p-MDM2/MDM2表达水平,以及G_(2)/M、S期增加(均P<0.05)。结论:PAE通过抑制AKT/MDM2上调p53表达,抑制DLBCL细胞增殖、细胞周期进展,诱导其凋亡。

YAP2基因对大鼠H9c2心肌细胞凋亡及TNF-α和IL-6水平的影响

目的探讨沉默Yes相关蛋白2(YAP2)基因表达对H_(2)O_(2)诱导的大鼠H9c2心肌细胞活力、凋亡率及炎症因子的影响及机制。方法本实验于2023年5月至12月实施。实验细胞分为4个处理组,即正常对照组(Control组)、H_(2)O_(2)组、si-YAP2+H_(2)O_(2)组、NC+H_(2)O_(2)组。通过MTT、流式细胞术及Western blotting分别检测4组细胞活力、凋亡率及YAP2、Bcl-2、Bax、p-AKT蛋白表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测各组细胞培养液中肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-6含量。采用单因素方差分析、SNK-q检验。结果H_(2)O_(2)组、si-YAP2+H_(2)O_(2)组YAP2表达量分别为(0.716±0.056)、(0.204±0.018),差异有统计学意义(P<0.05)。H_(2)O_(2)组H9c2心肌细胞活力低于si-YAP2+H_(2)O_(2)组和Control组,细胞凋亡率高于si-YAP2+H_(2)O_(2)组和Control组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。H_(2)O_(2)组和NC+H_(2)O_(2)组H9c2心肌细胞活力、细胞凋亡率差异均无统计学意义(均P>0.05)。H_(2)O_(2)组Bcl-2、p-AKT表达量低于si-YAP2+H_(2)O_(2)组和Control组,Bax表达量高于si-YAP2+H_(2)O_(2)组和Control组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。H_(2)O_(2)组和NC+H_(2)O_(2)组Bcl-2、p-AKT、Bax表达量差异均无统计学意义(均P>0.05)。H_(2)O_(2)组TNF-α和IL-6含量高于si-YAP2+H_(2)O_(2)组和Control组(均P<0.05)。H_(2)O_(2)组和NC+H_(2)O_(2)组TNF-α和IL-6含量差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论沉默YAP2基因表达可能通过降低心肌细胞凋亡及炎症因子TNF-α和IL-6含量,从而降低心血管疾病发生。

凋亡抑制基因bcl-2产物在睾丸肿瘤中的表达及其意义

目的 :探讨凋亡抑制基因bcl 2产物表达与睾丸肿瘤生物学行为及预后的关系。方法 :采用免疫组化S P法对 32例睾丸肿瘤和 10例正常睾丸组织中的bcl 2表达产物进行定量检测。结果 :81.3% (2 6 32 )睾丸肿瘤显示阳性反应 ,阳性细胞率为 13.96 % ,正常睾丸组织为阴性反应 ,bcl 2蛋白在正常睾丸组织和肿瘤组织中的表达有显著差异性 (P <0 .0 5 )。bcl 2表达与睾丸肿瘤病理分级、临床分期有关 ,低分化组阳性细胞率显著低于高分化组 (P<0 .0 5 )。bcl 2表达随着睾丸肿瘤临床分期的上升阳性细胞率降低 ,Ⅰ期与Ⅲ期间bcl 2阳性细胞率有显著差异性(P <0 .0 5 )。bcl 2表达在精原细胞瘤及非精原细胞瘤间无显著性差异 (P>0 .0 5 )。结论 :提示bcl 2基因可能与睾丸肿瘤的发生、发展有关 。

