miR-497阻断Wnt/β-catenin信号通路抑制SGC-7901人胃癌失巢凋亡抵抗细胞的生长和转移

目的 探讨微小RNA 497(miR-497)在胃癌转移中的作用及机制。方法 SGC-7901胃癌亲本细胞培养在超低黏附环境中,重新贴壁后建立SGC-7901细胞失巢凋亡抵抗模型,集落形成实验、流式细胞术、 TranswellTM实验和划痕愈合实验检测其细胞生物学行为与亲本细胞的差异、荧光定量PCR检测miR-497表达、 Western blot法检测无翅基因/β联蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路关键蛋白以及上皮间质转化(EMT)相关蛋白如波形蛋白(vimentin)和上皮钙黏蛋白(E-cadherin)等表达的变化;亲本细胞和凋亡抵抗SGC-7901细胞转染miR-497抑制物(miR-497 inhibitor)或miR-497模拟物(miR-497 mimic), CCK-8法检测其增殖活性、 TranswellTM侵袭实验检测细胞侵袭能力、 TranswellTM迁移实验和划痕愈合实验检测细胞迁移能力、 Western blot法检测Wnt1、 β-catenin、 E-cadherin、 vimentin蛋白表达的变化。通过在失巢凋亡抵抗SGC-7901细胞中转染miR-497 mimic,在裸鼠皮下接种,测量并记录肿瘤组织的体积及质量的变化,Western blot法检测Wnt1、 β-catenin、 E-cadherin、 vimentin蛋白表达的变化。结果 与亲本细胞相比,SGC-7901胃癌失巢凋亡抵抗细胞增殖速度更快、集落形成更强,凋亡率更低,侵袭和迁移能力更强,miR-497表达明显下降。下调miR-497后细胞增殖能力显著增强,侵袭、迁移能力明显增强,Wnt1、 β-catenin蛋白表达量显著增加,vimentin表达显著增加,E-cadherin表达下降,而上调miR-497表达结果相反。miR-497过表达组的肿瘤组织生长速度、肿瘤的体积与质量明显低于对照组;Wnt1、 β-catenin、 vimentin蛋白表达量显著下降,而E-cadherin表达明显上调。结论miR-497在SGC-7901失巢凋亡抵抗细胞中低表达,miR-497通过阻断Wnt/β-catenin信号通路的活化和EMT,抑制胃癌细胞的生长和转移。

益肾活血饮逆转骨髓瘤凋亡抵抗的研究

目的:探讨中药益肾活血饮对骨髓瘤凋亡的影响及其机理。方法:以阿霉素共培养的骨髓瘤细胞上清作为条件培养液诱发凋亡抵抗(化疗后组),再加入益肾活血饮含药血清(中药+化疗后组),观察其对骨髓瘤细胞HIF-1α表达(免疫印迹法)及继发凋亡抵抗(流式细胞术)的影响。结果:化疗后组骨髓瘤细胞HIF-1α表达上升,凋亡率下降。中药+化疗后组HIF-1α表达低于化疗后组,但较中药组及空白组高;其凋亡率则高于化疗后组,但较中药组及空白组低。结论:益肾活血饮可能通过下调HIF-1,部分逆转骨髓瘤细胞的继发凋亡抵抗。

肿瘤干细胞凋亡抵抗机制的研究进展

证据表明肿瘤干细胞(CSCs)或肿瘤原始细胞是肿瘤形成和进展的关键驱动程序,所以成功的治疗必须清除这些细胞,这些细胞通过它们高抵抗使常规使用治疗模式被阻碍。迄今为止,只有少量的研究发表肿瘤干细胞死亡定向凋亡疗法的潜能和这些细胞凋亡抵抗机制。凋亡抵抗牵涉到内在的细胞机制,例如TRAIL、BCL-2家族。

