凋亡蛋白酶活化因子-1和星形细胞上调基因-1在胃癌中的表达及临床意义

目的探讨凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)和星形细胞上调基因-1(AEG-1)在胃癌中的表达及临床意义。方法选取2015年9月至2017年12月于新余市人民医院行胃癌切除术及病理证实的50例胃癌患者的胃癌组织和癌旁组织标本,采用免疫组化法测定胃癌及癌旁组织中Apaf-1、AEG-1表达水平,分析Apaf-1、AEG-1表达水平与胃癌患者临床病理特征的关系及Apaf-1与AEG-1表达水平的相关性。结果癌旁组织中Apaf-1阳性表达率(78.00%)高于胃癌组织(20.00%),胃癌组织中AEG-1阳性表达率(82.00%)明显高于癌旁组织(26.00%),差异有统计学意义(P<0.05)。胃癌组织中Apaf-1、AEG-1表达水平均与肿瘤分化程度、浸润深度、TNM分期及淋巴结转移有关(P<0.05),与性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤部位无关;经Spearman相关性分析结果显示,胃癌组织中Apaf-1表达水平与AEG-1表达水平呈显著负相关(r<0,P<0.05)。结论胃癌组织中AEG-1呈高表达,Apaf-1呈低表达,二者与胃癌的疾病进展密切相关,Apaf-1和AEG-1的肿瘤基因检测可能成为治疗胃癌的新靶点,具有较高的研究价值。

口腔鳞状细胞癌中凋亡蛋白酶活化因子甲基化的研究

目的:探讨凋亡蛋白酶活化因子1(APAF1)基因的启动子区甲基化状态与口腔鳞状细胞癌(OSCC)的关系。方法:采用甲基特异性PCR的方法分别检测23例正常口腔黏膜组织和53例OSCC组织中APAF1基因的启动子区甲基化情况。结果:23例正常口腔黏膜组织中无1例检测到APAF1基因启动子区的甲基化,53例OSCC组织中有41例(77.36%)APAF1基因启动子区完全甲基化,5例(9.43%)APAF1基因部分甲基化,总甲基化率为86.79%(46/53),与正常口腔黏膜组织甲基化率比较差异有显著性(P<0.01)。APAF1基因的甲基化与病理分级、年龄、性别无关。结论:APAF1基因启动子区的甲基化是该基因在OSCC组织中表达降低的机制之一,基因甲基化引起的基因功能静默可能与OSCC的发生有关。

凋亡蛋白酶活化因子-1基因在贲门腺癌中的甲基化状态及其临床意义

目的:探讨贲门腺癌(gastric cardiac adenocarcinoma,GCA)中凋亡蛋白酶活化因子-1(apoptosis protease activatingfactor-1,Apaf-1)基因启动子区甲基化状态及其与果蝇zeste基因增强子人类同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)蛋白表达之间的相关性。方法:应用甲基化特异性PCR(methylation specific polymerase chain reaction,MSP)检测GCA组织及癌旁组织中Apaf-1基因甲基化状态,应用免疫组织化学法检测GCA组织及癌旁组织中Apaf-1和EZH2蛋白的表达情况。结果:GCA组织中Apaf-1基因甲基化率显著高于癌旁组织[49.6%(62/125)vs 4.0%(5/125),P<0.01],Ⅲ期和Ⅳ期GCA组织中Apaf-1基因甲基化率显著高于Ⅰ期和Ⅱ期(58.8%vs 38.6%,P<0.05),但GCA组织中Apaf-1基因甲基化率与GCA的组织学分化程度无关(P>0.05)。GCA组织中Apaf-1蛋白表达阳性率显著低于相应癌旁组织(39.2%vs 96.0%,P<0.01),且与Apaf-1基因甲基化状态相关。GCA组织中EZH2蛋白表达阳性率显著高于相应癌旁组织(74.4%vs 11.2%,P<0.01),且与Apaf-1蛋白的表达呈负相关。结论:GCA组织中Apaf-1基因启动子区呈高甲基化,Apaf-1和EZH2蛋白可能共同参与了GCA的发展。

半定量PCR检测口腔鳞状细胞癌凋亡蛋白酶活化因子的表达

目的:探讨凋亡蛋白酶活化因子1(APAF1)基因的表达与口腔鳞状细胞癌(OSCC)的关系。方法:用半定量RT-PCR的方法检测18例正常口腔黏膜组织和32例OSCC组织中APAF1的表达情况。结果:OSCC组织中APAF1的表达显著低于正常口腔黏膜(P<0.01)。结论:APAF1基因可能与OSCC的发生、发展有关,可作为OSCC诊断的检测指标。

