细胞凋亡抑制蛋白IAP家族与卵巢癌关系研究进展

抗凋亡作用在肿瘤发生、发展和耐药方面起重要作用,细胞凋亡调节的改变可能是肿瘤化疗耐药发生的原因之一,而诱导肿瘤细胞凋亡和增强化疗药物的敏感性成为近年来肿瘤治疗的重要策略。卵巢癌在妇科恶性肿瘤的死亡率中高居首位,5年生存率仅为20%～30%,肿瘤化疗耐药是其主要原因之一。因此,克服肿瘤化疗耐药成为卵巢癌治疗的关键。

凋亡抑制蛋白IAP家族与头颈肿瘤

凋亡抑制蛋白IAP家族是近年来发现的一类具有细胞凋亡抑制作用的蛋白。本文对该家族的生物 学特性、抑制凋亡的作用机制及其与肿瘤关系方面的研究进展进行综述。

微小RNA-103a-3p通过肿瘤蛋白53调控凋亡抑制剂1/P53对骨质疏松症的影响

目的探讨微小RNA(miR)-103a-3p调控细胞肿瘤蛋白53调控凋亡抑制剂1(TRIAP1)对成骨细胞分化以及去卵巢小鼠骨量的影响。方法MC3T3-E1细胞分为正常对照(NC)组、miR-103a-3p-NC组、miR-103a-3p模拟(mimc)组、miR-103a-3p mimic+TRIAP1-NC组、miR-103a-3p mimic+TRIAP1 mimic组。Real-time PCR检测细胞miR-103a-3p、TRIAP1、P53的mRNA表达,MTT法和流式细胞术检测细胞增殖及凋亡,免疫荧光染色和茜红素染色检测细胞骨架F-actin表达和矿化情况,ELISA检测细胞碱性磷酸酶(ALP)活性。24只雌性小鼠设为sham组、骨质疏松症(OP)组、miR-103a-3p antagonist-NC组和miR-103a-3p antagonist组,每组6只摘取双侧卵巢制备OP模型,sham组仅分离卵巢组织周围脂肪。测定骨组织miR-103a-3p、TRIAP1、P53、ALP、骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)的mRNA表达,microCT测定骨密度(BMD)、骨矿物质含量(BMC),HE染色观察骨组织病理改变。结果细胞转染miR-103a-3p mimic后,miR-103a-3p及P53表达升高、TRIAP1表达降低,细胞增殖降低、凋亡增加,F-actin表达减弱,钙结节数量减少,ALP活性降低(P<0.01);而在增加转染TRIAP1 mimic后,以上miR-103a-3p mimics导致的结果均得到显著逆转(P<0.01)。OP组小鼠骨组织miR-103a-3p、P53表达升高,TRIAP1、ALP、OCN、OPN基因表达降低,BMD、BMC降低,骨组织结构破坏(P<0.05);miR-103a-3p antagonist组小鼠骨组织miR-103a-3p及P53表达降低,TRIAP1、ALP、OCN、OPN基因表达升高,BMD、BMC升高,骨组织结构改善(P<0.05)。结论MiR-103a-3p可介导TRIAP1/P53抑制成骨细胞增殖及矿化,而miR-103a-3p拮抗治疗可减少OP小鼠骨量丢失。

堆型艾美耳球虫裂殖子外分泌蛋白对细胞凋亡的抑制作用

为了研究堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)裂殖子的外分泌蛋白对马-达氏牛肾(MDBK)细胞凋亡的抑制作用,本试验建立Transwell小室间接共培养体系,即将E.acervulina裂殖子与MDBK细胞共培养,采用流式细胞术分别检测共培养1.5、3和6 h MDBK细胞的凋亡情况,利用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)对共培养6 h后的细胞上清液中的成分进行鉴定。结果显示,1.5、3和6 h共培养组MDBK细胞的总细胞凋亡率分别为(5.92±0.19)%、(8.13±0.32)%和(11.57±0.37)%,与对照组相比,总细胞凋亡率均极显著降低(P<0.01)。LC-MS/MS分析共鉴定到65个E.acervulina的外分泌蛋白,包括热休克蛋白、微线蛋白、能量代谢酶分子、蛋白磷酸酶分子和未知功能蛋白等。结果表明,E.acervulina裂殖子外分泌蛋白可抑制MDBK细胞凋亡,具体哪种蛋白在抑制细胞凋亡中发挥作用有待后续进一步研究。

