抑制X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(XIAP)和Survivin表达对胰腺癌Panc-1细胞增殖及化疗敏感性的影响

目的:探讨同时抑制X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)和Sur-vivin表达,对胰腺癌Panc-1细胞增殖及吉西他滨(Gem)化疗敏感性的影响,并与单独抑制XIAP或Survivin表达的策略进行对比。方法:运用前期实验构建的XIAP-shRNA慢病毒(LV-X)和Survivin-shRNA慢病毒(LV-S),分别建立XIAP和/或Survivin表达稳定抑制的胰腺癌Panc-1细胞株,即Panc-1-X、Panc-1-S和Panc-1-XS。运用Real-timePCR和半定量Western blot分别检测XIAP和Survivin的mRNA和蛋白的表达情况,以细胞计数法及克隆形成实验检测细胞增殖能力,Caspase-3/7试剂盒及流式细胞仪检测细胞凋亡,MTT法检测细胞对Gem的化疗敏感性。结果:成功建立了XIAP和/或Survivin表达稳定抑制的胰腺癌细胞株Panc-1。XIAP和Survivin同时稳定抑制后,Panc-1的增殖能力显著受到抑制,Panc-1-XS组的克隆形成率为10.12%±1.33%,显著低于对照组Panc-1-XncSnc组(96.61%±7.89%)和Panc-1组(100.28%±8.97%,P<0.05)。用0.5 mg/L Gem处理24 h后,Panc-1-XS组的Caspase-3/7相对活性明显升高至15.02±0.57,显著高于Panc-1组与Panc-1-XncSnc组(分别为8.87±0.19和9.05±0.23,P<0.05);Panc-1-XS组的细胞凋亡率为24.09%±2.75%,显著高于对照组Panc-1-XncSnc及Panc-1组(分别为12.09%±1.97%和12.06%±1.22%,P<0.05)。Panc-1-XS组的IC50值为(0.47±0.04)mg/L,显著低于对照组Panc-1-XncSnc的(2.18±0.13)mg/L及Panc-1组的(2.13±0.18)mg/L(P<0.05),对Gem的化疗敏感性显著增强。进一步检测显示,Panc-1-XS组的IC50值为(0.47±0.04)mg/L,均显著低于Panc-1-X组的(0.76±0.07)mg/L和Panc-1-S组的(0.87±0.09)mg/L(P<0.05)。结论:同时稳定抑制胰腺癌细胞株Panc-1中XIAP和Survivin的表达,能显著抑制Panc-1细胞增殖能力,增强其Gem化疗敏感性,并明显优于XIAP或Survivin表达单独抑制的策略。

抑制Vav3基因表达对胃癌细胞凋亡抑制蛋白及肿瘤多药耐药性的影响

目的探讨Vav3基因在胃癌多药耐药性(MDR)中的作用及可能机制。方法采用荧光定量反转录聚合酶链(QRT-PCR)及蛋白印迹技术检测Vav3在胃癌、癌旁组织及人胃癌细胞株SGC7901、胃上皮细胞GES-1中的表达;合成针对Vav3的siRNA,并转染SGC7901;MTT法检测氟尿嘧啶(5-FU)、奥沙利铂(L-OHP)对转染前后胃癌细胞的抑制率;荧光定量RT-PCR和蛋白质印迹法检测转染前后凋亡抑制蛋白家族成员xIAP、Survivin、Livin表达,并检测Caspase-3、Caspase-8表达及活性。结果 Vav3在胃癌组织及细胞株的表达高于癌旁组织及胃上皮细胞株(P<0.05);Vav3-siRNA转染SGC7901后Vav3表达明显受到抑制(P<0.01);Vav3-siRNA转染SGC7901 48h后5-FU、L-OHP对肿瘤细胞的抑制作用均明显增强(P<0.05);转染后SGC7901中xIAP、Survivin的表达均较转染前降低(P<0.05),Livin表达在转染前后无明显变化;转染后Caspase-3、Caspase-8表达及活性升高(P<0.05)。结论 Vav3可通过调控胃癌细胞凋亡抑制途径参与胃癌多药耐药,抑制Vav3表达可能有助于逆转胃癌细胞的化疗耐药。