垂体腺瘤凋亡蛋白酶活化因子-1基因启动子区甲基化与其mRNA表达

目的研究凋亡蛋白酶活化因子-1(apoptotic protease activating factor-1,APAF-1)基因启动子区甲基化状态及其mRNA表达与临床特征的关系。方法用甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测32例垂体腺瘤组织和6例正常垂体组织APAF-1启动子区甲基化状态与其mRNA表达水平,分析APAF-1基因甲基化和mRNA表达与临床特征的关系。结果正常垂体组织APAF-1基因mRNA表达未见明显下降或升高,启动子区未发生甲基化。垂体腺瘤组织APAF-1基因mRNA表达下调率为56.3%(18例),其表达显著性低于正常垂体组织(P=0.021,P<0.05)。APAF-1基因启动子区甲基化率为43.8%(14例)。APAF-1mRNA表达下调的垂体腺瘤组织中启动子甲基化率显著高于无表达下调者(P=0.009)。侵袭性和非侵袭性垂体腺瘤之间APAF-1基因mRNA表达及其甲基化率均无显著差异。结论垂体腺瘤组织APAF-1基因mRNA表达下调,APAF-1启动子区甲基化和其mRNA表达下调有关。在垂体腺瘤中,APAF-1基因启动子区甲基化可能是一个重要的分子改变,其在垂体腺瘤发生、发展中有重要意义。

活血清下中药对大鼠缺血-再灌注小肠凋亡蛋白酶活化因子-1表达的影响

目的:利用小肠缺血-再灌注动物模型,观察中药对小肠黏膜细胞凋亡的干预作用及对肠屏障的影响。方法:选用健康Wistar大鼠,随机分为正常对照组、模型组、承气合剂治疗组、复方丹参合剂治疗组、活血承气合剂(承气合剂+复方丹参合剂)治疗组。对动物模型再灌注6h、24h、72h时血浆内毒素、小肠黏膜上皮细胞凋亡情况、凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)的表达分别进行检测和观察。结果:与模型组比较,各治疗组对于肠黏膜上皮细胞凋亡均有不同程度的抑制作用,其中活血承气治疗组各观察指标降低明显(P<0.01),效果最佳。结论:小肠缺血-再灌注早期肠黏膜上皮细胞凋亡是造成血中内毒素明显升高、肠屏障功能损伤的主要原因之一。活血清下法可以通过抑制Apaf-1表达来减弱肠黏膜上皮细胞的凋亡,从而达到降低内毒素水平,保护肠屏障功能的作用。

凋亡蛋白酶活化因子1基因在脂肪细胞诱导分化中表达及肿瘤坏死因子-α对其调节作用

目的观察3T3-L1脂肪前体细胞诱导分化过程中（0～10d）凋亡蛋白酶活化因子1（APAF1）基因表达水平的变化趋势，探讨肿瘤坏死因子-α（TNF-α）对成熟脂肪细胞中APAF1基因表达水平的调节作用。方法体外培养3T3-L1脂肪前体细胞，通过油红O染色鉴定其分化成熟的基础上，应用人重组TNF-α．1．0ng·mL^-1干预分化成熟的脂肪细胞，抽提脂肪细胞总RNA和总蛋白后，采用RT-PCR及Westernblot技术检测诱导分化不同时段及TNF-α干预后不同时间（2、6、12和24h）脂肪细胞中APAF1基因的表达水平。结果①3T3-L1前体脂肪细胞诱导分化过程中（0～10d），APAF1基因表达水平呈现逐渐减低的趋势；②人重组TNF-α对成熟脂肪细胞中APAF1基因的表达具有显著的增强作用，且TNF-α对APAF1基因表达的上调作用呈现随刺激时间延长而明显增强的总体趋势。结论①在3T3-L1前体脂肪细胞分化过程中，APAF1基因的表达逐渐下调可能有利于脂肪细胞的分化成熟和脂质积聚；②APAF1基因在人重组TNF-α刺激成熟脂肪细胞过程中呈明显上调趋势，这种上调可能具有协同TNF-α促进成熟脂肪细胞去分化的作用。