血清亲环素A联合凋亡抑制蛋白水平对重型颅脑损伤患者预后的预测价值

目的研究血清亲环素A(CypA)联合凋亡抑制蛋白(Arc)水平对重型颅脑损伤(STBI)患者预后的预测价值。方法选取于2018年3月-2020年12月收治的STBI患者140例。根据GCS评分结果将患者分为预后不良组(110例)和预后良好组(30例)。收集患者的基本资料,包括性别、年龄、身高、体质指数(BMI)、生命体征、治伤原因、院内心肺复苏、插管比例等,收集患者24 h内首次临床检查结果。比较两组患者各参数的差异并进行单因素和多因素分析,评估影响因素对STBI患者预后的预测价值。结果两组患者收缩压、舒张压、院内插管、院内心肺复苏、凝血酶时间、血浆凝血酶原时间、CypA和Arc等组间比较差异具有统计学意义(P<0.05)。多因素分析结果显示,CypA和Arc是STBI患者预后不良的危险因素(P<0.05)。采用Spearman分析法对CypA和Arc与预后的相关性进行分析,结果显示,CypA和Arc与预后均呈正相关(r=0.512,P<0.001;r=0.602,P<0.001)。采用受试者工作特征曲线(ROC)评估CypA和Arc表达水平对STBI患者预后评估的效能,结果显示,STBI患者CypA表达水平的曲线下面积(AUC)为0.858(95%CI:0.810~0.905,P<0.001),Arc表达水平的AUC为0.839(95%CI:0.785~0.894,P<0.001),联合预测的AUC为0.971(95%CI:0.949~0.992,P<0.001)。结论血清CypA联合Arc水平对STBI患者预后有一定的预测价值。

X-染色体连锁凋亡抑制蛋白相关因子1通过自噬途径调控Caspase 1介导的胃肠道间质瘤细胞焦亡

目的:探究X-染色体连锁凋亡抑制蛋白相关因子1(XAF1)对人胃肠道间质瘤(GIST)细胞中半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase 1)介导的细胞焦亡的影响及机制。方法:实时荧光定量PCR和Western blot检测人正常胃黏膜上皮细胞系(RGM-1)和GIST细胞系(GIST-T1、GIST-430、GIST-882)中XAF1的表达水平;采用脂质体介导转染法将pcDNA3.1-XAF1重组质粒染进GIST-882细胞,以构建高表达XAF1的GIST-882细胞。GIST-882细胞分为对照组、pcDNA3.1组(转染pcDNA3.1空载体质粒)、pcDNA3.1-XAF1组(转染pcDNA3.1-XAF1重组质粒)、pcDNA3.1-XAF1+Rap组(转染pcDNA3.1-XAF1重组质粒并给予自噬激活剂雷帕霉素处理),免疫荧光染色检测各组细胞内微管相关蛋白1轻链3(LC3)表达情况,Western blot检测各组细胞中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值与Beclin1蛋白表达水平,ELISA法检测各组细胞上清中白细胞介素,IL-1β、IL-18含量,乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测各组细胞LDH释放率,Western blot检测各组细胞中Caspase-1及其活化形式cleaved-Caspase-1、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、消皮素D(GSDMD)蛋白表达水平。结果:与RGM-1细胞比较,GIST-T1、GIST-430、GIST-882细胞中XAF1 mRNA和蛋白相对表达量显著减少(P<0.05);细胞转染后,pcDNA3.1-XAF1组GIST-882细胞中XAF1 mRNA和蛋白相对表达量均显著高于pcDNA3.1组、对照组(P<0.05)。与对照组比较,pcDNA3.1-XAF1组GIST-882细胞内LC3荧光强度明显减弱,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、Beclin1蛋白相对表达量显著减少(P<0.05),细胞上清液IL-1β、IL-18含量及LDH释放率显著升高(P<0.05),Caspase-1、cleaved-Caspase-1、NLRP3、GSDMD蛋白相对表达量也显著增加(P<0.05);与pcDNA3.1-XAF1组比较,pcDNA3.1-XAF1+Rap组GIST-882细胞内LC3荧光强度明显增强,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、Beclin1蛋白相对表达量显著增加(P<0.05),同时,细胞上清液IL-1β、IL-18含量及LDH释放率显著下降(P<0.05),Caspase-1、cleaved-Caspase-1、NLRP3、GSDMD蛋白相对表达量也显著减少(P<0.05)。结论:XAF1在GIST细胞中表达下降,提高XAF1表达能通过抑制自噬从而促进Caspase 1介导的GIST细胞焦亡,发挥抗肿瘤作用。

