血清亲环素A联合凋亡抑制蛋白水平对重型颅脑损伤患者预后的预测价值

目的研究血清亲环素A(CypA)联合凋亡抑制蛋白(Arc)水平对重型颅脑损伤(STBI)患者预后的预测价值。方法选取于2018年3月-2020年12月收治的STBI患者140例。根据GCS评分结果将患者分为预后不良组(110例)和预后良好组(30例)。收集患者的基本资料,包括性别、年龄、身高、体质指数(BMI)、生命体征、治伤原因、院内心肺复苏、插管比例等,收集患者24 h内首次临床检查结果。比较两组患者各参数的差异并进行单因素和多因素分析,评估影响因素对STBI患者预后的预测价值。结果两组患者收缩压、舒张压、院内插管、院内心肺复苏、凝血酶时间、血浆凝血酶原时间、CypA和Arc等组间比较差异具有统计学意义(P<0.05)。多因素分析结果显示,CypA和Arc是STBI患者预后不良的危险因素(P<0.05)。采用Spearman分析法对CypA和Arc与预后的相关性进行分析,结果显示,CypA和Arc与预后均呈正相关(r=0.512,P<0.001;r=0.602,P<0.001)。采用受试者工作特征曲线(ROC)评估CypA和Arc表达水平对STBI患者预后评估的效能,结果显示,STBI患者CypA表达水平的曲线下面积(AUC)为0.858(95%CI:0.810~0.905,P<0.001),Arc表达水平的AUC为0.839(95%CI:0.785~0.894,P<0.001),联合预测的AUC为0.971(95%CI:0.949~0.992,P<0.001)。结论血清CypA联合Arc水平对STBI患者预后有一定的预测价值。

藏红花素通过跨膜受体蛋白/发状分裂相关增强子1信号通路对缺氧诱导的视网膜神经节细胞凋亡的影响

目的探讨藏红花素对缺氧诱导的视网膜神经节细胞凋亡的作用及其可能机制。方法于2021年1月至2022年1月采用不同浓度藏红花素处理视网膜神经节细胞RGC-5,四甲基噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活情况并筛选合适浓度。培养RGC-5细胞并用氯化钴(CoCl_(2))处理建立缺氧模型,分为缺氧组、藏红花素组、阳性对照(抗坏血酸)组和藏红花素+跨膜受体蛋白信号通路抑制剂(DAPT)组,另设对照组。Cell counting kit-8法检测细胞存活情况;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;钙荧光探针(Flou-4)实验检测各组细胞钙离子水平;实时定量PCR法检测跨膜受体蛋白(Notch1)、发状分裂相关增强子1(Hes-1)mRNA表达情况;蛋白质印迹法检测凋亡蛋白B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bax)、钙依赖性蛋白酶家族1(Cal⁃pain1)蛋白表达情况。结果藏红花素组细胞活力0.83±0.08高于缺氧组0.45±0.04,细胞凋亡率(17.92±1.21)%低于缺氧组(51.82±5.36)%,钙离子水平0.27±0.04低于缺氧组0.76±0.05,差异有统计学意义(P<0.05);藏红花素+DAPT组细胞活力0.50±0.06低于藏红花素组0.83±0.08,细胞凋亡率(36.50±3.50)%高于藏红花素组(17.92±1.21)%,钙离子水平0.65±0.05高于藏红花素组0.27±0.04,差异有统计学意义(P<0.05)。与缺氧组比较,藏红花素组Bcl-2蛋白表达水平升高,Notch1、Hes-1mRNA表达、Bax和Calpain1蛋白表达水平降低(P<0.05)。与藏红花素组比较,藏红花素+DAPT组Bcl-2蛋白表达水平降低,Notch1、Hes-1mRNA表达、Bax和Calpain1蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论藏红花素对体外培养的缺氧RGC-5细胞凋亡有一定的抑制作用,可能是通过抑制钙离子内流,阻滞Notch1/Hes-1通路,提高细胞内抑凋亡蛋白Bcl-2表达水平发挥作用。