凋亡抵抗与人肝癌细胞对紫杉醇耐药关系的研究

[目的]体外建立紫杉醇(Taxol)耐药的人肝癌细胞株Hep3B/TAX,并以此为模型对凋亡抵抗现象与紫杉醇耐药的相关性进行研究。[方法]采用浓度梯度间歇刺激法建立Hep3B/TAX耐药细胞株,MTT法检测Hep3B/TAX对紫杉醇的耐药性,流式细胞术检测Hep3B/TAX的细胞凋亡水平,荧光定量PCR检测Hep3B和Hep3B/TAX细胞株中Bcl-2、Bax、caspase3、caspase8和caspase9基因的表达水平,蛋白质免疫印迹(Western-blot)检测Hep3B、Hep3B/TAX细胞株中Bcl-2、Bax、caspase3、caspase8和caspase9的蛋白表达。[结果]Hep3B细胞对紫杉醇的IC50为0.2mΜ,而耐药细胞株Hep3B/TAX对紫杉醇的IC50升为4.33μM。耐药指数(RI)为21.65。流式细胞术结果显示,0.1μM、0.2μM紫杉醇处理24h后,亲本细胞Hep3B的凋亡率显著高于耐药细胞株Hep3B/TAX。RT-PCR结果显示,与Hep3B细胞株相比,Hep3B/TAX细胞株中Bcl-2 m RNA的表达量显著升高(P<0.01),而caspase3、caspase8、caspase9和Bax m RNA的表达量显著降低(P<0.01)。Western-blot实验结果显示,与Hep3B细胞株相比,Hep3B/TAX耐药细胞株的抗凋亡蛋白Bcl-2的表达量显著升高,相关促凋亡蛋白caspase3、caspase8、caspase9和Bax的表达量降低。[结论]成功建立紫杉醇耐药的人肝癌细胞株Hep3B/TAX,人肝癌细胞株Hep3B对紫杉醇耐药的产生与改变凋亡相关因子的表达而导致的凋亡抵抗现象有关。

SATB1通过PI3K/Akt信号通路在哌立福新对胃癌失巢凋亡抵抗细胞作用机制中的研究

目的:探讨人胃癌细胞失巢凋亡抵抗的机制,研究哌立福新对胃癌细胞凋亡抵抗的可能治疗作用以及SATB1通过PI3K/Akt信号通路在哌立福新对胃癌失巢凋亡抵抗细胞中的作用机制。方法:在超低黏附条件下培养胃癌AGS亲本细胞,建立AGS细胞失巢凋亡抵抗模型,检测细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移能力、PI3K/Akt信号通路相关蛋白以及MMP-2、SATB1的表达与亲本细胞的差异;通过MTT、流式细胞术、划痕试验、Transwell试验和Western blot等检测哌立福新对凋亡抵抗AGS细胞生物学行为的影响,抑制信号传导通路及干扰SATB1基因的表达对胃癌失巢凋亡抵抗AGS细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。结果:成功构建了胃癌AGS细胞失巢凋亡抵抗模型。与亲代细胞相比,胃癌AGS细胞失巢凋亡模型的生长速度更快,凋亡率更低,迁移和侵袭能力更强,PIK3CA、Akt mRNA表达增加,PTEN mRNA表达减少,p-Akt、SATB1、MMP-2的蛋白表达增加,PTEN蛋白表达减少。不同浓度的哌立福新作用于凋亡抵抗AGS细胞后,抑制细胞生长,诱导细胞凋亡,抑制细胞迁移和侵袭,p-Akt、MMP-2蛋白表达随哌立福新浓度增加而下降,PTEN蛋白表达逐渐增加。此外,发现哌立福新降低了SATB1蛋白在凋亡抵抗AGS细胞中的表达,SATB1的下调增强了哌立福新介导的抗肿瘤能力。结论:哌立福新可通过PI3K/Akt途径对凋亡抵抗AGS细胞发挥抗癌作用,并且下调SATB1的表达可增强抗癌作用。本次研究可能为胃癌转移提供一种新的潜在的抗肿瘤治疗策略。