细胞凋亡抑制基因bcl-2在牙源性病损中表达的研究

目的 观察凋亡相关基因bcl- 2在成釉细胞瘤 (Ameloblastoma,AB)和牙源性角化囊肿 (OdontogenicKeratocyst,OKC)中的表达 ,探讨其与AB和OKC的生物学意义。方法 应用免疫组化法 (S -P)检测 75例AB(原发 31例 ,复发 37例 ,恶变 7例 ) ,35例OKC及 9例口腔正常粘膜。同时采用原位杂交法检测了 2 0例AB(12例原发 ,8例复发 ) ,12例OKC中的bcl- 2mRNA。结果 88% (6 6 / 75 )AB ,74.2 % (2 6 / 35 )OKC ,44 .4% (4 / 9)正常口腔粘膜有bcl- 2蛋白表达 ,三组间相比差异有显著性 (P <0 .0 0 1)。同样在原发组AB 77.4% (2 4/ 31) ,复发组AB94.5 % (35 / 37) ,恶性组AB10 0 % (7/ 7)。bcl- 2阳性率及阳性强度随着组织学分级变化而增加 ,组间统计 (P <0 .0 5 )。在 2 0例AB及 12例OKC中bcl- 2mRNA表达趋势与bcl- 2蛋白的表达是相一致的 (P <0 .0 1)。bcl- 2阳性表达与AB不同组织学分型 ,病损发生部位 ,肿瘤生长方式 (单房与多房 )无关 (P >0 .0 5 )。bcl- 2在病变中表达的特征为AB的外周层细胞为强表达 ,星网状层有阳性表达 ,随着细胞增殖分化呈实性片状时bcl- 2表达增强 ,角化退变样细胞 ,颗粒性变细胞表达缺失。OKC中多在基底层细胞中表达。结论 ①bcl- 2在AB及OKC的发生、发展及细胞分化与增殖中起着重要作用。

Survivin和Bcl-2基因靶向siRNA对舌癌Tca-8113细胞生长抑制及诱导凋亡作用的影响

目的:探讨Survivin联合Bcl-2siRNA对舌癌细胞的诱导凋亡作用。方法:实验分空白组、脂质体组、阴性干扰组、Survivin干扰组、bcl-2干扰组、Survivin/bcl-2干扰组,以舌癌细胞系Tca-8113为研究对象,应用小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)分别和同时沉默下调Survivin和Bcl-2两种基因的表达,采用MTT检测细胞增殖抑制作用,流式细胞仪检测细胞凋亡,透射电镜检测细胞超微结构变化,比较各组对肿瘤细胞生长的抑制及诱导凋亡作用。结果:转染24h后可见Survivin/bcl-2干扰组的细胞形态发生明显改变,体积缩小变圆,染色质浓集于核膜内侧,核碎裂,电镜下呈典型的细胞凋亡形态学改变,并有凋亡小体出现,MTT显示细胞生长明显抑制,MCF检测凋亡率分别为空白组0.85%、脂质体组2.46%、阴性干扰组3.06%、Survivin干扰组15.48%、bcl-2干扰组11.02%、Survivin/bcl-2干扰组29.18%,与空白组相比差异有统计学显著性意义(P<0.01),转染阴性siRNA及脂质体组无抑制和诱导凋亡作用,两组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:靶向特异性Survivin联合Bcl-2siRNA双基因沉默下调较单基因沉默下调作用显著增强,并且能有效抑制舌癌细胞的增殖及诱导其发生凋亡。

miR-153-3p靶向结合BCL2基因调控鼻咽癌细胞增殖、凋亡和周期的实验研究

目的探讨miR-153-3p调控鼻咽癌细胞增殖、凋亡和周期的作用。方法利用生物信息学软件对miR-153-3p的候选靶基因进行预测。实时荧光定量PCR和Western blotting分别检测miR-153-3p对细胞内mRNA和蛋白表达的影响。用密理博MUSETM细胞检测仪对细胞周期和细胞凋亡情况进行检测。用CCK8法和克隆技术形成实验检测细胞增殖能力。结果生物信息学预测结果显示,miR-153-3p与BCL2分子之间存在一个高可信度的结合区。miR-153-3p mimic能上调miR-153-3p的表达,降低BCL2蛋白的表达。与对照组相比,过表达miR-153-3p的6-10B细胞的凋亡明显增加,增殖能力受到显著抑制。结论miR-153-3p通过下调BCL2的表达,能够促进鼻咽癌细胞凋亡,抑制其增殖。