番茄红素调节RAS同源基因家族成员A/Rho相关激酶信号通路对氧化低密度脂蛋白诱导脑血管内皮细胞凋亡的影响

目的探讨番茄红素(LYC)调节RAS同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关激酶(ROCK)信号通路对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的脑血管内皮细胞(EC)凋亡的影响。方法未做任何处理的人脑微血管内皮细胞(HBMECs)设为NC组;采用ox-LDL处理的HBMECs分为ox-LDL组、LYC组(0.5μmol/L的LYC处理HBMECs)、溶血磷脂酸(LPA)组(5μmol/L RhoA/ROCK信号通路激活剂LPA处理HBMECs)、LYC+LPA组(0.5μmol/L的LYC以及5μmol/L LPA共同处理HBMECs);处理24 h后用于后续实验。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HBMECs细胞因子水平;CCK-8法检测HBMECs增殖;流式细胞术检测HBMECs凋亡率;Western blot检测细胞血小板内皮细胞黏附分子-1(CD31)、平滑肌(SM)22α、BCL-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(Bcl-2)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved-Caspase-3)、RhoA/ROCK通路相关蛋白表达。结果与NC组相比,ox-LDL组单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白细胞介素(IL)-6、血管内皮细胞黏附分子1(VCAM-1)、HBMECs凋亡率、Bax、cleaved-Caspase-3、SM22α、RhoA、ROCK1蛋白水平升高,OD值、Bcl-2、CD31蛋白水平下降,差异有统计学意义(P<0.05);与ox-LDL组相比,LYC组MCP-1、IL-6、VCAM-1、HBMECs凋亡率、Bax、cleaved-Caspase-3、SM22α、RhoA、ROCK1蛋白水平降低,OD值、Bcl-2、CD31蛋白水平升高,差异有统计学意义(P<0.05),而LPA组趋势相反;LPA减弱了LYC对ox-LDL诱导的HBMECs凋亡的改善作用。结论LYC可能通过抑制RhoA/ROCK信号通路来减轻HBMECs凋亡。

X连锁凋亡抑制蛋白和生存素在鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤中的表达及意义

目的研究X连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)、生存素(Survivin)在鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤(nasal inverted papilloma,NIP)发生、发展及恶变中的表达情况。方法 NIP 45例,正常鼻腔黏膜(nasal cavity mucosae,NM)10例,NIP组按不同病理分级分为三组,即无不典型增生组25例,伴有不典型增生组11例,恶变组9例,通过免疫组化SP法进行XIAP和Survivin检测。结果 XIAP、Survivin在NM、NIP组间的表达具有统计学意义(UXIAP=76.000,PXIAP<0.001;Usurvivin=150.000,Psurvivin=0.036),在NIP不同病理分级中,组织分化程度越低,XIAP与Survivin阳性表达强度越高,无不典型增生组及恶变组间的表达具有统计学意义。XIAP与Survivin表达正相关(rs=0.375,P=0.011)。结论XIAP和Survivin与NIP的发病及恶变有关。

姜黄素对胃癌细胞株凋亡抑制蛋白家族及Smac基因表达的影响

目的观察姜黄素(curcumin)对人胃癌细胞株凋亡抑制蛋白(IAP)家族和Smac基因表达的影响,探讨姜黄素诱导胃癌细胞凋亡的分子机制. 方法 10～40 μmol/L 姜黄素分别处理胃癌细胞株MKN-45 6～24 h后,MTT比色法检测癌细胞生长活性,末端TdT酶标记技术和DNA Ladder检测细胞凋亡;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测IAP家族(Survivin、XIAP)和Smac基因表达;比色法检测癌细胞Caspase-3活性改变. 结果同对照组比较,不同浓度姜黄素作用后癌细胞生长明显减慢,抑制率为12.18%～68.15%(P<0.01),部分细胞呈现典型凋亡形态学改变,凝胶电泳可见'梯形'条带,凋亡率为9.24%～28.12%(P<0.01);Survivin、XIAP基因mRNA和蛋白水平显著下调(均P<0.01),而Smac基因表达增强(P<0.01),癌细胞Caspase-3活性增强2.27 ～6.67倍(P<0.01). 结论姜黄素可显著诱导胃癌MKN-45细胞凋亡,通过上调Smac、下调Survivin和XIAP基因表达,进而活化Caspase-3是其作用机制之一.