肝癌与凋亡抵抗性——肝癌发病进展中的免疫监视逃逸机制

本专辑继 1 1期续完全部内容 ,共载译文 9篇。专辑选译自医学のあゆみ 2 0 0 2 / 1 / 5特集———ウイルス性肝炎の现状と展望。全部由哈尔滨医科大学姚桢教授主译、主审。

恶性淋巴瘤细胞对TRAIL诱导凋亡的抵抗及其分子机制

目的：探讨在体外恶性淋巴瘤细胞对TRAIL（TNF—related apoptosis—inducing ligand）诱导凋亡的抵抗作用及其分子机制。方法：TRAIL处理恶性淋巴瘤U937细胞后，在不同的时间采用MTT法检测药物对细胞的毒性作用；流式细胞术检测细胞周期；Western—blot法检测Bax蛋白质水平变化；实时荧光定量RT—PCR法检测BaxmRNA的表达情况。结果：TRAIL的浓度在500μg／L时可抑制U937的细胞生存，但其抑制率低于正常对照细胞Hmy2．ciR；TRAIL阻滞U937细胞周期于G0／G，期；但这种阻滞效应较Hmy2．ciR细胞明显减弱。Western—blot法检测TRAIL处理的U937细胞Bax蛋白表达水平下降；实时荧光定量RT—PCR法检测BaxmRNA的表达水平却未见差异性改变。结论：TRAIL在诱导恶性淋巴瘤细胞凋亡过程中出现抵抗，这种作用可能与促凋亡蛋白Bax表达水平下降有关。Bax蛋白表达水平的下降可能是由于翻译后修饰导致Bax蛋白降解。

蛋白酶体抑制剂在肿瘤坏死因子相对凋亡诱导配体诱导恶性淋巴瘤细胞凋亡抵抗中的作用及其分子机制

目的探讨体外蛋白酶体抑制剂在肿瘤坏死因子相对凋亡诱导配体（TRAIL）诱导恶性淋巴瘤细胞凋亡抵抗中的作用及其分子机制。方法TRAIL与蛋白酶体抑制剂硼替唑咪（PS-341）处理恶性淋巴瘤Raji细胞后，采用MTF法检测药物不同作用时问对细胞的增生影响；流式细胞术检测细胞周期；Western blotting法检测Bax蛋白质水平变化；实时荧光定量RT—PCR法检测BaxmRNA的表达情况。结果TRAIL在质量浓度500μg／L时可减少Raji细胞的增生，但低于正常淋巴细胞Hmy2．ciR；TRAIL阻滞细胞周期于G0／G1期，Western blotting法检测Raji细胞Bax蛋白表达水平下降，实时荧光定量RT—PCR法检测BaxmRNA的表达水平却未见差异性改变，联合使用浓度为10nmol／LPS-341后可明显提高TRAIL的诱导凋亡作用，阻滞于G0／G1期的细胞数增加，Bax蛋白表达水平也逐渐增加。结论TRAIL在诱导恶性淋巴瘤细胞凋亡过程中出现抵抗，可能与促凋亡蛋白Bax表达水平下降有关，而Bax蛋白表达水平的下降与mRNA表达水平无关，可能与泛素-蛋白酶体途径的降解有关。

关于Bcl-2凋亡蛋白家族的研究进展

正常细胞变成癌细胞的过程中经历了一系列的遗传和表观遗传变化,其中B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/leukemia-2,Bcl-2)在众多的肿瘤细胞中都有高表达,高表达的Bcl-2能形成凋亡抵抗而使癌细胞对化疗产生耐药性,从而使化疗药失去效用。由此可见,针对这些变化的治疗手段可能对肿瘤以及耐药肿瘤有治疗效果。在过去的30年里,无数研究者通过对Bcl-2调控的凋亡通路的研究,促进了一系列拮抗Bcl-2蛋白的小分子化合物的发展。本文就对Bcl-2蛋白的发现、研究、家族情况以及在肿瘤发生发展和治疗中的作用做综述。