X连锁凋亡抑制蛋白和生存素在鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤中的表达及意义

目的研究X连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)、生存素(Survivin)在鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤(nasal inverted papilloma,NIP)发生、发展及恶变中的表达情况。方法 NIP 45例,正常鼻腔黏膜(nasal cavity mucosae,NM)10例,NIP组按不同病理分级分为三组,即无不典型增生组25例,伴有不典型增生组11例,恶变组9例,通过免疫组化SP法进行XIAP和Survivin检测。结果 XIAP、Survivin在NM、NIP组间的表达具有统计学意义(UXIAP=76.000,PXIAP<0.001;Usurvivin=150.000,Psurvivin=0.036),在NIP不同病理分级中,组织分化程度越低,XIAP与Survivin阳性表达强度越高,无不典型增生组及恶变组间的表达具有统计学意义。XIAP与Survivin表达正相关(rs=0.375,P=0.011)。结论XIAP和Survivin与NIP的发病及恶变有关。

凋亡抑制蛋白XIAP与卵巢癌细胞耐药性

肿瘤细胞对化疗药物的耐受性在临床治疗中备受关注,肿瘤细胞逃避凋亡机制在耐药机制不断研究中成为关注要点,凋亡抑制蛋白家族成员之一X连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP),分别在肾癌、肝癌、结肠癌、肺癌、胰腺癌、人类卵巢癌等肿瘤细胞耐药的发生发展中起着关键性作用,研究表明XIAP高表达于耐药性卵巢癌细胞的胞质中,通过多种途径影响肿瘤细胞的生长,但对其发生机制及应对策略尚未明确,现针对XIAP基因对卵巢癌治疗影响的新进展进行综述,为临床治疗卵巢癌细胞耐药性的研究提供新的思路。

凋亡抑制蛋白Livin在喉癌中的表达和意义

目的研究凋亡抑制蛋白Livin在喉癌周黏膜、喉不典型增生和喉鳞状细胞癌(简称喉癌)组织中的表达以及与喉癌各临床因素的相关性。方法采用免疫组织化学SP法检测10例喉癌周黏膜,12例喉不典型增生和61例喉癌中Livin蛋白的表达,分析其与喉癌发生、发展及预后的关系。结果Livin在喉癌中阳性表达率为67.21%(41/61);在喉不典型增生中为25% (3/12);在喉癌周黏膜中表达阴性。在喉癌组中Livin高表达与临床分期、T分期、病理分化程度呈显著相关(P<0.05);与年龄、部位、淋巴转移无显著相关(P>0.05),随访发现该蛋白的表达与患者5年生存率无显著相关(P>0.05)。结论凋亡抑制蛋白Livin在喉癌的发生、发展中起着重要作用,尚不能作为判断患者预后的一项指标,该基因有望成为喉癌基因治疗的一个新的有效的靶点。