死亡相关蛋白激酶对人白血病HL-60细胞凋亡及生存素基因表达的影响

目的:探讨死亡相关蛋白激酶(DAPK)对人白血病HL-60细胞凋亡及生存素(Survivin)基因表达的影响。方法:利用真核表达载体pReceiver-M29-DAPK,用脂质体LipofectamineTM2000介导转染HL-60细胞,荧光染色法观察细胞凋亡;RT-PCR方法检测SurvivinmRNA表达水平的变化。结果:pReceiver-M29-DAPK转染组的凋亡细胞比例高于pReceiver-M29组和空白组。pReceiver-M29-DAPK转染组Survivin mRNA表达水平低于pReceiver-M29组和空白组。结论:pReceiver-M29-DAPK转染诱导HL-60细胞发生凋亡,生存素基因表达显著下调。

内皮抑制素相互作用蛋白HT036基因的全长克隆及其促血管上皮细胞凋亡的分子机制

目的:克隆与内皮抑制素(endostatin)相互作用蛋白HT036基因的全长,进一步验证其与内皮抑制素的相互作用,初步阐明其促血管上皮细胞凋亡的分子机制。方法:实验于2004-10/2006-03在解放军总医院呼吸科实验室、军事医学科学院放射医学和生物工程研究所实验室完成。①根据已知HT036的EST序列设计引物,应用RACE技术,从人胎肝cDNA文库获取该基因全长。②采用免疫共沉淀和WesternBlot验证HT036蛋白与内皮抑制素在真核细胞内存在相互作用。③利用真核瞬时表达载体pCDNA3.1(+)在EVC304细胞中瞬时表达HT036蛋白,转染了HT036基因的EVC304细胞为试验组(重复两次);没有转染HT036基因的细胞为对照组,用流式细胞仪检测HT036基因对细胞凋亡和细胞周期的影响。结果:①HT036基因全长克隆及生物信息学分析结果:利用RACE技术成功获得HT036基因的全长,并在GENEBANK进行了注册,注册号AY775560。②免疫共沉淀和Western-blot的验证结果:证实HT036蛋白能与内皮抑制素在真核细胞中相互作用。③HT036基因对细胞凋亡和细胞周期的影响:成功构建了表达HT036基因的真核表达载体,两次试验转染ECV304细胞后24h的凋亡率平均为23.63%,而对照组仅为0.10%。结论:获得了一与内皮抑制素相互作用的新的蛋白HT036基因的全长,初步表明HT036参与了内皮抑制素调节的血管生成过程,并对血管上皮细胞具有促进凋亡的作用。

胸腔积液及肺泡灌洗液中X链锁凋亡抑制蛋白及生存素检测对肺癌的早期诊断价值

目的探讨胸腔积液及肺泡灌洗液中X链锁凋亡抑制蛋白(X-1inked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)及生存素(survivin)水平对肺癌早期诊断的临床价值。方法 60例经病理确诊的肺癌伴胸腔积液患者的胸腔积液及肺泡灌洗液作为肺癌组,60例结核性渗出性胸膜炎患者的胸水及肺泡灌洗液为对照组,以酶联免疫吸附法测定2组中XIAP、生存素含量,并对其进行统计学分析。结果恶性胸腔积液中XIAP水平高于结核性胸腔积液患者,(84.83±27.40)ng/L vs(47.23±21.58)ng/L(P<0.05),恶性胸水患者肺泡灌洗液中XIAP水平明显高于结核性胸腔积液患者肺泡灌洗液患者,(85.02±41.22)ng/L vs(43.10±28.61)ng/L(P<0.05);恶性胸腔积液中survivin浓度高于结核性胸腔积液患者,(85.54±29.18)ng/L vs(43.15±21.98)ng/L(P<0.05);恶性组肺泡灌洗液中survivin显著高于结核性胸腔积液患者的肺泡灌洗液中survivin,(95.27±34.54)ng/L vs(48.99±22.17)ng/L(P<0.05);单个检查XIAP、生存素在胸腔积液中的敏感度85.0%、90.0%,在肺泡灌洗液中的敏感度75.0%、95.0%,XIAP+生存素联合检查在胸腔积液敏感度及肺泡灌洗液中均为95.0%,但特异度降低。结论胸腔积液中XIAP及生存素的测定有利于良恶性胸腔积液的鉴别诊断,同时由于肺泡灌洗中XIAP及生存素的含量高于胸腔积液,且敏感度较高,对于肺癌的早期诊断具有重要的意义。