沉默YTH结构域家族蛋白2改善血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠原代心肌细胞肥大与凋亡

目的探讨YTH结构域家族蛋白2(YTHDF2)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的新生大鼠原代心肌细胞肥大和凋亡的影响。方法为探讨AngⅡ刺激下YTHDF2的表达水平,将细胞分为正常组和AngⅡ组。为探讨沉默YTHDF2对心肌细胞肥大与凋亡的影响,将细胞分为4组,空白组[转染阴性对照小干扰RNA(siRNA)+PBS]、siYTHDF2组[转染YTHDF2 siRNA(siYTHDF2)+PBS]、模型组(siRNA+AngⅡ)和实验组(siYTHDF2+AngⅡ)。用Western blot和逆转录定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测YTHDF2基因表达水平,RT-qPCR检测心肌肥厚相关基因心房钠尿肽(ANP)、B型钠尿肽(BNP)和β肌球蛋白重链(β-MHC)及心肌细胞凋亡相关基因Bax、B淋巴细胞瘤2基因(Bcl-2)mRNA的表达水平,免疫荧光染色观察心肌细胞表面积,原位末端标记法染色观察心肌细胞凋亡情况,免疫沉淀反应验证YTHDF2和Bcl-2的结合关系。结果AngⅡ组YTHDF2蛋白表达及mRNA水平显著高于正常组(1.49±0.03 vs 0.97±0.09,1.50±0.08 vs 1.00±0.07,P<0.05)。与空白组比较,模型组心肌细胞表面积增大,细胞凋亡率升高,ANP、BNP、β-MHC、Bax mRNA表达明显升高,Bcl-2 mRNA表达明显降低(P<0.05)。与模型组比较,实验组心肌细胞表面积减小,细胞凋亡率降低,ANP、BNP、β-MHC、Bax mRNA表达明显降低,Bcl-2 mRNA表达明显升高(P<0.05)。结论沉默YTHDF2可以缓解AngⅡ诱导的大鼠原代心肌细胞肥大与凋亡,YTHDF2通过与Bcl-2相结合抑制其表达水平。