胸腔积液及肺泡灌洗液中X链锁凋亡抑制蛋白及生存素检测对肺癌的早期诊断价值

目的探讨胸腔积液及肺泡灌洗液中X链锁凋亡抑制蛋白(X-1inked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)及生存素(survivin)水平对肺癌早期诊断的临床价值。方法 60例经病理确诊的肺癌伴胸腔积液患者的胸腔积液及肺泡灌洗液作为肺癌组,60例结核性渗出性胸膜炎患者的胸水及肺泡灌洗液为对照组,以酶联免疫吸附法测定2组中XIAP、生存素含量,并对其进行统计学分析。结果恶性胸腔积液中XIAP水平高于结核性胸腔积液患者,(84.83±27.40)ng/L vs(47.23±21.58)ng/L(P<0.05),恶性胸水患者肺泡灌洗液中XIAP水平明显高于结核性胸腔积液患者肺泡灌洗液患者,(85.02±41.22)ng/L vs(43.10±28.61)ng/L(P<0.05);恶性胸腔积液中survivin浓度高于结核性胸腔积液患者,(85.54±29.18)ng/L vs(43.15±21.98)ng/L(P<0.05);恶性组肺泡灌洗液中survivin显著高于结核性胸腔积液患者的肺泡灌洗液中survivin,(95.27±34.54)ng/L vs(48.99±22.17)ng/L(P<0.05);单个检查XIAP、生存素在胸腔积液中的敏感度85.0%、90.0%,在肺泡灌洗液中的敏感度75.0%、95.0%,XIAP+生存素联合检查在胸腔积液敏感度及肺泡灌洗液中均为95.0%,但特异度降低。结论胸腔积液中XIAP及生存素的测定有利于良恶性胸腔积液的鉴别诊断,同时由于肺泡灌洗中XIAP及生存素的含量高于胸腔积液,且敏感度较高,对于肺癌的早期诊断具有重要的意义。

凋亡抑制蛋白Livin与恶性肿瘤

肿瘤的形成和发展与细胞凋亡异常密切相关。近年来凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis protein，IAP）作为一种重要的抗细胞凋亡因子，日益受到人们的重视。目前发现的人类IAP家族有8个成员，

三氧化二砷对前列腺癌细胞PC-3凋亡抑制蛋白XIAP表达的影响

[目的]探讨三氧化二砷(As2O3)对前列腺癌细胞株PC-3细胞增殖、细胞凋亡及X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)表达的影响.[方法]取对数生长期PC-3细胞,分别经0.5,1.0,2.0μmol/L As2O3处理,采用四甲基偶氮唑蓝比色法检测细胞生长抑制作用;流式细胞仪检测细胞凋亡率;蛋白质印迹法及实时荧光定量PCR检测XIAP蛋白表达及XIAP mRNA表达的变化.[结果]0.5,1.0,2.0μmol/LAs2O3均可抑制PC-3细胞增殖,在处理24,48,72h后,细胞生长抑制率间差异具有统计学意义(P<0.01).检测0.5,1.0,2.0μmol/L As2O3处理48h的PC-3细胞株细胞凋亡率分别为11.47%±1.81%,38.47%±1.60%,58.93%±3.35%,相比较差异具有统计学意义(P<0.01).As2O3处理48h时0.5,1.0,2.0μmol/L As2O3组的XIAP mRNA表达水平分别为0.67±0.12,0.25±0.15,0.03±0.01,各组间差异均具有统计学意义(P<0.05).[结论]As2O3可抑制PC-3细胞增殖,诱导细胞凋亡,此作用可能与As2O3抑制PC-3细胞XIAP基因的表达有关联.

环氧合酶-2选择性抑制剂NS-398诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡及其机制探讨

目的:探讨环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)选择性抑制剂NS-398对人肝癌BEL-7402细胞凋亡及凋亡抑制蛋白survivin、XIAP和c-IAP1表达的调节作用。方法:用不同浓度的NS-398作用BEL-7402细胞后,MTT法测定细胞增殖抑制情况,FCM法和TUNEL法检测细胞凋亡情况,免疫细胞化学法检测COX-2、survivin、XIAP和c-IAP1蛋白的表达情况。结果:NS-398可以显著抑制BEL-7402细胞的增殖,诱导其凋亡。免疫细胞化学法检测结果显示,与未处理组相比,NS-398作用可使BEL-7402细胞中COX-2、survivin、XIAP和c-IAP1蛋白的表达明显下调(P<0.01)。结论:NS-398对人肝癌细胞株BEL-7402有抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用,其机制可能与通过下调survivin、XIAP和c-IAP1的表达有关。