细胞衰老与特发性肺纤维化药物治疗研究进展

特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)是一种病因不明的破坏性肺部疾病,它的特点是细胞外基质蛋白(如胶原蛋白和纤连蛋白)在肺间质中沉积,导致呼吸衰竭。我们对IPF的病理生物学的理解仍然不完整;然而,人们普遍认为,衰老是该疾病的主要危险因素。衰老是一个复杂的过程,以不可逆的细胞周期停滞和分泌衰老相关的表型(senescence-associated secretory phenotype,SASP)为特征,导致衰老细胞不断累积和炎症发生。细胞衰老与IPF疾病进展密切相关。该文主要探讨细胞衰老的分子机制,端粒缩短、线粒体功能障碍、自噬不足及细胞凋亡抵抗等细胞衰老相关的各种诱发因素在IPF发病中的作用以及用于治疗IPF疾病的抗衰老药物,为将来治疗IPF提供理论依据和治疗方法。

NARS2在卵巢癌组织中的表达水平及生物学意义

目的研究线粒体转运核糖核酸合成酶2(NARS2)在肿瘤组织中的表达水平及生物学意义。方法采用免疫组织化学技术比较244例卵巢癌及9例正常卵巢组织中NARS2的表达水平,利用Kaplan-Meier模型分析其与患者生存情况的相关性,并进一步利用Seahorse细胞能量代谢分析仪检测NARS2过表达卵巢癌细胞线粒体呼吸功能,采用流式细胞术和蛋白质免疫印迹法检测线粒体相关凋亡。结果 NARS2在卵巢癌组织中的表达水平明显高于正常卵巢组织,且卵巢癌组织中NARS2高表达的患者预后明显差于低表达组,差异均有统计学意义(P<0.05)。高表达NARS2可明显促进线粒体的呼吸功能、电子传递链复合体Ⅰ及Ⅳ的活性,并且明显提高卵巢癌细胞的凋亡抵抗能力。结论 NARS2有望成为一种新型卵巢癌预后评估标志物及药物治疗靶点。

凋亡抑制蛋白Livin在恶性肿瘤中的研究进展

细胞凋亡与增殖的动态平衡是维系机体生长发育、内环境稳定和免疫调节所必需的基本过程,而此平衡破坏所导致的细胞凋亡抵抗则是肿瘤发生发展的重要原因之一。细胞凋亡是一个复杂的细胞程序性死亡过程,涉及一系列复杂的生化反应且受多种分子的调节,

senex基因在急性髓系白血病中的表达及意义

目的探讨senex基因在急性髓系白血病(AML)中的表达水平,并探讨其在AML发生发展中的意义。方法应用实时荧光定量PCR检测senex基因在21例初诊AML患者(初诊组)、27例骨髓完全缓解的AML患者(缓解组)、19例骨髓复发的AML患者(复发组)以及12例对照者(对照组)的骨髓单个核细胞中的表达情况,比较4组之间的基因表达水平差异,并分析senex基因表达水平与临床特征和疗效的关联性。结果初诊组senex基因表达水平高于缓解组(4.06±2.72 vs 2.52±1.83,P=0.04)和对照组(4.06±2.72 vs 1.22±0.48,P=0.001),复发组senex基因表达水平高于对照组(3.27±2.54 vs 1.22±0.48,P=0.017),且各亚型之间以AML-M3的senex基因表达水平最高。AML患者senex基因mRNA表达水平与骨髓原始细胞比例存在相关性(rs=0.557,P=0.000)。此外分析AML初诊患者的临床特征显示1次化疗缓解的患者(n=14)的senex基因表达显著低于1次化疗未缓解的患者(n=7)(1.77±1.47 vs 4.85±2.20,P=0.003),并且1次化疗未缓解的患者预后均较差。结论 senex基因的异常表达可能与AML的发生发展以及预后密切相关。