染锰大鼠生精细胞凋亡中caspase-3 mRNA、凋亡蛋白酶活化因子-1及多聚ADP核糖聚合酶的表达变化

目的:研究染锰诱导的大鼠生精细胞凋亡过程中,天冬氨酸特异性半胱氨酸酶-3(caspase-3)mRNA和凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)、多聚ADP核糖聚合酶(PARP)的表达及其关系,探讨它们在生精细胞凋亡过程中的作用。方法:雄性SD大鼠,设立空白对照组、低剂量(15 mg/kg MnCl_2)和高剂量(30 mg/kg MnCl_2)组。实验组分别染锰4周和6周,空白对照组给予等容生理盐水,给药途径均为腹腔注射,TUNEL法检测生精细胞凋亡,原位杂交法和免疫组织化学法检测生精细胞caspase-3 mRNA、Apaf-1和PARP的表达。结果:与空白对照组比较,各染锰组生精细胞凋亡指数(AI)和caspase-3mRNA阳性细胞率均显著升高,Apaf-1和PARP阳性细胞率均显著降低。染锰剂量相同,6周与4周组比较,以及染锰时间相同,高剂量组与低剂量组比较,生精细胞AI和caspase-3 mRNA阳性细胞率均显著升高,Apaf-1和PARP阳性细胞率均显著降低。各组大鼠生精细胞AI与caspase-3 mRNA阳性细胞率呈正相关,与Apaf-1和PARP阳性细胞率呈负相关。结论:锰可影响大鼠生精细胞caspase-3 mRNA表达,促进Apaf-1和PARP分解,导致生精细胞凋亡,产生生殖毒性效应。

凋亡蛋白酶活化因子-1与肿瘤相关性的研究进展

凋亡蛋白酶活化因子-1(apoptotic protease activating factor-1,Apaf-1)作为细胞凋亡的核心因子,在线粒体凋亡途径中起着极其关键的作用.Apaf-1启动子甲基化和杂合性缺失是肿瘤发生的最主要因素,Apaf-1表达下调与多种恶性肿瘤的发生发展密切相关,其表达情况可作为肿瘤浸润深度、淋巴结转移及肿瘤分化不良等预后不佳的标志物,Apaf-1也可作为抗癌治疗和判断预后的靶分子.对其深入研究将有助于对抗肿瘤药物的研制.本文就Apaf-1的生化结构和功能、信号转导通路以及近年来关于Apaf-1在多种肿瘤中的表达、肿瘤的发生机制及其在肿瘤的耐药与治疗中的作用等方面的最新研究进展作一综述.

毛蕊异黄酮通过Cyt-C/Apaf-1信号通路抑制实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠中枢神经细胞凋亡

目的:观察毛蕊异黄酮(CA)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠中枢神经细胞凋亡的影响,并探索其可能的作用机制。方法:取45只C57BL/6小鼠,随机选取10只作为假手术组,剩余小鼠建立EAE模型,建模成功后随机分为EAE组(10只)、CA组(10只)、联合组(11只)。联合组腹腔注射CA(20 mg/kg),尾静脉注射细胞色素C(Cyt-C)激动剂抗霉素A(AA,100μg/kg);CA组腹腔注射CA(20 mg/kg),尾静脉注射等体积PBS;假手术组、EAE组腹腔注射等体积PBS,尾静脉注射等体积PBS,1次/d,持续14 d。进行神经障碍评分;检测脊髓组织三磷酸腺苷(ATP)含量;透射电镜观察线粒体超微结构;Tunel染色观察脊髓神经细胞凋亡;HE染色观察脊髓病理改变;Western blot检测脊髓组织Cyt-C、凋亡蛋白酶活化因子(Apaf-1)蛋白表达。结果:与EAE组比较,CA组小鼠神经障碍评分、脊髓神经细胞凋亡率、Cyt-C、Apaf-1蛋白表达降低,脊髓组织ATP水平升高(P<0.05);与CA组比较,联合组小鼠神经障碍评分、脊髓神经细胞凋亡率、Cyt-C、Apaf-1蛋白表达升高,脊髓组织ATP水平降低(P<0.05)。结论:CA可减少EAE小鼠中枢神经细胞凋亡,促进脊髓损伤修复,减轻线粒体损伤,可能通过抑制Cyt-C/Apaf-1信号通路发挥作用。

线粒体/细胞色素C介导的凋亡通路的研究进展

线粒体凋亡途径在细胞凋亡信号转导途径中是近年来研究的热门。细胞内外各种刺激信号引起Bcl-2同源结构域3(Bcl-2 homology domain3,BH3)-only蛋白激活,通过Bcl-2家族(B celllymphoma 2)调控线粒体,使线粒体外膜渗透而导致细胞色素C及(second mitochondrial-derived activa-tor of caspase,Smac)流入胞质与凋亡活化因子-1(apoptosis activated factor-1,Apaf-1)及胱天蛋白酶-9(caspase-9)结合形成复合体。caspase-9的激活将引起其下游胱天蛋白酶的级联反应,导致该细胞凋亡。这一过程中有一系列反馈调节如Smac对凋亡抑制蛋白(IAP)的抑制等。