蛋白酶体抑制剂MG132对人胃癌细胞MGC-803自噬、凋亡和迁移的影响

目的探究蛋白酶体抑制剂MG132对人胃癌细胞MGC-803自噬、凋亡和迁移的影响,分析其对上皮间质转化(EMT)相关蛋白表达的影响。方法应用0.25μg/mL、0.50μg/mL、1.00μg/mL和2.00μg/mL的MG132处理MGC-803细胞后,用激光共聚焦显微镜检测自噬小体数目的变化以分析其对自噬的影响,通过流式细胞仪检测细胞凋亡比例的变化,并通过Transwell细胞迁移实验检测MG132对细胞迁移能力的影响。通过免疫印迹实验检测细胞凋亡相关蛋白和EMT相关蛋白表达的变化。结果在MGC-803细胞中,与空白对照组比较,随着MG132药物浓度的升高,MG132对MGC-803细胞具有毒性作用;1.00μg/mL的MG132明显增加MGC-803细胞的自噬小体数目(1.00μg/mL:t=9.459,P=0.011);随着MG132浓度的升高,细胞凋亡比例明显增多(0.25μg/mL:t=5.149,P=0.036;0.50μg/mL:t=7.342,P=0.018;1.00μg/mL:t=15.340,P=0.004);Western blotting发现MG132处理MGC-803细胞后,随着药物浓度的增加,BAX表达明显增加(0.25μg/mL:t=4.646,P=0.043;0.50μg/mL:t=4.610,P=0.044;1.00μg/mL:t=10.760,P=0.009),Bcl-2表达明显降低(0.25μg/mL:t=22.850,P=0.002;0.50μg/mL:t=26.780,P=0.001;1.00μg/mL:t=29.890,P=0.001);随着MG132浓度的升高,迁移细胞数目明显减少(0.25μg/mL:t=16.730,P=0.004;0.50μg/mL:t=27.340,P=0.001;1.00μg/mL:t=32.800,P<0.001);0.50μg/mL浓度MG132改变EMT相关蛋白表达水平,E-钙黏蛋白表达明显升高(0.50μg/mL:t=4.405,P=0.048;1.00μg/mL:t=12.170,P=0.007),N-钙黏蛋白(0.50μg/mL:t=5.163,P=0.036;1.00μg/mL:t=6.811,P=0.021)和波形蛋白(0.50μg/mL:t=5.628,P=0.030;1.00μg/mL:t=12.670,P=0.006)表达明显降低。结论MG132处理人胃癌细胞MGC-803能促进细胞自噬和凋亡,并通过EMT进程抑制细胞迁移。

细胞凋亡抑制蛋白:IAP家族

IAP家族 (InhibitorofApoptosisfamilyofproteins,IAPs)为一类内源性细胞凋亡抑制蛋白 ,在许多物种中起着阻止细胞凋亡的作用。IAPs主要通过抑制caspase ,参与TNFR介导的信号转导 ,与NF κB相互作用发挥抗细胞凋亡作用。IAPs可能与肿瘤发展、神经变性病以及缺血再灌注损伤有一定关系。

凋亡蛋白抑制因子家族成员(IAPs)之一Survivin的研究进展

Survivin是近来发现的凋亡蛋白抑制因子家族成员之一,它的结构简单,主要分布在胚胎以及分化未成熟的组织,并在各种肿瘤细胞中高表达;它是一个有潜在价值的肿瘤标志物,与肿瘤的预后密切相关,也可作为肿瘤治疗的新靶点;Survivin主要是通过抑制Cas-pase-3,-7的活性来阻断细胞凋亡;Survivin与bcl-2有协同抗凋亡作用。

番茄红素调节RAS同源基因家族成员A/Rho相关激酶信号通路对氧化低密度脂蛋白诱导脑血管内皮细胞凋亡的影响

目的探讨番茄红素(LYC)调节RAS同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关激酶(ROCK)信号通路对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的脑血管内皮细胞(EC)凋亡的影响。方法未做任何处理的人脑微血管内皮细胞(HBMECs)设为NC组;采用ox-LDL处理的HBMECs分为ox-LDL组、LYC组(0.5μmol/L的LYC处理HBMECs)、溶血磷脂酸(LPA)组(5μmol/L RhoA/ROCK信号通路激活剂LPA处理HBMECs)、LYC+LPA组(0.5μmol/L的LYC以及5μmol/L LPA共同处理HBMECs);处理24 h后用于后续实验。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HBMECs细胞因子水平;CCK-8法检测HBMECs增殖;流式细胞术检测HBMECs凋亡率;Western blot检测细胞血小板内皮细胞黏附分子-1(CD31)、平滑肌(SM)22α、BCL-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(Bcl-2)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved-Caspase-3)、RhoA/ROCK通路相关蛋白表达。结果与NC组相比,ox-LDL组单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白细胞介素(IL)-6、血管内皮细胞黏附分子1(VCAM-1)、HBMECs凋亡率、Bax、cleaved-Caspase-3、SM22α、RhoA、ROCK1蛋白水平升高,OD值、Bcl-2、CD31蛋白水平下降,差异有统计学意义(P<0.05);与ox-LDL组相比,LYC组MCP-1、IL-6、VCAM-1、HBMECs凋亡率、Bax、cleaved-Caspase-3、SM22α、RhoA、ROCK1蛋白水平降低,OD值、Bcl-2、CD31蛋白水平升高,差异有统计学意义(P<0.05),而LPA组趋势相反;LPA减弱了LYC对ox-LDL诱导的HBMECs凋亡的改善作用。结论LYC可能通过抑制RhoA/ROCK信号通路来减轻HBMECs凋亡。