Bcl-2基因对丝裂霉素C诱导的膀胱癌细胞凋亡抑制及其机制的研究

目的:探讨Bcl-2基因对丝裂霉素C(MMC)诱导的膀胱癌细胞凋亡的抑制作用及其分子机制。方法:采用DNA重组技术构建真核表达载体pcDNA3.1(+)/Bcl-2;利用脂质体将重组载体pcDNA3.1(+)/Bcl-2和空载体pcDNA3.1(+)转入人膀胱癌BIU-87细胞,RT-PCR检测基因转录水平;MMC作用于转染前、后的细胞,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、吖啶橙(AO)荧光染色法、Westernblot技术对细胞生长、凋亡、Caspase-3活性及细胞色素C在细胞内分布的变化进行检测。结果:1)成功构建真核表达载体pcDNA3.1(+)/Bcl-2,建立Bcl-2基因高表达的膀胱癌细胞株BIU-87/Bcl-2。2)在MMC作用下,与未转染Bcl-2基因的膀胱癌细胞株BIU-87和BIU-87/neo相比,BIU-87/Bcl-2细胞株存活率上升,P<0.01,其IC50是后者的15倍,q=6.41,P<0.01;BIU-87/Bcl-2的凋亡率显著降低,q值分别为22.62和20.45,P值均<0.01,Caspase-3激活和线粒体细胞色素C的释放受到抑制,BIU-87/Bcl-2的A405显著低于BIU-87和BIU-87/neo,q值分别为28.20和26.70,P值均<0.01,表明BIU-87/Bcl-2的Caspase-3激活受限。结论:Bcl-2基因高表达通过抑制线粒体细胞色素C的释放和Caspase-3的激活,使膀胱癌细胞对MMC诱导的凋亡产生抗性,导致耐药性的产生。

凋亡抑制基因Livin在喉癌组织中的表达及其与p53、Bcl-2表达的相关性研究

目的探讨凋亡抑制基因Livin在喉鳞状细胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC)组织中的表达及其与p53和Bcl-2表达的关系,探讨Livin在LSCC中的作用机制。方法收集LSCC标本42例,声带息肉组织20例,采用免疫组织化学SP法检测LSCC组织和声带息肉组织中Livin、p53和Bcl-2蛋白的表达。结果 LSCC中Livin表达阳性率为71.4%(30/42),显著高于声带息肉组织(χ2=27.679,P<0.01)。临床分期Ⅲ+Ⅳ期Livin阳性表达率显著高于Ⅰ+Ⅱ期(χ2=7.087,P<0.01);有淋巴结转移者的Livin阳性表达率高于无淋巴结转移者(χ2=5.458,P<0.05)。Livin蛋白的表达与p53蛋白表达呈正相关(r=0.665,P<0.05),与Bcl-2蛋白表达呈正相关(r=0.657,P<0.05)。结论 Livin在LSCC组织中异常表达,有望成为LSCC诊断和基因治疗的新靶点。凋亡相关基因p53与Bcl-2基因的异常表达在喉癌癌变中起协调作用。

肺癌中凋亡抑制基因bcl-2蛋白产物表达的研究

应用即用型ＳＡＢＣ免疫组化方法观察凋亡抑制基因ｂｃｌ－２蛋白在６３例肺癌组织中的表达情况，以探讨该基因与肺癌发生、发展的关系。结果发现，ｂｃｌ－２蛋白在肺癌中有较高表达（５０．８％）；在鳞癌和腺癌中ｂｃｌ－２蛋白的阳性率随着分化程度的降低而下降，高分化与低分化鳞癌、腺癌间ｂｃｌ－２阳性率的差异有显著性（Ｐ＜０．０５）；ｂｃｌ－２蛋白表达与肿瘤临床病理分期和预后有显著相关（Ｐ＜０．０５）。结果提示，ｂｃｌ－２蛋白过度表达是肺癌的早期表现。