水蛭素调节RhoA/ROCK信号通路对脑梗死大鼠神经元细胞凋亡和炎症反应的影响

目的:探讨水蛭素(HRD)调节Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)信号通路对脑梗死大鼠神经元细胞凋亡和炎症反应的影响。方法:将SD大鼠分为Ct组、Model组、低剂量HRD组(HRD-L组,13.33 mg/kg)、高剂量HRD组(HRD-H组,26.66 mg/kg)、阳性对照尼莫地平组(NMDP组,40 mg/kg)、U-46619(RhoA激动剂,0.03 mg/kg)组、HRD-H+U-46619组(26.66 mg/kg+0.03 mg/kg),每组24只。除Ct组外,其他组大鼠均利用改良线栓法构建脑梗死模型,Ct组大鼠仅暴露血管,不进行切口和插线栓。建模成功1 h后,进行给药处理。给药1次/d,持续4周。Zea-Longa法评估大鼠神经功能;干湿重法检测大鼠脑组织含水量;2,3,5-三苯基四唑氯化物(TTC)染色测定大鼠脑梗死体积;TUNEL染色检测大鼠海马CA1区神经元凋亡;ELISA检测大鼠海马组织中TNF-α、IL-1β、IL-6水平;Western blot检测大鼠海马组织中裂解的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Cleaved-Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达。结果:与Ct组比较,Model组大鼠神经功能评分、脑组织含水量、脑梗死体积百分比、神经元凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平、Cleaved-Caspase-3、Bax、RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达升高(P<0.05);与Model组比较,HRD-L组、HRD-H组、NMDP组大鼠神经功能评分、脑组织含水量、脑梗死体积百分比、神经元凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平、Cleaved-Caspase-3、Bax、RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达降低,而U-46619组对应指标变化呈相反趋势(P<0.05);与HRD-H组比较,HRD-H+U-46619组大鼠神经功能评分、脑组织含水量、脑梗死体积百分比、神经元凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平、Cleaved-Caspase-3、Bax、RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达升高(P<0.05)。结论:HRD可能通过抑制RhoA/ROCK信号通路抑制脑梗死大鼠神经元凋亡及炎症反应。

葛根素对血管平滑肌细胞增殖及增殖细胞核抗原和凋亡抑制蛋白表达的影响

目的:通过观察葛根素对培养的脐动脉平滑肌细胞增殖细胞核抗原(PCNA)和凋亡抑制蛋白(Survivin)表达的影响,探讨葛根素抑制平滑肌细胞增殖的机制。方法:分离培养人脐动脉平滑肌细胞,加入不同浓度葛根素与细胞孵育,采用免疫组化法检测血管平滑肌细胞的PCNA表达;提取RNA,采用Rt-PCR检测Survivin表达水平,并经核苷酸序列分析验证,灰度扫描测定Survivin/GAPDH(s/G)比率。结果:葛根素抑制血管平滑肌细胞的PCNA表达(P=0.0000);葛根素组Survivin/磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)(s/G)比率较对照组低。结论:葛根素具有抑制血管平滑肌细胞增殖的作用。