益气血法调节GDF9、c-IAP1/2、JNK1/2、TNFR1/2表达对超排卵大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响

目的观察益气血法经后增殖方含药血清基于p38 MAPK/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路调节生长分化因子9(GDF9)、细胞凋亡抑制蛋白1/2(c-IAP1/2)、c-Jun氨基末端激酶1/2(JNK1/2)、肿瘤坏死因子受体1/2(TNFR1/2)表达对控制性超排卵大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响。方法取12只雌性大鼠,随机分为控制性超排卵+中药组(6只大鼠给予经后增殖方4.5 g/kg灌胃)和控制性超排卵组(6只大鼠给予等体积生理盐水灌胃),后续经腹腔注射醋酸曲普瑞林、孕马血清促性腺激素、HCG后,取2组大鼠腹主动脉血制备含药血清和空白血清。另取15只雌性大鼠,经腹腔注射醋酸曲普瑞林、孕马血清促性腺激素、HCG后,收集卵巢颗粒细胞,分别与空白血清(空白血清组)、含药血清(含药血清组)、含药血清+GDF9抗体(含药血清+GDF9抗体组)在体外共同培养。TUNEL检测卵巢颗粒细胞凋亡率,qRT-PCR法检测卵巢颗粒细胞中p38 MAPK、NF-κB、GDF9、c-IAP1、c-IAP2、JNK1、JNK2、TNFR1、TNFR2 mRNA表达情况,Western blot法检测卵巢颗粒细胞中GDF9蛋白表达情况。结果含药血清组和含药血清+GDF9抗体组细胞凋亡率均明显低于空白血清组(P均<0.05),且含药血清组明显低于含药血清+GDF9抗体组(P<0.05)。含药血清组p38 MAPK、NF-κB mRNA相对表达量均明显低于空白血清组(P均<0.05)。含药血清组和含药血清+GDF9抗体组c-IAP1、c-IAP2、GDF9 mRNA相对表达量和GDF9蛋白相对表达量均明显高于空白血清组(P均<0.05),且含药血清组均明显高于含药血清+GDF9抗体组(P均<0.05);含药血清组和含药血清+GDF9抗体组JNK1、JNK2、TNFR1、TNFR2 mRNA相对表达量均明显低于空白血清组(P均<0.05),且含药血清组均明显低于含药血清+GDF9抗体组(P均<0.05)。结论益气血法经后增殖方可通过调控p38 MAPK/NF-κB信号通路,上调控制性超排卵大鼠卵巢颗粒细胞中GDF9、c-IAP1、c-IAP2的表达,下调JNK1、JNK2、TNFR1、TNFR2的表达,抑制卵巢颗粒细胞凋亡。