X连锁凋亡抑制蛋白和线粒体第二激活因子在锰诱导大鼠生精细胞凋亡蛋白酶表达中的调节作用

目的:研究氯化锰导致的大鼠生精细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9)及凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)表达中X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)和线粒体第二激活因子(Smac)的调节机制,探讨锰导致的雄性不育机制。方法:雄性SD大鼠随机分为对照组、低剂量(15 mg/kg MnCl_2)和高剂量(30 mg/kg MnCl_2)组,腹腔注射MnCl_2 4周和6周,免疫组织化学检测生精细胞caspase-9、Apaf-1、XIAP和Smac表达。结果:与对照组相比较,各组生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达均显著升高,XIAP表达降低。同时间的高剂量组与低剂量组比较,同剂量的6周组与4周组比较,生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达均显著升高,XIAP表达降低。各组caspase-9与Apaf-1表达呈正相关,XIAP与Smac表达呈负相关。结论:锰可促进生精细胞caspase-9、Apaf-1和Smac表达,抑制XIAP表达,导致细胞凋亡,产生雄性生殖毒性效应。

2型糖尿病大鼠辛伐他汀灌胃治疗后胸主动脉壁细胞凋亡情况及细胞凋亡相关基因、活性氧簇表达观察

目的观察2型糖尿病(T2DM)大鼠辛伐他汀灌胃治疗后胸主动脉壁细胞凋亡情况及细胞凋亡相关基因、活性氧簇(ROS)表达情况。方法随机选取40只大鼠,予高脂饲料喂养,8周后采用尾静脉注射STZ(30mg/kg)诱导方法制备T2DM模型;将最终造模成功的34只大鼠按体质量、血糖分层随机分为辛伐他汀组、模型组各17只。另选取20只大鼠作为正常对照组,给予标准饲料喂养。根据人鼠等效剂量,辛伐他汀组每日以1. 05mg/(kg·d)辛伐他汀溶液灌胃1次,模型组和正常对照组每日以等量无菌饮用水灌胃1次,灌胃16周,后处死取大鼠胸主动脉。电镜下观察胸主动脉内皮细胞病理变化;实时荧光定量PCR方法检测胸主动脉内皮细胞细胞凋亡活化因子-1(Apaf-1)、细胞凋亡诱导因子(AIF)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、Bcl-2、Bax mRNA,酶联免疫吸附法检测ROS。结果电镜下可见,正常对照组内皮细胞细胞核清晰,形态完整,有条索样连接紧密、连续;模型组内皮细胞可见明显细胞核固缩、线粒体肿胀,及内皮细胞碎片;辛伐他汀组较模型组病理损伤较轻,内皮细胞相对连续,完整,有轻度肿胀。PCR结果显示,与正常对照组比较,模型组Apaf-1、AIF、Caspase-3、Bax mRNA及ROS表达升高,Bcl-2 mRNA表达降低(P均<0. 05);与模型组比较,辛伐他汀组模型组Apaf-1、AIF、Caspase-3、Bax mRNA及ROS表达降低,Bcl-2 mRNA表达升高(P均<0. 05)。结论 T2DM大鼠辛伐他汀灌胃治疗后,可明显减轻内皮细胞核固缩,线粒体肿胀,机制可能为下调Apaf-1、AIF、Caspase-3、Bax mRNA及ROS表达,上调Bcl-2 mRNA表达。

肠缺血—再灌注大鼠模型肠黏膜上皮细胞凋亡的观察

健康Wistar大鼠40只,随机分为正常对照组(Cont.)及缺血—再灌注6h模型组(M1)、24h模型组(M2)、72h模型组(M3),每组10只,对血浆内毒素、小肠黏膜上皮细胞凋亡情况、Apaf-1的表达以及Bcl-2的表达分别进行检测和观察。与Cont.组比较,各模型组血浆内毒素水平、凋亡指数、Apaf-1阳性细胞表达率明显增高(P<0.05),并随再灌注时间延长逐渐下降;而各模型组Bc l-2阳性细胞表达率明显低于Cont.组(P<0.05),并随再灌注时间延长逐渐上升。认为在缺血-再灌注早期,通过Apaf-1和Bc l-2等凋亡因子作用肠黏膜上皮细胞产生大量病理性凋亡,造成肠道机械屏障的破坏,使肠道细菌和内毒素发生易位。