凋亡抑制基因Livin在喉癌组织中的表达及其与p53、Bcl-2表达的相关性研究

目的探讨凋亡抑制基因Livin在喉鳞状细胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC)组织中的表达及其与p53和Bcl-2表达的关系,探讨Livin在LSCC中的作用机制。方法收集LSCC标本42例,声带息肉组织20例,采用免疫组织化学SP法检测LSCC组织和声带息肉组织中Livin、p53和Bcl-2蛋白的表达。结果 LSCC中Livin表达阳性率为71.4%(30/42),显著高于声带息肉组织(χ2=27.679,P<0.01)。临床分期Ⅲ+Ⅳ期Livin阳性表达率显著高于Ⅰ+Ⅱ期(χ2=7.087,P<0.01);有淋巴结转移者的Livin阳性表达率高于无淋巴结转移者(χ2=5.458,P<0.05)。Livin蛋白的表达与p53蛋白表达呈正相关(r=0.665,P<0.05),与Bcl-2蛋白表达呈正相关(r=0.657,P<0.05)。结论 Livin在LSCC组织中异常表达,有望成为LSCC诊断和基因治疗的新靶点。凋亡相关基因p53与Bcl-2基因的异常表达在喉癌癌变中起协调作用。

凋亡抑制因子Survivin表达在大鼠重症急性胰腺炎肾损伤中的作用

目的研究大鼠重症急性胰腺炎(SAP)肾组织细胞间凋亡抑制因子Survivin表达与肾损伤的关系。方法 40只SD大鼠,体重(250±20)g,随机分为假手术组和重症急性胰腺炎6h、12 h、24 h组,每组10只。实验组采用胰胆管逆行穿刺注射4.5%牛磺胆酸钠(1.0 ml/kg)建立不同炎症程度的SAP模型,比较假手术组与各实验组胰腺组织和肾组织病理学变化,检查各组血清淀粉酶(AMY)、血肌酐(Cr)和血尿素氮(BUN),应用免疫组化方法检测胰腺和肾组织中Survivin的表达,肾脏组织细胞凋亡测定法(TUNEL法)检测肾组织细胞凋亡的变化。结果各实验组AMY、Cr、BUN较假手术组有所升高,Survivin在假手术组胰腺组织和肾组织表达均呈阴性,Survivin在SAP大鼠胰腺组织中的表达主要集中在胰腺导管处,腺泡细胞也有散在表达,Survivin在SAP大鼠肾组织中表达主要集中在肾小管和肾小球。肾小球细胞凋亡指数明显高于对照组[6、12、24 h分别为(3.10±1.00)vs(0.79±0.11),P<0.05;(4.01±1.90)vs(0.87±0.12),P<0.05;(5.00±1.80)vs(0.81±0.19),P<0.01],肾小管细胞凋亡指数明显高于对照组[6、12、24 h分别为(9.50±1.01)vs(1.29±0.47),P<0.01;(11.90±2.30)vs(1.27±0.29),P<0.01;(14.9±2.57)vs(1.21±0.32),P<0.01],且随SAP病程延长,肾组织凋亡细胞水平逐渐升高。结论 Survivin在SAP大鼠胰腺组织中及并发肾损伤的肾组织中呈异常高表达,Survivin表达的高低与肾组织损伤的严重程度有关,可能起到减轻肾损伤、促进其修复的作用。

存活蛋白在子宫内膜癌中的表达及其在细胞凋亡中的作用

目的:探讨子宫内膜癌中存活蛋白(survivin)的表达及其对细胞凋亡的作用。方法:免疫组织化学法检测survivin在子宫内膜癌组织中的表达,并且应用RNA干扰技术沉默survivin基因,RT-PCR和Western印迹法检测RNA干扰效果,FCM法检测RNA干扰前后细胞凋亡的变化,Western印迹法检测凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-8和bcl-2的表达变化。结果:子宫内膜癌组织中survivin蛋白的阳性率显著高于不典型增生和正常内膜组织(P<0.05和P<0.01)。RNA干扰有效抑制了survivin mRNA和蛋白的表达(均为P<0.01),并且诱导了细胞凋亡,2个干扰组的细胞凋亡率均显著高于对照组(P<0.01)。RNA干扰亦上调了活性caspase-3、caspase-8的表达。结论:survivin基因的异常表达与子宫内膜癌的发生密切相关,抑制其表达可以诱导子宫内膜癌细胞发生凋亡。