抑制miR-130a表达对SACC-83顺铂化疗敏感性及XIAP MDR1蛋白表达的影响

目的研究抑制miR-130a表达对人涎腺腺样囊性癌细胞株(SACC-83)顺铂(DDP)化疗敏感性及X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)、多药耐药基因(MDR1)表达的影响。方法构建人涎腺腺样囊性癌DDP耐药细胞株(SACC-83/DDP),采用实时荧光定量(qRT-PCR)检测SACC-83、SACC-83/DDP细胞中miR-130a表达水平;将SACC-83/DDP细胞随机分为对照组、mir-130a inhibitor组(转染mir-130a inhibitor)、DDP+mir-130a inhibitor阴性对照组(30μmol/L DDP+转染mir-130a inhibitor阴性对照)及DDP+mir-130a inhibitor组(30μmol/L DDP+转染mir-130a inhibitor),采用CCK-8法测定各组细胞生存率以及对DDP的耐药性,流式细胞术检测细胞凋亡率,TUNEL染色检测细胞凋亡指数;qRT-PCR检测细胞miR-130a、XIAP、MDR1、PTEN mRNA水平,免疫印记法检测细胞XIAP、MDR1、PTEN蛋白表达。结果与SACC-83细胞相比,miR-130a在SACC-83/DDP细胞中高表达(P<0.05);与对照组和mir-130a inhibitor组相比,DDP+mir-130a inhibitor组细胞生存率降低,凋亡率和凋亡指数升高(P<0.05);与mir-130a inhibitor组相比,DDP+mir-130a inhibitor组细胞生存率降低,凋亡率和凋亡指数升高(P<0.05);与对照组相比,mir-130a inhibitor组、DDP+mir-130a inhibitor组细胞miR-130a水平、XIAP mRNA及蛋白、MDR1 mRNA及蛋白表达降低(P<0.05),凋亡率、凋亡指数和PTEN蛋白表达升高(P<0.05);与DPP+mir-130a inhibitor组相比,DDP+mir-130a inhibitor阴性对照组细胞miR-130a水平、XIAP mRNA及蛋白、MDR1 mRNA及蛋白表达升高(P<0.05),凋亡率、凋亡指数和PTEN蛋白表达下降(P<0.05);SACC-83/DDP细胞对DDP的耐药性明显高于SACC-83细胞,抑制miR-130a表达逆转了SACC-83/DDP细胞的DDP耐药性。结论抑制miR-130a表达,可能下调XIAP表达,增强人涎腺腺样囊性癌细胞株对顺铂化疗的敏感性。

肿瘤免疫治疗中Bcl-2家族蛋白与凋亡蛋白抑制因子IAP研究

阐述了T细胞抗原的研究结果,主要涉及到B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(即Bcl-2)家族蛋白及凋亡蛋白抑制因子(即IAP)。

喉癌患者细胞凋亡抑制蛋白1的表达情况及预后影响因素

目的探讨喉癌患者喉癌组织细胞凋亡抑制蛋白1(c-IAP1)的表达情况及影响患者预后的因素。方法回顾性分析60例喉癌患者的临床资料,采集患者术后喉癌组织与癌旁组织病理切片,采用免疫组织化学法测定c-IAP1的表达情况。比较喉癌患者喉癌组织与癌旁组织中c-IAP1的表达情况,以及不同预后患者喉癌组织中c-IAP1的表达情况。采用多因素COX回归模型分析影响喉癌患者预后的因素。结果喉癌组织中c-IAP1高表达率高于癌旁组织(P<0.05)。本组60例患者中,预后不良42例(70.00%),预后良好18例(30.00%),预后不良患者喉癌组织c-IAP1高表达率高于预后良好患者(P<0.05)。多因素COX回归分析结果显示,c-IAP1表达情况、组织学分级、肿瘤大小、淋巴结转移情况、临床分期是喉癌患者预后的影响因素(均P<0.05)。结论喉癌患者喉癌组织中c-IAP1阳性表达率升高,c-IAP1表达情况、组织学分级、肿瘤大小、淋巴结转移情况、临床分期是喉癌患者预后的影响因素。

抑制X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(XIAP)和Survivin表达对胰腺癌Panc-1细胞增殖及化疗敏感性的影响