细胞凋亡途径及其机制

细胞凋亡存在于多细胞生物的整个生命过程当中,可及时清除机体内多余和受损伤的细胞,维持组织器官的稳定性。真核细胞主要通过死亡受体介导的外部凋亡途径、内部线粒体途径、B粒酶介导的细胞凋亡途径以及近几年开始关注的内质网应激途径介导细胞凋亡的发生。而参与这些细胞凋亡过程的主要有4类蛋白分子,即凋亡蛋白酶(caspases)、衔接蛋白(adapter proteins)、Bcl-2和凋亡抑制蛋白(IAPs)。细胞凋亡对卵巢储备及一些妇科疾病如子宫内膜异位症、卵巢癌等的发生发展产生影响。

食管鳞癌中凋亡相关蛋白激酶1基因甲基化及其蛋白表达

目的探讨食管鳞癌中凋亡相关蛋白激酶1(DAPK1)基因CpG岛甲基化及其蛋白表达与食管癌的相关性。方法收集食管鳞癌组织58例及癌旁上皮组织30例。采用免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白过氧化物酶(SP)法检测DAPK1蛋白表达,甲基化特异性聚合酶联反应(MSP)法检测基因CpG岛甲基化状态。结果DAPK1在癌组织的阳性表达率明显低于癌旁组织(36.2%vs 63.3%,P<0.05);癌组织中DAPK1甲基化率明显高于癌旁组织(60.3%vs 33.3%,P<0.05),提示DAPK1基因启动子甲基化与DAPK1蛋白表达呈负相关(χ2=18.362,P=0.000,r=-0.563)。结论DAPK1基因启动子甲基化减少其蛋白的表达,可能与食管癌的发生发展相关。

微小RNA-221靶向凋亡蛋白酶活化因子1对神经胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨微小RNA(miRNA,miR)-221对神经胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法选取2015年6月到2018年9月期间南阳市中心医院和河南中医药大学第一附属医院手术切除的脑胶质瘤和相应的癌旁组织作为研究对象,采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析肿瘤组织和癌旁组织中miR-221的表达水平。在脑胶质瘤细胞株U251建立miR-221沉默细胞株(miR-221沉默组)和对照细胞株(miR-control组)。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色测定miR-control组和miR-221沉默组细胞的增殖能力。体外移植瘤实验测定两组细胞在裸鼠体内的生长速度。采用凋亡检测试剂盒测定两组细胞的凋亡水平。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-221的靶基因。组间数据比较采用t检验。结果与癌旁组织(1.21±0.16)比较,脑胶质瘤组织中miR-221表达水平(3.01±0.19)显著增加,差异有统计学意义(t=2.991,P<0.05)。与miR-control组细胞(1.89±0.22)比较,miR-221沉默组细胞增殖能力(1.16±0.18)明显下降,差异有统计学意义(F=2.618,P<0.05)。与miR-control组细胞EdU染色阳性率(56.33±9.18)%比较,miR-221沉默组细胞EdU染色阳性率(22.12±7.10)%显著下降,差异有统计学意义(F=2.418,P<0.05)。miR-control组细胞在裸鼠体内生长速度明显高于miR-221沉默组细胞,差异有统计学意义(F=2.011,P<0.05)。与miR-control组细胞凋亡率(3.17±0.78)%比较,miR-221沉默组细胞凋亡水平(21.33±3.09)%明显增加,差异有统计学意义(t=3.712,P<0.05)。生物信息学分析显示凋亡蛋白酶活化因子1(APAF1)是miR-221的靶基因。与miR-control组(0.78±0.13)比较,miR-221沉默组细胞APAF1蛋白表达水平(2.39±4.91)显著增加,差异有统计学意义(t=3.991,P<0.05)。结论miR-221通过靶向凋亡激活蛋白APAF1,调节脑胶质瘤细胞的增殖和凋亡。

前列腺癌组织凋亡蛋白酶活化因子1和bax的表达及其临床意义

目的：探讨凋亡蛋白酶活化因子1（Apaf-1）和bax在前列腺癌和前列腺增生组织中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学法检测45例前列腺癌患者和60例前列腺增生患者Apaf-1和bax的表达。结果前列腺癌中Apaf-1和bax的阳性率分别为22.22%（10／45）、20.00%（9／45），低于前列腺增生组织的48.33%（29／60）、46.67%（28／60），差异均有统计学意义（χ2值分别为7.509、8.013，均P＜0.05）。 Apaf-1和bax的表达和前列腺癌患者年龄及是否远处转移无关（P＞0.05），与病理分级及临床分期相关（P＜0.05），Apaf-1和bax在前列腺癌组织中的表达呈正相关性（r＝0.535， P＜0.001）。结论 Apaf-1和bax可能与前列腺癌的发生、发展密切相关。