凋亡途径蛋白XIAP、Caspase-3和Survivin在上皮性卵巢癌中的表达及相互关系

目的研究凋亡调控途径耐药蛋白X连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspaes-3)和Survivin在卵巢癌组织中表达,探讨其与卵巢癌临床病理特征的关系。方法采用免疫组织化学PV法检测15例正常卵巢组织及80例卵巢癌中XIAP、Caspase-3和Survivin蛋白的表达状况。结果 XIAP和Survivin在卵巢癌组织中阳性表达率均高于正常卵巢组织。Caspase-3低于正常卵巢组织,差异有统计学意义(P<0.05)。XIAP表达与组织学分型、淋巴结转移无关(P>0.05),与临床分期、分化程度有关(P<0.05);Caspase-3表达与组织学分型、分化程度、淋巴结转移无关(P>0.05),与临床分期有关(P<0.05);Survivin表达与组织学分型无关(P>0.05),与淋巴结转移、临床分期、分化程度有关(P<0.05)。Caspase-3与XIAP表达呈负相关(P<0.05),Caspase-3与Survivin表达无关联(P>0.05),XIAP与Survivin表达呈正相关(P<0.05)。结论凋亡途径XIAP、Caspase-3和Survivin耐药蛋白的表达与卵巢癌的病理特征有关,并且三者在卵巢癌组织中存在相关性,可能在卵巢癌的转化以及耐药方面发挥重要作用。

喉癌中凋亡抑制基因Livin的表达

目的探讨凋亡抑制基因Livin在喉癌组织中的表达及其与喉癌临床病理的相关性。方法采用免疫组织化学染色方法检测了50例喉癌组织,45例癌旁组织,10例喉乳头状瘤及16例声带息肉中Livin蛋白的表达情况。RT-PCR方法检测41喉癌组织,41例癌旁组织和11声带息肉组织中Livin mRNA的表达情况。结果 RT-PCR检测结果显示Livin mRNA在喉癌组织中相对表达量明显高于癌旁组织及声带息肉组织(P<0.01)。免疫组织化学检测结果显示Livin蛋白在喉癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁组织、喉乳头状瘤及声带息肉(P<0.05)。Livin蛋白表达与肿瘤的病理分级有关(P<0.05),而与患者年龄、肿瘤部位、临床分期、淋巴结转移无关(P>0.05)。结论 Livin在喉癌组织中异常高表达,提示在喉癌的发生、发展中可能起重要作用。

高海拔地区藏族和汉族乳腺浸润性导管癌凋亡相关蛋白及凋亡指数的研究

目的探讨世居青海的藏汉族人乳腺浸润性导管癌组织中Bcl-2、Bax及Caspase-3和凋亡指数(AI)的表达差异。方法采用免疫组织化学法检测藏族和汉族各60例乳腺浸润性导管癌中Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白的表达;采用原位DNA缺口末端标记法检测凋亡指数。结果藏族、汉族乳腺浸润性导管癌组织中Bcl-2的表达率分别为52.2%和38.3%,Bax表达率分别为76.7%和61.7%,Caspase-3表达率分别为60.0%和58.3%,藏族、汉族乳腺浸润性导管癌组织中AI阳性率分别为61.2%和60.0%,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论世居青海的藏族和汉族乳腺浸润性导管癌组织中Bcl-2、Bax及Caspase-3的表达无差异,且乳腺浸润性导管癌组织中AI表达比较也无差异。