凋亡抑制基因survivin反义寡核苷酸联合bcl-2反义寡核苷酸诱导肺癌细胞株凋亡的实验观察

目的探讨凋亡抑制基因survivin反义寡核苷酸单用或联用bcl-2反义寡核苷酸对肺癌细胞株的作用,探讨其在抗癌方面的作用。方法①实验于2002-08/2003-04在蚌埠医学院免疫学实验室完成。将对数生长期NCI-H446细胞分为6组空白对照组,脂质体10m g/L组(仅加空脂质体),NSODN500nm ol/L组(该3组均为对照组),survivin反义寡核苷酸500nm ol/L组,bcl-2反义寡核苷酸5μm ol/L,survivin反义寡核苷酸500nm ol/L+bcl-2反义寡核苷酸5μm ol/L组(分别在脂质体介导下转染不同寡核苷酸,48h后收取细胞进行以下检测)。②在脂质体介导下,以survivin的反义寡核苷酸作用于肺癌细胞株NCI-H446和SPC-A1,于72h用反转录聚合酶链反应检测survivin mRNA表达。凋亡指数=(静止期/DNA合成前期)占整个细胞周期的百分比;增殖指数=(DNA复制期+合成后期/有丝分裂期)占整个细胞周期的百分比。②survivin反义寡核苷酸单独或联合bcl-2反义寡核苷酸作用NCI-H446后,用四甲基偶氮唑盐法检测细胞生长抑制率并计算两药相互作用指数,锥虫蓝拒染实验检测细胞死亡率。③计量资料差异性比较采用方差分析和q检验。结果①两种肺癌细胞株皆表达survivin基因。survivin反义寡核苷酸作用细胞株后,出现生长抑制和细胞凋亡,细胞survivin m RNA明显下调,反义寡核苷酸500nm ol/L作用72h后NCI-H446和SPC-A1细胞survivin m RNA抑制率分别达62.72%和67.43%。②四甲基偶氮唑盐法检测结果显示,survivin反义寡核苷酸和bcl-2反义寡核苷酸单独应用对NCI-H446细胞均有生长抑制作用;联合应用survivin反义寡核苷酸和bcl-2反义寡核苷酸的细胞生长抑制率为64.9%,优于单独应用(单用bcl-2反义寡核苷酸为34.2%)(P<0.01),两药相互作用指数为0.708。锥虫蓝拒染实验显示,survivin反义寡核苷酸500nm ol/L+bcl-2反义寡核苷酸5μm ol/L组细胞死亡率为62.1%,高于两药单用时的31.4%和41.4%。流式细胞仪检测凋亡显示,与各对照组相比,survivin反义寡核苷酸和bcl-2反义寡核苷酸均可诱导细胞凋亡,凋亡率分别为43.6%和30.7%,两者联用凋亡率提高到58.6%(P<0.01)。结论①survivin反义寡核苷酸能抑制肺癌细胞株survivin基因表达,并诱导细胞凋亡和抑制生长。②survivin反义寡核苷酸联合bcl-2反义寡核苷酸具有显著协同抗癌作用。

凋亡抑制基因bcl-2在牙胚发育中的作用

目的：通过检测牙胚发育中ｂｃｌ－２基因、蛋白的表达及细胞凋亡的情况，探讨ｂｃｌ－２基因及细胞凋亡在牙齿发育中的作用。方法：利用原位末端标记法（ＴＵＮＥＬ）、原位杂交及免疫组织化学技术分别对ＳＤ大鼠牙胚发育不同时期ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ、蛋白的表达及细胞凋亡进行研究。结果：在牙胚发育的各时期均有细胞凋亡现象及ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ、蛋白的表达。ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ早期在上皮性成釉器及周围的间充质细胞尤其是生长中心部位表达明显。牙体组织形成后各部位阳性表达逐渐减弱、消失；ｂｃｌ－２蛋白与ｍＲＮＡ的表达基本一致。早期凋亡细胞集中出现在细胞生长中心处。牙体组织形成后散在可见。结论：ｂｃｌ－２基因可能是牙齿发育中的细胞生长、增殖及凋亡的内在调控基因之一，参与了牙齿发育的重要塑形过程。