RNA干扰抑制生存素基因对肝癌细胞凋亡的影响

目的将生存素(survivin)基因特异性小干扰性RNA(smallinterferingRNA,siRNA)直接转染肝癌hepG2细胞系,观察其对肝癌细胞survivinmRNA水平及细胞凋亡的影响。方法合成survivin特异性的siRNA序列1、序列2和对照序列,通过Lipofectamin2000进行直接转染。试验细胞随机分为4组,第1组为空白对照组,第2组以对照序列进行转染,第3组以序列1进行转染;第4组以序列2进行转染。转染后48h,通过半定量RT-PCR的方法检测survivinmRNA的水平。转染后72h,通过流式细胞仪检测各组的细胞凋亡指数。结果转染后48h,1组、2组、3组、4组survivinmRNA相对表达率(%)分别为:48.5±10.5、43.4±6.4、34.5±8.6、23.7±6.2(P1:3、P1:4、P2:4、P3:4均<0.05)。转染后72h,1组、2组、3组、4组细胞凋亡指数(%)分别为:10.7±3.1、11.8±3.5、15.9±3.5、18.6±3.2(P1:3、P1:4、P2:3、P2:4均<0.05)。结论survivin特异性siRNA直接转染肝癌细胞可抑制survivinmRNA的表达,促进肝癌细胞凋亡的发生。

细胞黏附分子及抑癌基因和凋亡抑制蛋白在膀胱移行细胞癌中的表达及其意义

目的 :探讨细胞黏附分子、抑癌基因、凋亡抑制蛋白的表达与膀胱移行细胞癌病理分级、临床分期及预后的关系。方法 :应用免疫组织化学方法检测 5 6例膀胱移行细胞癌及 5名正常人膀胱黏膜标本中细胞黏附分子、抑癌基因和凋亡抑制蛋白的表达。结果 :5 6例膀胱癌的细胞黏附分子、抑癌基因、凋亡抑制蛋白的表达总阳性率为 5 7%、 73%、 86 % ;随着癌组织病理分级升高、临床分期浸润深度增加 ,细胞黏附分子、抑癌基因的表达降低 ,而凋亡抑制蛋白的表达升高。细胞黏附分子、抑癌基因、凋亡抑制蛋白的表达率在肿瘤复发患者与无复发患者比较 ,差异均无统计学意义。结论 :细胞黏附分子、抑癌基因的表达与膀胱移行细胞癌的病理分级和临床分期有关 ;

进行性脊髓性肌萎缩症患者神经元存活基因及神经元凋亡抑制蛋白基因的缺失

目的研究中国人群中进行性脊髓性肌萎缩症 (spinal muscular atrophy, SMA)患者中神经元存活基因（ survival motor neuron, SMN）外显子 7及神经元凋亡抑制蛋白基因（ neuronal apoptosis inhibitory protein gene, NAIP）外显子 5缺失情况，进一步探讨这 2个 SMA候选基因与 SMA的关系。方法应用 PCR- SSCP分析技术对 55个 SMA患儿家系及 40例正常人个体的 SMN基因外显子 7区域和 55例患儿 NAIP基因外显子 5的缺失进行检测。结果 SMN基因外显子 7区域纯合缺失率分别为： SMA I型 92％（ 23/25）；Ⅱ型 90％（ 27/30）。患儿双亲中有 2例母亲和 1例父亲也有纯合缺失。在 55例 SMA患儿中未检测到有 NAIP基因外显子 5的纯合缺失，仅发现 2例杂合性缺失。结论中国人 SMA患者中 SMN基因外显子 7的纯合缺失率高，而在正常人中未见有缺失，表明其与 SMA发生密切相关； NAIP基因外显子 5的杂合性缺失率在本实验中仅约为 4％。