目的:探讨同时抑制X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)和Sur-vivin表达,对胰腺癌Panc-1细胞增殖及吉西他滨(Gem)化疗敏感性的影响,并与单独抑制XIAP或Survivin表达的策略进行对比。方法:运用前期实验构建的XIAP-shRNA慢病毒(LV-X)和Survivin-shRNA慢病毒(LV-S),分别建立XIAP和/或Survivin表达稳定抑制的胰腺癌Panc-1细胞株,即Panc-1-X、Panc-1-S和Panc-1-XS。运用Real-timePCR和半定量Western blot分别检测XIAP和Survivin的mRNA和蛋白的表达情况,以细胞计数法及克隆形成实验检测细胞增殖能力,Caspase-3/7试剂盒及流式细胞仪检测细胞凋亡,MTT法检测细胞对Gem的化疗敏感性。结果:成功建立了XIAP和/或Survivin表达稳定抑制的胰腺癌细胞株Panc-1。XIAP和Survivin同时稳定抑制后,Panc-1的增殖能力显著受到抑制,Panc-1-XS组的克隆形成率为10.12%±1.33%,显著低于对照组Panc-1-XncSnc组(96.61%±7.89%)和Panc-1组(100.28%±8.97%,P<0.05)。用0.5 mg/L Gem处理24 h后,Panc-1-XS组的Caspase-3/7相对活性明显升高至15.02±0.57,显著高于Panc-1组与Panc-1-XncSnc组(分别为8.87±0.19和9.05±0.23,P<0.05);Panc-1-XS组的细胞凋亡率为24.09%±2.75%,显著高于对照组Panc-1-XncSnc及Panc-1组(分别为12.09%±1.97%和12.06%±1.22%,P<0.05)。Panc-1-XS组的IC50值为(0.47±0.04)mg/L,显著低于对照组Panc-1-XncSnc的(2.18±0.13)mg/L及Panc-1组的(2.13±0.18)mg/L(P<0.05),对Gem的化疗敏感性显著增强。进一步检测显示,Panc-1-XS组的IC50值为(0.47±0.04)mg/L,均显著低于Panc-1-X组的(0.76±0.07)mg/L和Panc-1-S组的(0.87±0.09)mg/L(P<0.05)。结论:同时稳定抑制胰腺癌细胞株Panc-1中XIAP和Survivin的表达,能显著抑制Panc-1细胞增殖能力,增强其Gem化疗敏感性,并明显优于XIAP或Survivin表达单独抑制的策略。

大鼠缺氧缺血后海马神经元凋亡及凋亡抑制蛋白XIAP表达的变化

目的探讨新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后海马CA1区神经元凋亡及X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)表达的变化规律。方法选择48例新生Wistar大鼠为HIBD组,并选择12只新生大鼠分为假手术组(n=6)和正常对照组(n=6)。HIBD制模后3 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h、7 d、14 d处死取材,每次处死6只,采用流式细胞技术检测3组大鼠海马神经元的凋亡率,并应用免疫组织化学染色方法检测各组海马CA1区XIAP的表达变化情况。结果与假手术组相比,HIBD组缺氧缺血后3 h海马神经元凋亡率即开始升高,但差异无统计学意义(P>0.05);于缺氧缺血后12 h凋亡率显著升高(P<0.05),48 h时达高峰,72 h时开始下降,7 d时明显低于高峰水平(P<0.05),而与假手术组无显著差异,14 d时基本恢复至假手术组水平。正常对照组和假手术组海马CA1区有极少量XIAP阳性表达细胞。HIBD组于缺氧缺血3 h时XIAP阳性表达显著升高(P<0.05),之后逐渐升高,在48 h时达到高峰,72 h时开始逐渐下降,7 d时已明显低于高峰水平(P<0.05),但仍明显高于正常对照组和假手术组水平,在14 d时略高于正常对照组和假手术组,但差异无统计学意义(P>0.05)。XIAP蛋白表达与HIBD后各时间点阳性凋亡细胞出现呈负相关(r=-0.564,P<0.05)。结论 XIAP蛋白的过度表达在脑缺氧缺血后细胞凋亡的调控过程中起着重要作用,对HIBD损伤的脑神经细胞具有保护作用。

凋亡蛋白抑制剂家族研究进展

凋亡蛋白抑制剂(inhibitor of apoptosis proteins,IAPs)编码一组结构相关的蛋白,该家族成员不仅可以抑制细胞凋亡, 而且参与多种似无关联的生物学功能,如调节细胞周期和细胞分裂等.迄今为止,在人体新发现的IAPs家族有8个成员,分别是HIAP-1、HIAP-2、XIAP、ML-IAP、Survivin 和ILP-2/Ts-IAP、NAIP、BRUCE/apollon等.本文对现有的IAPs家族成员的结构特征和功能作一总结,尤其对Survivin的分子构成、功能、作用机制、组织分布、表达特点、生物学特性以及与肿瘤治疗相关的研究进展方面进行重点综述.