前列腺中凋亡抑制基因Bcl-2的表达研究

目的 了解前列腺组织中 Ｂｃｌ－２蛋白的表达。方法 采用免疫组化技术，检测 １１例胎儿、２７例成人和 ６０例增生前列腺中Ｂｃｌ－２蛋白的表达。结果 胎儿前列腺Ｂｃｌ－２蛋白表达于全部胚芽上皮细胞；成人前列腺Ｂｃｌ－２蛋白表达主要定位于腺上皮基底细胞，分泌细胞偶见阳性表达；增生前列腺Ｂｃｌ－２阳性表达主要定位于腺上皮基底细胞，分泌细胞亦见不同程度阳性表达；增生前列腺基底细胞、分必细胞Ｂｃｌ－２阳性表达均高于正常前列腺，差异有显著性；正常前列腺与增生前列腺上皮基底细胞Ｂｃｌ－２阳性表达均高于分泌上皮细胞，差异有显著性。结论 基底细胞层可能为成人前列腺的干细胞层，参与前列腺细胞的生长与增殖；Ｂｃｌ－２基因蛋白可能在调节前列腺上皮的凋亡中具有重要作用；Ｂｃｌ－２基因蛋白在前列腺基底细胞增生中起主要作用，而在分泌细胞中不占主要地位。

Bcl-2基因抑制神经细胞凋亡的实验研究

目的:观察原癌基因bcl-2对神经细胞凋亡的抑制作用。方法:培养PC12细胞至对数生长期,用100感染复数(multiplicity of infection,MOI)的携带bcl-2基因的慢病毒质粒及未携带bcl-2基因的慢病毒质粒感染PC12细胞。再将其分为A、B、C、D四组,A组为携带bcl-2基因慢病毒质粒的PC12细胞(bcl-2-PC12细胞),B组为未携带bcl-2基因慢病毒质粒PC12细胞(NC-PC12细胞),C组为bcl-2慢病毒质粒PC12细胞加H2O(2bcl-2-PC12细胞+H2O2),D组为NC慢病毒质粒PC12细胞加H2O(2NC-PC12细胞+H2O2)。应用流式细胞仪检测细胞的凋亡率,采用BCA(bicincho ninic acid)法检测bcl-2基因表达蛋白。结果:A组细胞凋亡率低于B组(P<0.05),C组细胞凋亡率低于D组(P<0.05);A组bcl-2基因蛋白浓度高于B组(P<0.05),C组bcl-2基因蛋白浓度高于D组(P<0.05)。结论:bcl-2基因对正常神经细胞的凋亡有抑制作用,能够增强神经细胞的抗损伤能力。