重症急性胰腺炎并发肺损伤大鼠的生存素基因表达及对血红素加氧酶1及细胞凋亡的影响

目的探讨Wistar大鼠重症急性胰腺炎(SAP)肺损伤生存素(survivin)基因表达对血红素加氧酶1(HO-1)及细胞凋亡的影响。方法选择Wistar大鼠30只,随机分组后,建立SAP组24只(分为6h、12h、24h、48h,每组6只),对照组6只,利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测survivin基因的表达,免疫组织化学法检测HO-1的表达,DNA断裂的原位末端标记(TUNEL)法检测肺组织细胞凋亡的变化。结果 SAP各组survivin基因及HO-1表达量较对照组显著升高(P<0.05);细胞凋亡情况:对照组细胞结构正常,仅少数肺泡间质细胞及上皮细胞出现凋亡,SAP组细胞凋亡明显,且随时间推移逐渐增加。结论 SAP肺损伤中survivin基因显著升高,引起HO-1表达上升及细胞凋亡加重。提示SAP中survivin基因升高会引起肺损伤。

RNA干扰生存素基因表达对肺腺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的采用RNA干扰技术探讨生存素(survivin)对人肺腺癌细胞增殖及凋亡的影响及其可能的分子机制。方法采用脂质体介导将pGCsi-sh survivin与pGCsi质粒转染人肺腺癌细胞株A549,经G418筛选获得稳定抑制survivin表达的肺腺癌细胞模型;Western blot检测转染细胞survivin、p21、鼠双微体基因2(MDM2)蛋白表达;MTT比色法检测阳性细胞克隆的增殖活性;流式细胞仪检测各组细胞凋亡。结果成功构建稳定抑制survivin表达的肺腺癌细胞模型。与对照组相比,反义组p21表达及细胞凋亡率显著增加,而MDM2表达及细胞增殖显著降低。结论下调A549细胞survivin表达后,细胞增殖降低而细胞凋亡增加,其作用机制与p21表达增加和MDM2降低有关。

TFPI基因转染对血管平滑肌细胞中细胞凋亡抑制蛋白的调控

目的研究组织因子途径抑制物(TFPI)基因转染对大鼠血管平滑肌细胞中细胞凋亡抑制蛋白(IAP)表达的影响,探讨TFPI诱导细胞凋亡的可能机制。方法将含有人TFPI基因的重组腺病毒或含β-半乳糖苷酶(LacZ)基因的重组腺病毒或DMEM在体外分别转染大鼠血管平滑肌细胞,用ELISA方法测定转染后细胞中TFPI蛋白的表达水平,用RT-PCR方法测定基因转染后不同时间点细胞中c-IAP1mRNA的表达,用Western-blot方法检测基因转染后不同时间点细胞中survivin的表达。结果基因转染后1天在血管平滑肌细胞中即可检测到TFPI蛋白表达,峰值出现在转染后第3天;基因转染后3天和7天,TFPI组c-IAP1 mRNA的表达与对照组相比明显减少(P<0.05);基因转染后3、5、7天,TFPI组survivin的表达与对照组相比明显减少(P<0.05),且具有明显的时间依赖性。结论 TFPI可能通过抑制IAP的表达来发挥诱导平滑肌细胞凋亡的作用,从而抑制冠状动脉介入治疗后再狭窄发生。

腺病毒介导凋亡素基因转染对人胆管癌细胞Bcl-2蛋白表达的影响

目的:初步探讨在凋亡素基因转染引发人胆管癌细胞凋亡的同时对Bcl-2蛋白的影响。方法:采用含凋亡素基因的重组腺癌毒感染人胆管癌细胞株QBC939,通过光镜、荧光观察其凋亡情况,在感染后7d收集细胞,采用Western-blot检测其Bcl-2蛋白情况。结果:含凋亡素基因的重组腺病毒感染胆管癌细胞株QBC9397d后其Bcl-2蛋白的表达较空病毒组和空白对照组明显降低。结论:凋亡素基因在诱导人胆管癌细胞凋亡时会导致Bcl-2蛋白的降低,可能有助于凋亡素的作用。