抗凋亡蛋白ARC对人主动脉血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的探讨抗凋亡蛋白ARC对人主动脉血管平滑肌细胞(HA-VSMC)凋亡的影响。方法体外培养HA-VSMC,通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测ARC在HA-VSMC中的表达水平,以及HA-VSMC经H2O2时间梯度处理后ARC的表达量随着时间的变化;经合成的ARC过表达的腺病毒(Ad-ARC)处理HA-VSMC 24 h后,通过Western blot方法检测ARC在HA-VSMC中的过表达情况;Ad-ARC和H2O2同时处理HA-VSMC,通过caspase3/7活性检测实验和锥虫蓝染色实验检测细胞的凋亡情况。结果RT-qPCR结果显示,与H9c2、HAEC、KEK293相比,ARC在HA-VSMC中表达相对较高(F=84.50,P<0.05);RT-qPCR结果显示,在H2O2时间梯度处理以后,随着时间的推移HA-VSMC中ARC的表达量越来越低(F=8.83,P<0.05);Western blot方法检测结果显示,与对照组和β-gal组进行比较,Ad-ARC组HA-VSMC中ARC的表达量显著上调(F=296.00,P<0.01);caspase3/7活性检测实验和锥虫蓝染色实验检测结果显示,与经过H2O2处理组相比,Ad-ARC明显抑制了H2O2诱导的HA-VSMC的凋亡(F=55.46、190.10,P<0.05)。结论抗凋亡蛋白ARC在HA-VSMC中高表达,过表达ARC可抑制H2O2诱导的HA-VSMC的凋亡。

重组人红细胞生成素对癫痫持续状态大鼠海马线粒体凋亡途径相关调控因子的影响及作用机制

目的观察重组人红细胞生成素(r Hu EPO)对戊四氮(PTZ)点燃的癫痫持续状态(SE)的成年雄性(SD)大鼠海马神经元磷酸化蛋白激酶B(p-PKB/p-Akt)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和X-连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)表达的影响,并进一步探讨r Hu EPO作用的可能机制。方法于2010年3月,由河北省实验动物中心提供的健康清洁级成年SD大鼠。采用PTZ点燃大鼠SE模型,将大鼠随机分为B组(PTZ+0.9%氯化钠溶液)、C组(PTZ+r Hu EPO)、D组(PTZ+LY294002+r Hu EPO)、E组(PTZ+二甲基亚砜+r Hu EPO),同时另选取不进行SE制模的SD大鼠作为A组(0.9%氯化钠溶液),检测大鼠行为学和脑电图的改变;用原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测海马神经元的凋亡情况;免疫组织化学法观察p-Akt、Bax、XIAP的阳性细胞数;反转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法检测各组大鼠海马Bax信使RNA(BaxmRNA)的表达;Western blot方法检测各组大鼠海马蛋白激酶B(Akt)、p-Akt、XIAP蛋白的表达。结果与B组比较,C组p-Akt、XIAP阳性细胞数和p-Akt、XIAP蛋白表达水平均增多,Bax阳性细胞数及BaxmRNA表达水平均减少,差异有统计学意义(P<0.05);与C组比较,D组p-Akt、XIAP阳性细胞数和p-Akt、XIAP蛋白表达水平均减少,Bax阳性细胞数及BaxmRNA表达水平均增多,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 r Hu EPO可以提高p-Akt、XIAP阳性细胞数及蛋白表达水平,降低Bax阳性细胞数及BaxmRNA表达水平,减少海马神经元的凋亡,发挥神经保护作用;加入磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂LY294002后,海马p-Akt、XIAP阳性细胞数及蛋白表达减少、Bax阳性细胞数及BaxmRNA表达增加,海马神经元的凋亡增加,减弱了r Hu EPO的保护作用。因此,PI3K/Akt信号通路是r Hu EPO发挥神经保护作用的通路之一,其作用机制可能是r Hu EPO活化PI3K/Akt后,提高p-Akt蛋白及线粒体凋亡途径相关调控因子XIAP的表达,下调了Bax的表达,从而介导线粒体凋亡途经,发挥抗凋亡、促存活的神经保护作用。