凋亡抑制基因Bcl-2表达与支气管哮喘关系的研究

目的支气管哮喘的发病机制非常复杂,至今尚未完全阐明。目前认为细胞凋亡与支气管哮喘发病相关。Bcl-2基因是近年来广泛重视的一种凋亡抑制基因,可抑制多种细胞凋亡,与多种疾病的发生存在密切的关系。本研究测定支气管哮喘患者外周血白细胞Bcl-2基因mRNA的表达量及其血清中蛋白的含量,研究Bcl-2在支气管哮喘中的表达及其相互关系,初步探讨Bcl-2基因在支气管哮喘的发生、发展中的生物学意义。方法20例支气管哮喘中重度发作患者为实验组,20例无支气管哮喘、变态反应性疾病的健康人为对照组。采取抗凝静脉血标本5ml,立即用Dextron-PBS分离出血白细胞,采用TristarTM试剂按试剂盒说明提取总RNA,-80°超低温冰箱保存,采用TaKaRa试剂盒检测Bcl-2基因mRNA表达量。两步法:第一步:用ExScriptTM反转录酶,对Bcl-2mRNA反转录成cDNA;第二步:用Premix Ex TaqTM酶对反转录后的cDNA进行扩增,10倍梯度稀释cDNA模板,分别为100、10-1、10-2、10-3、10-4倍梯度。用美国PE公司5700型实时荧光定量PCR仪进行检测,以GAPDH基因为对照基因,用仪器附带SDS软件自动算出Bcl-2基因与对照基因比值,确定Bcl-2基因的相对含量。同时抽取抗凝静脉血2ml,伊红染色,行外周血嗜酸性粒细胞计数。抽取不抗凝静脉血2ml,分离血清,采用澳大利亚Bender Medsystems公司人Bcl-2蛋白检测试剂盒,按试剂盒说明操作,通过酶联免疫吸附法(ELISA)检测Bcl-2蛋白含量。应用SAS6.12计算机软件对实验结果进行统计学分析。结果支气管哮喘患者外周血嗜酸性粒细胞计数较正常对照组比较有非常显著性增加(P<0.01),20例支气管哮喘患者外周血细胞Bcl-2基因mRNA表达量高于正常对照组,两组有非常显著性差异(P<0.01),外周血清Bcl-2蛋白含量与正常对照组差异无显著性(P>0.05)。结论本研究证实支气管哮喘患者外周血嗜酸性粒细胞显著增多。支气管哮喘患者外周血细胞Bcl-2基因mRNA表达显著增多,揭示Bcl-2基因在支气管哮喘发病中具有一定的作用和意义,Bcl-2基因与支气管哮喘密切相关。而外周血清中Bcl-2蛋白含量与支气管哮喘的发病无直接相关。

Survivin凋亡抑制基因在垂体腺瘤中的表达及其与bcl-2、p53相关性的研究

目的 :探讨凋亡抑制基因survivin在垂体腺瘤中的表达 ,及其与bcl 2和p5 3表达蛋白的相关性。方法 :采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白 过氧化酶连接法 (SP法 ) ,检测survivin、bcl 2、p5 3基因表达蛋白在 8例正常垂体组织及 3 8例垂体腺瘤组织中的表达。结果 :survivin基因表达蛋白在正常垂体中无表达 ,3 8例垂体腺瘤中 ,2 3例表达阳性 ,占 60 5 %病理分型中PRL型、GH型、混合型阳性表达率分别为 12 /17、7/13、4/8三者比较 ,差异无显著性 (P >0 0 5 )。垂体腺瘤bcl 2表达蛋白的阳性与阴性中 ,survivin蛋白表达阳性率分别为 15 /17、8/2 1。两者比较 ,差异有显著性 (P <0 0 5 ) :而p5 3表达蛋白的阳性和阴性中 ,survivin蛋白表达阳性率分别为 2 /6,2 2 /2 3 ,两者相比 ,差异无显著性 (P >0 0 5 ) :survivin基因蛋白的表达阳性率与垂体腺瘤组织中的bcl 2蛋白表达密切相关 ,与p5 3蛋白表达无相关性。结论 :survivin蛋白表达的异常而引起细胞凋亡抑制 ,在垂体腺瘤的发生中起一定作用 ,其过度表达提示垂体腺瘤增生极度活跃 ,survivin蛋白表达与垂体腺瘤中bcl

凋亡抑制基因Bcl-2和增殖细胞核抗原在乳腺导管浸润癌中的表达及意义

目的 :探讨凋亡抑制基因 Bcl- 2和增殖细胞核抗原 ( PCNA)在乳腺导管浸润癌中的表达及与各临床参数的关系。方法 :免疫组织化学染色法对 35例乳腺导管浸润癌患者进行检测。结果 :Bcl- 2和 PCNA蛋白表达均为 68.6% ;Bcl- 2表达与癌组织分级及有无淋巴结转移呈负相关( P<0 .0 1 ) ,与雌激素 ( ER)水平及 5年生存期呈正相关 ( P<0 .0 1 ) ,与肿物大小无关 ;PCNA表达与癌组织分级及肿物大小呈正相关 ( P<0 .0 5 ) ,与 ER水平及 5年生存期呈负相关 ( P<0 .0 5 ) ,与淋巴结有无转移无关 ;Bcl- 2与 PCNA表达呈负相关。结论 :Bcl- 2高表达、ER水平高、PCNA表达低者生存期长、预后好 ,Bcl- 2和