P21蛋白和生存素在美伐他汀诱导人非小细胞肺癌凋亡中的作用

目的研究P21蛋白和生存素(survivin)在美伐他汀诱导非小细胞肺癌(NSCLC)细胞凋亡中的作用及其分子机制。方法应用MTT法检测美伐他汀对A549、NCI-H520细胞株的抑制作用,应用流式细胞仪、透射电镜研究美伐他汀对A549、NCI-H520细胞株的细胞周期阻滞和诱导凋亡作用,应用流式细胞仪和RT-PCR检测P21蛋白、P21mRNA、生存素mRNA的表达。结果MTT试验表明美伐他汀对A549、NCI-H520增殖有明显的抑制作用;流式细胞仪检测显示美伐他汀诱导A549、NCI-H520细胞G0/G1期阻滞;AnnexinV结果证实美伐他汀可诱导A549、NCI-H520细胞凋亡,而且凋亡率随剂量的增加而增加。美伐他汀对A549、NCI-H520细胞P21mRNA及P21总蛋白的表达无影响,但可使P21胞膜蛋白的表达下降。美伐他汀作用后生存素mRNA表达下降。加入甲羟戊酸可完全逆转美伐他汀的上述作用。结论美伐他汀通过甲羟戊酸途径诱导NSCLCG0/G1期阻滞,抑制增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与抑制P21蛋白异戊二烯化和下调生存素mRNA表达有关。

靶向生存素基因siRNA诱导骨肉瘤细胞株U-2OS的凋亡

目的:体外转录合成生存素(survivin)基因siRNA,观察其在骨肉瘤细胞株U-2OS中抑制survivin基因后细胞增殖及细胞凋亡情况。方法:将U-2OS细胞分为A组(空白对照组)、B组(非特异性转染组)、C组(特异性转染组),在荧光显微镜下观察转染前后细胞形态的改变,用RT-PCR和Western blot法分别检测转染前后survivin基因mRNA和蛋白的干涉效果,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,并比较各组结果。结果:荧光显微镜下可见转染后细胞增殖变慢, 凋亡细胞增加;RT-PCR结果显示survivin siRNA明显抑制survivin基因mRNA表达。Western blot法检测C组蛋白阳性表达率比A、B两组显著降低(P<0．01);特异性转染组的细胞增殖缓慢,与其它两组比较有显著性差异(P<0.01)。流式细胞仪检测C组细胞凋亡率与其他两组比较有显著性差异(P<0．01)。结论:体外转录合成特异性survivin siRNA能有效抑制U- 2OS细胞中survivin,in mRNA及蛋白表达,从而抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡。RNA干扰技术为骨肉瘤的基因治疗提供了一种新策略。

贲门癌及癌前病变组织中生存素蛋白的表达及其与细胞凋亡的关系

目的探讨生存素蛋白在贲门癌及癌前病变组织中的表达及其与细胞凋亡的关系。方法应用免疫组化过氧化物酶标记的链霉卵白素(SP)法检测贲门炎(20例)、贲门不典型增生(Ⅰ级20例、Ⅱ级16例、Ⅲ级6例)和贲门癌(67例)组织中生存素蛋白的表达;应用DNA聚合酶和末端脱氧核糖核酸转移酶标记DNA链断端的核酶(TUNEL)法检测以上贲门组织中的凋亡细胞,计算凋亡指数(AI)。结果①从贲门炎到不典型增生(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级)到贲门癌,随着病变的加重生存素蛋白表达率呈逐渐增高趋势,分别为0.0%、30.0%、25.0%、83.3%和61.2%;凋亡指数则呈逐渐下降趋势,分别为(15.15±6.97)%、(14.84±6.66)%、(14.33±5.34)%、(9.31±3.96)%和(6.47±2.82)%。②贲门癌组与Ⅲ级不典型增生组相比生存素蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05),与其余各组比较表达差异有统计学意义(P<0.01)。贲门炎组、贲门Ⅰ、Ⅱ级不典型增生组间生存素蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。③生存素蛋白表达与凋亡指数呈负相关(rs=-0.912,P<0.05)。结论生存素蛋白表达上调发生在贲门癌变过程的早期阶段,并通过抑制细胞凋亡而发挥作用。