细胞衰老诱导的抑制性细胞因子累积对DLBCL细胞功能的影响

目的探讨细胞衰老在弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞抵抗化疗中的作用及机制。方法将入组的DLBCL患者分为初诊(ND)组、完全缓解(CR)组、复发/难治(r/r)组。分别应用HE染色和β-半乳糖苷酶染色法检测淋巴结反应性增生患者、r/r DLBCL患者淋巴结组织衰老情况;用β-半乳糖苷酶染色法检测ND、r/r组DLBCL患者外周血中的衰老情况;用10、20、40 nmol/L的阿霉素(DOX)反复诱导DLBCL细胞株LY8衰老,构建衰老模型;CCK-8法检测衰老模型细胞增殖情况;流式细胞术检测衰老模型细胞凋亡情况;ELISA法检测DLBCL患者血清和衰老模型上清液中细胞因子表达。结果r/r组DLBCL患者淋巴结组织及外周血中的衰老细胞明显增多且血清中白细胞介素(IL)-6、IL-8、IL-10、IL-35、转化生长因子-β1(TGF-β1)等促炎性和免疫抑制性细胞因子分泌增加;使用40 nmol/L DOX成功诱导LY8细胞衰老,衰老细胞比例24.77%。对对照组及DOX诱导组进行功能检测,结果提示衰老组细胞增殖率低于对照组但高于10 nmol/L和20 nmol/L DOX组(P<0.05);凋亡率高于对照组但低于10 nmol/L和20 nmol/L DOX组(P<0.05)。同时,各组IL-2、IL-6、IL-8、IL-10、TGF-β1分泌量差异有统计学意义(P<0.05),与对照组比较,衰老组细胞上清液中IL-2、IL-6、IL-8、IL-10、IL-35、TGF-β1等各种促炎和免疫抑制性细胞因子分泌增加。结论细胞衰老通过诱导抑制性细胞因子累积促进DLBCL细胞凋亡抵抗。

低密度脂蛋白受体相关蛋白LRP11在乳腺癌组织中的表达水平及生物学意义

目的研究低密度脂蛋白受体相关蛋白LRP11在人乳腺癌组织中的表达变化及其生物学作用,进而为开发以LRP11为新型预后生物标志物及潜在治疗靶点提供理论线索。方法利用免疫组化检测并比较299例乳腺癌及癌旁正常乳腺组织中LRP11的表达丰度,并利用Kaplan-Meier法分析LRP11表达水平与乳腺癌患者生存相关性。并进一步利用细胞计数、EdU及免疫印迹等方法分析过表达LRP11对乳腺癌细胞增殖的作用及潜在机制。结果癌旁组织中LRP11评分区间为0~9分,平均评分为(1.19±0.32)分。而在乳腺癌组织中LRP11评分区间为0~16分,平均评分为(8.02±0.36)分。LRP11在乳腺癌组织中表达水平显著高于癌旁正常乳腺组织,且癌组织中高表达的LRP11与患者较差预后显著相关(P=0.008)。过表达LRP11可显著激活乳腺癌β-catenin信号,并促进细胞增殖。抑制β-catenin通路,则可减弱LRP11促进乳腺癌细胞增殖的作用。结论LRP11有望成为一种新型乳腺患者预后评估标志物及潜在药物靶点。

14—3—3β在人脑星形细胞瘤中的表达及意义

14—3—3蛋白是一类高度保守的小分子二聚体，研究发现其参与了凋亡、细胞周期调控、细胞信号传导、新生血管形成、细胞骨架构建等多种细胞生理和病理过程。目前，凋亡抵抗、细胞周期调控以及新生血管的形成被认为是胶质瘤发生的重要机制。本实验拟检测人脑星形细胞瘤中14—3—3蛋白B亚型的表达情况，并分析其表达的意义及其与肿瘤恶性程度的关系。