凋亡抑制基因BCL-2在胰腺癌中的表达

对胰腺良恶性病变中凋亡指数、BCL- 2的表达作了研究 ,发现胰腺癌原发灶凋亡指数小于良性病变 ,原发灶小于转移灶 ;BCL- 2和凋亡指数负相关。认为 BCL- 2在胰腺癌进展中具有重要的作用。

转染bcl-2基因抑制足叶乙甙诱导的K562细胞凋亡

目的：观察ｂｃｌ２对Ｋ５６２细胞凋亡的影响。方法：用真核表达质粒ｐ２９０ｂｃｌ２转染Ｋ５６２细胞，用ＲＴＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测ｂｃｌ２ｍＲＮＡ和蛋白表达；用ＭＴＴ实验检测Ｋ５６２细胞对化疗药物足叶乙甙的敏感性变化；用ＤＮＡ“ｌａｄｄｅｒ”检测ｂｃｌ２对凋亡的影响。结果：转染ｂｃｌ２后Ｋ５６２的ｂｃｌ２蛋白表达增高，细胞存活率明显提高，在足叶乙甙低于１２５μｍｏｌ／Ｌ时检测不到凋亡梯形ＤＮＡ；而Ｋ５６２细胞在足叶乙甙为３２μｍｏｌ／Ｌ时就能检测到凋亡梯形ＤＮＡ。结论：若把ｂｃｌ２导入正常造血干细胞，从而增强干细胞对化疗药物的耐受性，这将对化疗具有重要意义。

Mfn2过表达诱导乳腺癌细胞线粒体自噬促进细胞凋亡的机制研究

目的:探究线粒体融合基因2(Mfn2)过表达诱导乳腺癌细胞凋亡的作用及机理。方法:收集乳腺癌患者肿瘤组织及癌旁组织标本,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)、蛋白质免疫印迹(Western Blot)及免疫组织化学染色检测两种组织中Mfn2表达差异。将MCF-7细胞分为对照组、NC组、Mfn2组、Mfn2+3-MA组,按照分组进行对应处理后,收集4组细胞,CCK-8法测定细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,DCFH-DA探针检测细胞内活性氧(ROS)水平,JC-1染色检测线粒体膜电位,Western Blot检测细胞中PTEN诱导激酶1(PINK1)、E3泛素连接酶(Parkin)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ/LC3Ⅰ、p62蛋白表达。结果:与癌旁组织比较,乳腺癌组织中Mfn2 mRNA相对表达量和蛋白相对表达量显著下调(P<0.05),阳性细胞比例显著减少(P<0.05)。转染Mfn2重组过表达质粒的MCF-7细胞中Mfn2 mRNA相对表达量和蛋白相对表达量显著高于未转染的MCF-7细胞、转染阴性对照NC重组质粒的MCF-7细胞(P<0.05)。与对照组比较,Mfn2组MCF-7细胞增殖活性显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著增加(P<0.05),细胞内ROS水平显著升高(P<0.05),线粒体膜电位显著下降(P<0.05),细胞中PINK1、Parkin、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达水平均显著上调(P<0.05),p62蛋白表达水平显著下调(P<0.05);与Mfn2组比较,Mfn2+3-MA组MCF-7细胞增殖活性显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著减少(P<0.05),细胞内ROS水平显著降低(P<0.05),线粒体膜电位显著升高(P<0.05),细胞中PINK1、Parkin、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达水平均显著下调且p62蛋白表达水平显著上调(P<0.05)。结论:乳腺癌组织中Mfn2低表达,在乳腺癌细胞中过表达Mfn2能够通过诱导线粒体自噬促进细胞凋亡,起到肿瘤抑制作用。