腺病毒介导XAF1基因诱导人肝癌细胞株SMMC7721凋亡的实验研究

背景：X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）相关因子1（XAF1）是新近鉴定的肿瘤抑制基因,在许多人类恶性肿瘤中低表达甚至不表达。目的：研究Ad5/F35腺病毒介导XAF1基因诱导人肝癌细胞株SMMC7721凋亡的作用及其可能机制。方法：构建重组腺病毒Ad5/F35-XAF1、对照病毒Ad5/F35-Null和报告病毒Ad5/F35-增强型绿色荧光蛋白（EGFP）,分别按不同感染复数（MOI）在同一作用时间点感染人肝癌细胞株SMMC7721。以荧光显微镜和流式细胞仪检测Ad5/F35-EGFP的感染效率;分别以逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白质印迹法检测XAF1mRNA和蛋白表达;以甲基噻唑基四唑（MTT）法检测细胞增殖率;以Annexin V-FITC/PI双染法和原位末端标记TUNEL法检测细胞凋亡率;以蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-8和caspase-9的表达。结果：Ad5/F35-EGFP感染48h,MOI为2.0时,92%以上的SMMC7721细胞表达绿色荧光蛋白。Ad5/F35-XAF1感染48h后,SMMC7721细胞中XAF1 mRNA和蛋白表达增高,细胞增殖受到抑制,细胞凋亡剂量依赖性地增多,并伴随凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-8和caspase-9的裂解。结论：重组腺病毒Ad5/F35-XAF1在人肝癌细胞株SMMC7721中具有很强的感染效率,可促进XAF1基因表达,且能明显抑制人肝癌细胞增殖和诱导凋亡,此作用可能与XAF1激活了内、外源性凋亡通路有关。

凋亡相关因子在早期胚胎发育中的作用机制

细胞凋亡与早期胚胎发育的关系密切,是导致胚胎发育停滞和辅助生殖技术(ART)失败的主要原因。抗凋亡因子在促进早期胚胎发育、提高胚胎质量和ART成功率等方面具有重要意义。综述细胞凋亡的分子调控机制及其诱导因素,以及调控凋亡基因表达的因子、生长因子、抗氧化剂、1-磷酸鞘氨醇、瘦素、前列环素、骨桥蛋白和热休克蛋白等几种重要的抗凋亡因子在促进早期胚胎发育方面作用机制的研究进展。

XAF1基因在肝癌细胞凋亡中的诱导作用

背景:X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)与凋亡抑制和肿瘤细胞耐药现象密切相关。目的:研究XIAP相关因子1(XAF1)基因抑制人肝癌细胞株Bel-7404和HepG2增殖和诱导凋亡的作用。方法:以腺病毒Ad5/F35为载体,构建重组腺病毒Ad5/F35-XAF1、对照空病毒Ad5/F35-Null和报告病毒Ad5/F35-增强型绿色荧光蛋白(EGFP),分别以相同感染复数(MOI)感染人肝癌细胞株Bel-7404和HepG2,并设立空白组作为对照。作用48 h后,以荧光显微镜检测Ad5/F35-EGFP的感染效率;分别以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法检测XAF1 mRNA和蛋白表达;以MTT法检测细胞活力;以Annexin V-FITC/PI双染法和原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡率。结果:Ad5/F35-EGFP感染48 h后,几乎所有Bel-7404和HepG2细胞均表达EGFP。Ad5/F35-XAF1感染48 h后,两种肝癌细胞中XAF1 mRNA和蛋白表达均明显增高,细胞活力呈剂量依赖性地降低,细胞凋亡率显著增加。结论:重组腺病毒Ad5/F35-XAF1在人肝癌细胞株Bel-7404和HepG2中的感染效率高,XAF1在不同的肝癌细胞株中恢复表达后,能显著抑制肝癌细胞增殖并促进其凋亡,有可能成为肝癌基因治疗的新靶点。